草莓连作根腐病原菌及根际真菌群落变化多样性研究

草莓是一种兼具营养和经济价值的水果,草莓连年栽培导致连作障碍发生严重,发病率逐渐增加,严重影响了草莓的产量。从连作3年且患有根腐病的草莓根际土壤中分离出病原菌,经鉴定分别为Fusarium pseudocircinatum、Fusarium solani、Fusarium luffae、Aspergillus westerdijkiae、Cladosporium oxysporum、Ectophoma multirostrata、Neopestalotiopsis rosae和Neocosmospora rubicola。进一步对连作前后草莓根际土壤真菌变化进行分析,结果表明,连作后真菌总数量下降,在属水平上,Pulvinula、Aspergillus、Acremonium、Funneliformis、unclassified_Cercozoa和unclassified_Pezizaceae等真菌的相对丰度均显著或极显著增加,unclassified_Hypocreales、Mortierella和Rhizophlyctis等真菌的相对丰度均显著或极显著降低。对连作后土壤的理化性质进行检测,结果表明,有机质含量极显著降低,全磷、硝态氮含量极显著增加,pH值显著增加。这说明土壤理化性质的改变和优势菌种的更替都是导致草莓连作障碍发生的原因,可为防治草莓根腐病和连作障碍提供科学依据。

健康与罹病三七内生真菌的分离鉴定及其群落特征差异分析

[目的]本文旨在探究健康与罹患根腐病三七内生真菌群落特征差异及在不同植株部位的分布特征与随生长年限的变化规律。[方法]选取1年、2年生健康与罹患根腐病的三七植株,采用组织分离法对其根、茎部位的内生真菌进行分离,基于形态特征和ITS序列分析对分离得到的菌株进行分类鉴定,并对内生真菌群落组成及多样性特征进行分析。[结果]共分离获得966株内生真菌,经鉴定隶属于3门、5纲、14目、25科、31属。从菌株分离数及分离率看:罹病植株>健康植株,2年生>1年生,根部>茎部。健康和罹病三七的可培养内生真菌组成存在明显差异,其中曲霉属、耙齿菌属、毛壳属和青霉属在健康三七内生真菌群落中占主导,而镰刀菌属、曲霉属、篮状菌属、毛壳属和木霉属是罹病三七内生真菌的优势属。植株部位对三七内生真菌群落组成具有明显影响,其中罹病三七根部镰刀菌属的分离频率高达52%,显著高于其茎部的11.2%,且在罹病三七根部大量分离到木霉属和篮状菌属等有益真菌,其分离频率分别为11.0%和14.5%,而三七茎部内生真菌群落多样性、丰富度和均匀度均高于根部。此外,随着生长年限的增加,三七内生真菌群落的发育更加完善,健康和罹病三七内生真菌群落组成及多样性特征也随之变化,其中尖孢镰刀菌和腐皮镰刀菌在罹病三七植株中的分离频率大幅增加,达到14.5%和32.9%。健康三七内生真菌多样性、丰富度和均匀度随生长年限增加逐渐上升,而罹病三七内生真菌多样性和均匀度逐渐降低。[结论]三七植株内生真菌多样性丰富,健康和罹病三七可培养内生真菌定殖数量及群落组成具有显著差异,且植株部位与生长年限均对三七可培养内生真菌群落特征具有显著影响。

鄂西北烟草根腐病病原菌的分离及鉴定

镰刀菌属引起的根腐病是烟草的重要病害,根腐病危害严重可导致烟草产品质量和产量出现重大损失。为明确鄂西北烟草根腐病病原,从湖北十堰烟区采集典型症状标本分离病原菌,对其进行了形态学和分子生物学鉴定,结合基因系统发育学分析和致病性验证,确定鄂西北烟草根腐病的病原为尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌、木贼镰刀菌和接骨木镰刀菌。

内蒙古自治区紫花苜蓿根腐病病原菌鉴定

为明确内蒙古自治区紫花苜蓿根腐病的主要病原菌种类,从内蒙古自治区5市12个样点采集紫花苜蓿根腐病病样,采用常规组织分离法对病原菌进行分离与纯化,利用形态学结合ITS和EF-1α基因序列鉴定分离物种类,按照柯赫氏法则测定其致病性。结果显示,5市12个样点共分离出425株真菌,按照菌株的菌落和分生孢子形态,结合基因序列鉴定为5属17种,分别为锐顶镰刀菌(Fusarium acuminatum)、茄病镰刀菌(F. solani)、木贼镰刀菌(F.equiseti)、变红镰刀菌(F. incarnatum)、尖孢镰刀菌(F. oxysporum)、燕麦镰刀菌(F. avenaceum)、轮枝镰刀菌(F.verticillioides)、层出镰刀菌(F. proliferatum)、F. falciforme、F. neocosmosporiellum、三线镰刀菌(F. tricinctum)、F.virguliforme、芬芳镰刀菌(F.redolens)、立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、织球壳枯萎菌(Plectosphaerella cucumerina)、茎点霉(Phoma medicaginis)和根异茎点霉(Paraphoma radicina),其中轮枝镰刀菌、F. falciforme、F.neocosmosporiellum和F. virguliforme引发苜蓿根腐病在世界范围内首次报道。致病性测定表明,17种真菌均能够引起紫花苜蓿根腐病。紫花苜蓿根腐病可由单一病原菌或2~4种病原菌复合侵染引起,且不同地区的致病种群结构不同,但优势致病种均为锐顶镰刀菌。

枯草芽孢杆菌对土壤真菌群落结构及草莓根腐病的调控作用

为探究施用枯草芽孢杆菌对土壤真菌群落结构和作物生长的调控作用,本研究采用高通量测序技术分析枯草芽孢杆菌对草莓根际土壤真菌群落多样性和群落结构的影响,通过田间小区试验测定其对草莓根腐病的防治效果和对草莓的促生长作用。结果表明,施用枯草芽孢杆菌显著提高草莓根际土壤真菌多样性,Shannon指数、Ace指数和Chao指数显著上升,Simpson指数显著下降;门水平上子囊菌门(Ascomycota)相对丰度明显增加,担子菌门(Basidiomycota)和被孢菌门(Mortierellomycota)相对丰度明显减少;属水平上优势菌属毛壳菌属(Chaetomium)相对丰度明显增加,被孢霉属(Mortierella)、Tausonia和织球壳菌属(Plectosphaerella)相对丰度明显降低;枯草芽孢杆菌能有效降低草莓根腐病的发病率,定植2个月内的防治效果在70%以上,并显著提高草莓冠径、叶面积及叶绿素含量等生长指标值。综上,枯草芽孢杆菌能够增加草莓根际土壤中有益菌相对丰度,减少致病菌相对丰度,优化土壤真菌群落结构,有效防治草莓根腐病,促进草莓健康生长。

卷丹百合根腐病植株与健康植株根际土壤真菌群落结构差异

【目的】揭示卷丹百合感染根腐病后根际土壤真菌群落结构、多样性变化,为进一步探明根腐病的微生态发病机理和生防菌的筛选及应用提供理论依据。【方法】分别对连作多年地块上患根腐病和健康卷丹百合根际土壤中真菌的ITS1基因进行扩增,并采用高通量测序技术进行测序,分析健康与患病百合根际土壤真菌物种组成及多样性。【结果】α多样性结果显示,卷丹百合健康与患根腐病根际土壤中的真菌群落丰富度、均匀度和多样性无显著差异。PCA分析结果显示,患根腐病百合与健康百合根际真菌群落物种组成存在差异。患根腐病与健康百合根际真菌优势菌门为子囊菌门;散囊菌纲、银耳纲、刺盾炱目、银耳目、小疱毛壳科、丛赤壳科、外瓶霉属等在患病百合根际中相对丰度显著高于健康百合。LEfSe分析结果显示,子囊菌门与Ilyonectria分别在患病与健康百合根际土壤中差异最大;Arcopilus、角菌根菌属、Ascobolus、Paraphaeosphaeria等14类菌群为健康百合根际的标志物种。【结论】连作多年地块健康百合与患根腐病百合根际真菌群落结构有明显差异。卷丹百合根腐病的发生可能与根际土壤中真菌物种结构的改变,尤其是散囊菌纲、外瓶霉属等有害真菌的增殖密切相关。卷丹百合根际土壤中存在大量潜在益生真菌,是进一步筛选根腐病生防菌的潜在资源。

丛枝菌根真菌联合拮抗菌对花椒根腐病的防治作用

【目的】探究丛枝菌根真菌联合2种拮抗菌对花椒根腐病的生物防治效果,为解决花椒根腐病提供理论依据。【方法】将丛枝菌根(Arbuscular mycorrhiza,AM)真菌异形根孢囊霉(Rhizophagus irregularis)、草酸青霉HB21⁃1(Penicilium oxalicum)、枯草芽孢杆菌HX11(Bacillus subtilis)以单独或联合接种的方式,开展花椒根腐病的盆栽防效试验,以评价不同组合处理下的防治效果,并以染色镜检法测定AM真菌侵染率,再分别测定花椒根部防御酶活性、土壤酶活性初步探究生防机制。【结果】病原菌单独处理下的花椒根腐病发病率为86.67%,AM真菌+HB21⁃1+HX11联合处理下的花椒根腐病发病率最低,为13.33%,防治效果达78.89%,其次为HB21⁃1+HX11、AM真菌+HB21⁃1处理,防治效果分别为62.78%和57.12%。AM真菌+HB21⁃1+HX11处理下的AM真菌侵染率最高,为52.22%,而AM真菌单独处理下的侵染率最低,为24.89%。60 d时AM真菌+HX11处理下的花椒根部SOD、PAL酶活性最高,AM真菌+HB21⁃1处理下的花椒根部POD酶活性最高,且植株防御酶活性随时间均呈上升趋势。AM真菌、枯草芽孢杆菌HX11能促进土壤酸性磷酸酶、脲酶活性随时间显著升高,草酸青霉HB21⁃1能促进土壤蔗糖酶活性显著升高。【结论】AM真菌+草酸青霉HB21⁃1+枯草芽孢杆菌HX113种生防菌联合处理对花椒根腐病的防治效果最好,且该菌株组合处理下的AM真菌侵染率最高。随时间推移,AM真菌和拮抗菌处理下的花椒根部POD、SOD和PAL酶活性均呈上升趋势,且土壤酸性磷酸酶、脲酶活性也呈上升趋势,土壤蔗糖酶活性稍有下降,但均高于病原菌处理组,表明AM真菌、HB21⁃1和HX11能不同程度地诱导花椒植株防御酶活性、土壤酶活性的升高,具备一定的生防应用潜力。

油茶根腐病与丛枝菌根真菌群落的相关性分析

【目的】探究德宏州油茶根腐病不同发病程度根系内以及根际土壤中丛枝菌根真菌多样性和差异性。【方法】分别采用染色法和湿筛沉淀法测定油茶根系AMF定殖率和根际土壤孢子密度,采用Illumina高通量测序技术对油茶根系及根际土壤AMF多样性和群落结构进行分析。【结果】随着发病程度的加重,AMF的定殖率和孢子密度逐级递减,呈负相关。基于高通量结果在油茶根系以及根际土壤中共检测到203个AMF⁃OTUs,分属于1门1纲4目7科5属(属水平将未定名和未分类的AMF归入“Oth⁃ers”)。在属分类阶层上,不同病害等级的油茶根系以及根际土壤的AMF种类和分布不同。根系内:发病程度较轻的油茶较发病程度严重的油茶,OTUs、Ace指数、Chao指数更高,且随病害的加重Shannon指数呈现逐级递减的趋势(HR0>DR1>DR2>DR3>DR4)。根际土壤内:随病害程度的加重,OTUs逐级递减(HS0>DS1>DS2>DS3>DS4),发病程度较轻的油茶较发病程度严重的油茶,Ace指数、Chao指数更高,Shannon指数无明显变化。PCA分析表明不同病害等级的油茶AMF群落结构会发生改变,患病后群落结构趋于相似,与健康油茶有明显差异。AMF均匀度、孢子密度和定殖率与土壤理化性质存在相关性,但土壤理化性质不影响AMF的丰富度和多样性指数。【结论】初步探明了患病后油茶根系和根际土壤中AMF群落的变化特征:患病的油茶根系内AMF的定殖率和多样性降低,根际土壤内AMF孢子密度下降,同时根系及根际土壤中AMF群落结构都发生了改变,本研究为筛选具有拮抗作用的AMF菌剂防治油茶病害奠定了理论基础。

基于传统分离和高通量测序的健康和患锈腐病西洋参根际土壤微生物群落分析

探究健康和患锈腐病西洋参根际土壤微生物的群落多样性和可培养菌株分离,以期为西洋参锈腐病发生机制及防控提供参考。利用传统分离技术和高通量测序技术分析健康和患锈腐病西洋参的根际土壤,探究其微生物的群落组成及多样性变化。经由传统分离技术合计得到24株细菌和25株真菌,优势菌属包括假单胞菌属(Pseudomonas)、芽孢杆菌属(Bacillus)和青霉菌属(Penicillium)。高通量测序结果显示,健康和锈腐病土壤中细菌群落均以蓝细菌门(Cyanobacteria)和变形门(Proteobacteria)为主;患锈腐病组有所降低的为蓝细菌门(Cyanobacteria)、软壁菌门(Tenericutes)和变形菌门(Proteobacteria),大幅上调的为拟杆菌门(Bacteroidetes)、酸杆菌门(Acidobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)与厚壁菌门(Firmicutes)。健康和锈腐病土壤内所含的真菌群落以子囊菌门(Ascomycota)为主,被锈腐病感染后有所上调的为担子菌亚门(Basidiomycota)、子囊菌门(Ascomycota)与被孢霉门(Mortierellomycota)。感染锈腐病根际土壤细菌多样性明显减少。研究表明健康和锈腐病土壤微生物群落组成与数量明显不同,为西洋参锈腐病的发病机制及防控技术提供了理论依据。

辣椒根腐病生防菌的筛选鉴定及生防作用

为获得高效的辣椒根腐病生防菌,从健康辣椒根际土壤中分离出真菌菌株,通过与辣椒根腐病病原菌茄镰刀菌(Fusarium solani)进行对峙培养,筛选出对茄镰刀菌抑制率达到79.29%的生防菌株M20210527-2。结合形态学及ITS分子生物学分析,将菌株M20210527-2鉴定为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)。菌株M20210527-2可通过重寄生、快速争夺生长空间以及分泌抗真菌代谢产物来高效抑制茄镰刀菌的生长。菌株M20210527-2处理对辣椒根腐病相对防效高达94.25%,可显著降低根腐病发病率和严重程度。培养条件研究表明,菌株M20210527-2最适生长温度为25℃,最佳pH为6~7,最适生长碳源为蔗糖、葡萄糖和淀粉,最适生长氮源为蛋白胨、酵母粉和牛肉膏。

宁夏枸杞根腐病不同发病时期根区土壤AMF群落变化规律

根腐病是宁夏枸杞毁灭性病害,丛枝菌根真菌(AMF)能通过与植物共生提高植物对病原菌的抗性,探明根腐病发生与宁夏枸杞根区土壤AMF的关系是应用AMF防控宁夏枸杞根腐病的基础。采用湿筛倾析法和染色法分析宁夏枸杞根腐病不同发病时期根区土壤理化性质、AMF群落组成、孢子密度、定殖率等,旨在揭示宁夏枸杞根腐病不同发病时期根区土壤AMF群落变化规律。结果表明:随着根腐病发病程度的加重,宁夏枸杞根区土壤全氮含量增高,全钾、速效钾含量降低;AMF孢子密度先增加后降低,发病前期和中期比未发病和发病后期增加了31.32%~49.48%;AMF定殖率、易提取球囊霉素相关土壤蛋白含量、总球囊霉素相关土壤蛋白含量增加,均在发病中期和后期达到最高;α-多样性指数先升高后下降,以发病前期最高;球囊霉属AMF和无梗囊霉属AMF多度在所有发病时期均低于未发病,隔球囊霉属刚好相反,根孢囊霉属则是先增高后降低。在宁夏枸杞根区土壤降氮增钾,接种球囊霉属和无梗囊霉属AMF可能防控根腐病发生。

土壤病原菌对连作大豆的致病性初探

研究了正茬及重茬大豆根际土壤中微生物区系的变化。结果表明：细菌总数在整个大豆生育期内占绝对优势，重茬低于正茬。放线菌数量总体变幅不大，真菌数量变化很大，重茬高于正茬。连作大豆根际土壤中有益真菌减少，有害真菌增加。真菌优势菌群中的尖镰孢菌、半裸镰孢菌和粉红粘帚菌回接大豆，均产生不同程度的致病性，导致大豆根腐病的发生，花期前后（３８～５０ｄ）病症明显。半裸镰孢菌和粉红粘帚菌对大豆的致病性及导致根腐病的发生尚未见资料报道。

花生根系分泌物对根腐镰刀菌和固氮菌的化感作用研究

采用连续收集法提取到花生植株的根系分泌物,并就花生根系分泌物对根腐镰刀菌36194和固氮菌14046的化感作用进行了初步研究。结果表明,花生根系分泌物的中性、酸性和碱性组分对根腐镰刀菌菌丝的生长均存在一定的化感促进作用,对固氮菌的生长存在一定的化感抑制作用,并随添加浓度的增加化感作用增强。中性组分的化感作用相对更强些。GC-MS分析显示中性组分共含有2,4-二甲基苯甲醛、月桂酸、豆寇酸、软酯酸、油酸、硬酯酸等6种主要成分。

苜蓿根腐病生防真菌筛选鉴定及其防治效果研究

根腐病是苜蓿(Medicago sativa)生产中的重要限制性病害,应用生物技术对其进行防治对环境友好型可持续农业具有重要意义。本研究从不同地区苜蓿根际土壤中分离得到的95株真菌中筛选出了2株对根腐病病原菌抑菌率较高的菌株,经鉴定,2株拮抗真菌ZY56和GY37分别为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)和康宁木霉(Trichoderma koningii)。对2株菌株的拮抗能力及盆栽防效的测定结果表明:2株菌株对4种镰刀菌(Fusarium spp.)均有较好的抑制效果,其7 d抑菌率在54.9%~75.3%之间,其中ZY56对尖孢镰刀菌(F.oxysporum)和半裸镰刀菌(F.semitectum)的抑菌率较高,而GY37对燕麦镰刀菌(F.avenaceum)和腐皮镰刀菌(F.solani)的抑菌效果更好;ZY56对盆栽苜蓿根腐病的防效显著高于多菌灵,达到66.4%,且促进生根效果明显,GY37也具有良好的防治效果,防效为55.1%。

两种基因型大豆根分泌物对大豆根腐病菌的化感作用

采用生物模拟试验、化学分析等方法,研究了两种大豆基因型(9536、吉林30)的根分泌物中的糖、氨基酸、有机酸组分对大豆根腐病菌的化感作用.结果表明,两种大豆基因型(9536、吉林30)根分泌物糖组分表现出低浓度显著促进、高浓度显著抑制半裸镰孢菌、尖镰孢菌生长的规律,对粉红粘帚菌的生长影响不明显;氨基酸组分对上述三种病原菌所表现出的促进、抑制规律不同,9536基因型根分泌物氨基酸组分的中、高浓度处理对半裸镰孢菌、粉红粘帚菌、尖镰孢菌的生长表现出显著的抑制作用,而吉林30多表现出显著的促进作用;有机酸组分对半裸镰孢菌、粉红粘帚菌、尖镰孢菌生长都有显著的抑制作用.两种基因型大豆根分泌物(糖、氨基酸、有机酸组分)与根腐病害发生密切相关,大豆基因型不同,根分泌物对根腐病菌的化感促进或抑制作用有差异.

花生根系腐解物对根腐镰刀菌和固氮菌的化感作用研究

[目的]研究花生根系腐解物对花生根腐镰刀菌36194和固氮菌14046的化感作用。[方法]采用培养箱培养的方法得到了不同连作年限的花生根系腐解物,灭菌后添加到花生根腐镰刀菌和固氮菌的培养基中,测定花生根系腐解物对二者生长的影响。[结果]花生根系腐解物对根腐镰刀菌菌丝的生长均有一定的化感促进作用,对固氮菌的生长有一定的化感抑制作用,且化感作用随添加浓度和连作年限的增加而增强。[结论]连作条件下花生根系残茬在土壤中的累积及其腐解物对土壤微生物的化感作用很可能是导致花生连作障碍的原因之一。

植物提取物对草莓根腐病病原真菌的抑制作用

利用4种葱属植物(大蒜、韭菜、洋葱、葱、)的水提物和8种常见中草药(丁香、大黄、黄连、连翘、生地、桔梗、生姜、花椒)的水煎剂对引起草莓根腐病的2种主要病原真菌进行了体外抑制实验.结果表明:大蒜和韭菜的水提物以及丁香和大黄的水煎剂在较高浓度下对立枯丝核菌和胶胞炭疽菌均有较强的抑制作用,在较低浓度下则无明显影响或有轻微的促进病菌生长的作用;连翘的水煎剂在多种浓度下均只对胶胞炭疽菌有极强的抑制作用,对立枯丝核菌无明显影响.

牡丹根腐病及其防治的研究

从牡丹园9批64个受病害牡丹样品中分离获得137个分离物,经筛选、纯化、回接试验,依其培养性状和形态特征,将病原菌鉴定为茄腐皮镰孢霉(Fusarium solani).病原菌以菌丝和分生孢子在根部越冬,5～7月为发病盛期.病害的发生与牡丹重茬、土壤酸碱度等因子密切相关.经室内毒力测定和田间药效试验,筛选出了绿亨1号、绿亨2号和50%多福可湿性粉剂等防治根腐病的有效药剂,在新牡丹园防治效果达90%左右,感病指数控制在5左右,对老牡丹园防治效果80%左右,感病指数控制在10左右.

番荔枝根腐病病原菌的鉴定及其生防真菌的筛选

番荔枝根腐病是番荔枝的严重病害。在广东湛江番荔枝果园中,从病根中分离到了5种不同的真菌菌株,其中有致病力的3种:寄生疫霉(Phytophthoraparasitica)、棕榈疫霉(P.palmivora)、镰刀菌(Fusariumsp.),镰刀菌的致病力最强,寄生疫霉次之,棕榈疫霉的致病力较弱。致病力测定表明了以上二3种真菌菌株均有可能为湛江番荔枝根腐病的病原菌。分别以各病原菌为靶标,用对峙培养法,从果园健康番荔枝的根际土壤和果实、叶片筛选到了3个对上述病原物都有较强拮抗活性的生防菌株,经初步鉴定均为木霉菌(Trichodermasp.)。防效测定表明,这些拮抗菌株均有很好的防效,是极具开发潜能的生防菌株。

橡胶树白根病病原菌的鉴定

大田橡胶树白根病病原菌的子实体檐生,无柄,大小为8.2～8.6cm×5.3～5.3cm,具担子、担孢子;菌肉白色,管孔橙黄色;培养菌丝宽度2.64～4.29μm。根据病原菌的形态特征,以及室内橡胶小苗、盆栽大苗接种和子实体培养的结果,确定海南东太农场发生的橡胶白根病与国外报道的是相同的。