香水月季(Rosa odorata Sweet)不同变种的染色体及核型分析

采用常规压片法对采自11个地点的4个变种进行了以染色体形态和倍性为主的核型分析。结果表明:(1)香水月季原变种是2倍体,核型公式为:2n=2x=14=12m+2sm,核型为1A。(2)大花香水月季4个居群的染色体形态很相似,都是2倍体,核型全为1A,核型公式均是2n=2x=14=12m+2sm,居群间差异主要表现在染色体组的相对长度构成上。(3)桔黄香水月季是2倍体,核型公式为2n=2x=14=10m+4sm,核型为1A。(4)来自不同地方的粉红香水月季在染色体数量和形态上有较大的差异。木家桥和永春的是3倍体,核型公式分别为2n=3x=21=18m+3sm和2n=3x=21=21m;红桥、富民和小河的是2倍体,核型公式分别为2n=2x=14=12m+2sm、2n=2x=14=10m+4sm和2n=2x=14=12m+2sm;除富民的核型为1B外,其他地方的核型均是1A。基于研究结果,讨论了香水月季的核型特征、细胞遗传分化模式、丰富的变异及其在育种中的应用。

大花香水月季(Rosa odorata var. gigantea)茎段组织培养的抗褐化研究

以大花香水月季(R. odorata var. gigantea)单芽茎段为外植体,研究了不同培养基、抗褐化剂以及不同时长黑暗低温预处理对组培过程中褐化的影响。结果表明:WPM培养基为适合的基本培养基;添加有3 g/L活性炭(AC)的培养基中褐化率降至最低的9%,但外植体萌发率远低于2 g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)下的78%,硝酸银(AgNO3)未达到预期效果;24 h的黑暗低温预处理可减轻褐变。试验表明:大花香水月季外植体于4℃下黑暗低温处理24 h后,接种于含有2 g/L PVP的WPM+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基上,3周后褐化率为15%,萌发率可达83.3%。

香水月季复合群(Rosa odorata Complex)花香成分分析

【目的】研究香水月季复合群花香成分,为香水月季品种的选育及利用提供实验依据。【方法】采用顶空固相微萃取(HSSPME)和气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)技术分析了香水月季复合群(Rosa odorata complex)盛开期花瓣的花香成分。【结果】从香水月季复合群中共鉴定出56个化合物,不同变种间花香成分存在较大的差异。其中香水月季原变种的主要香气成分是醇类化合物,含量最高的是苯乙醇;大花香水和粉红香水月季的主要香气成分是芳香烃类,含量最高的是3,5-二甲氧基苯;桔黄香水月季的主要成分是芳香烃类和萜烯类,含量最高的是1,3,5-三甲氧基苯。【结论】香水月季复合群不同变种间的花香成分差异显著。研究结果明确了这一类重要蔷薇资源为现代月季培育提供的花香成分,同时可为花香代谢途径关键酶基因的克隆、调控及利用提供理论依据。

Protective role of fruits of Rosa odorata var. gigantea against WIRSinduced gastric mucosal injury in rats by modulating pathway related to inflammation, oxidative stress and apoptosis

Objective: Rosa odorata var. gigantea is a popular medicinal plant. Some studies have demonstrated that ethanolic extract of the fruits of R. odorata var. gigantea(FOE) has gastroprotective properties. The aim of this study was to investigate the gastroprotective activity of FOE on water immersion restrained stress(WIRS)-induced gastric mucosal injury in a rat model and elucidate the possible molecular mechanisms involved.Methods: A rat stress ulcer model was established in this study using WIRS. After rats were treated with FOE orally for 7 d, the effect of FOE treatment was analyzed by hematoxylin and eosin(H&E) staining, and the changes of inflammatory factors, oxidative stress factors, and gastric-specific regulatory factors and pepsin in the blood and gastric tissues of rats were examined by ELISA assay. Molecular mechanism of FOE was investigated by immunohistochemical assay and Western blot.Results: Compared with the WIRS group, FOE could diminish both the macroscopic and microscopic pathological morphology of gastric mucosa. FOE significantly preserved the antioxidants glutathione peroxidase(GSH-PX), superoxide dismutase(SOD) and catalase(CAT) contents;anti-inflammatory cytokines interleukin-10(IL-10) and prostaglandin E2(PGE2) levels as well as regulatory factors tumor necrosis factor-a(TGF-a) and somatostatin(SS) contents, while decreasing malondialdehyde(MDA), nitric oxide synthase(i NOS), tumor necrosis factor(TNF-a), interleukin-1β(IL-1β), interleukin-6(IL-6), gastrin(GAS)and endothelin(ET) levels. Moreover, FOE distinctly upregulated the expression of Nrf2, HO-1, Bcl2 and proliferating cell nuclear antigen(PCNA). In addition, FOE activated the expression of p-EGFR and downregulated the expression of NF-ΚB, Bax, Cleaved-caspase-3, Cyto-C and Cleaved-PARP1, thus promoting gastric mucosal cell survival.Conclusion: The current work demonstrated that FOE exerted a gastroprotective activity against gastric mucosal injury induced by WIRS. The underlying mechanism might be associated with the improvement of anti-inflammatory, anti-oxidation and anti-apoptosis systems.

不同香水月季染色体倍性鉴定及其繁育系统分析

【目的】香水月季(Rosa odorata)是一类重要的蔷薇属植物种质资源,具有较高的观赏价值及利用价值,为促进香水月季种质资源的开发和利用,对不同香水月季染色体倍性、花部综合特征和繁育系统特性进行研究。【方法】以9种香水月季为材料,采用流式细胞仪、杂交指数检测等对不同香水月季的染色体倍性、花粉活力、柱头可授性、花部特征等进行观察及测定,并对繁育系统进行分析。【结果】(1)9种香水月季均为二倍体,其花为两性花,花色明亮,多重瓣或半重瓣,其中5种香水月季雌雄蕊异熟;(2)9种香水月季的花粉活力普遍偏低,最高仅为35.47%,杂交指数(OCI)均≥4,其花粉量-胚珠比(P/O)值为6709~75521。【结论】9种香水月季的繁育系统类型均以异交为主,且繁育系统受花粉粒数、花瓣数等多个因素影响。

彝族药固公果根化学成分和药理活性研究进展及其质量标志物预测分析

目的:基于中药质量标志物(Quality Maker,Q-marker)理论,预测固公果根的Q-marker,为固公果根建立科学的质量控制方法提供依据。方法:结合固公果根化学成分、质量控制、药理学研究,从原植物亲缘学及化学成分特有性、传统功效及药性和新的药效用途等多角度分析和预测固公果根Q-marker的候选化合物。结果与结论:固公果根主要为三萜类、鞣质、酚酸、黄酮类和甾体类等化合物,具抑菌、抗炎、调节胃肠功能等现代药理活性,但质量控制环节较为薄弱。综合Q-marker相关理论,建议考虑将固公果根药材中7个三萜类成分(2α,3α,19α,23-四羟基-熊果-12-烯-28-羧酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯苷、野蔷薇苷、蔷薇酸、冬青苷B、绢毛榄仁苷、熊果酸、齐墩果酸)和4个鞣质、酚酸类成分(儿茶素、原花青素B3、没食子酸、鞣花酸)作为固公果根药材Q-marker的候选化合物。

云南大花香水月季居群遗传多样性的SSR分析

利用简单重复序列（simple sequence repeat，SSR）分子标记技术对云南省分布的8个大花香水月季天然居群遗传性进行了分析，结果表明：所选用的12对SSR引物，共扩增出72个位点，其中多态性位点70个，占总条带数的97．22％；在物种水平上，总居群的Nei’s基因多样性指数（He）和香农指数（I）分别为0．3012和0．4600，说明云南地区大花香水月季居群的遗传多样性较高；大花香水月季居群内遗传变异（69．49％）大于居群间遗传变异（30．51％），说明居群内变异是其居群的主要变异来源；利用Popgene计算出两两居群间的Nei＇s遗传一致度（I）和遗传距离（D），其范围分别为0．7615～O．9348和0．0674～O．2724，再依据遗传距离进行聚类分析，结果表明居群遗传距离与地理位置无显著的相关性。

大花香水月季的授粉率及花粉管生长途径

研究大花香水月季雌蕊群的授粉率及花粉管生长途径,为其育种应用及资源保护提供依据。显微观察统计大花香水月季花期雌蕊群的授粉效率,荧光显微观察花粉管生长途径。结果表明:花朵萼片平行伸展后120 h,柱头授粉率接近100%,单柱头花粉量达最大值为(84.20±5.8)粒;自萼片自然伸展48 h时柱头上少量萌发,72 h后花粉管伸长至花柱中下部,90 h后观察到有花粉管进入子房。大花香水月季单花雄蕊(129±20)枚,雌蕊(30±5)枚,开放持续5～7 d;花粉自萌发至花粉管进入胚珠需要30～40 h。

蔷薇属月季组植物的花粉形态学研究

【目的】了解月季组下物种的亲缘关系及演化规律。【方法】选取蔷薇属月季组的香水月季和月季花25份材料,利用电子扫描显微镜观察其花粉形态,选取12个性状进行测量,并根据观测结果对研究材料进行聚类分析。【结果】供试材料的花粉均为单粒花粉,呈长球形或超长球形(P/E在1.98~2.35之间),大小为(36.06~42.81)μm×(16.39~20.07)μm。萌发孔三孔沟,外壁纹饰均为孔穴—条纹型。不同种类之间花粉的外壁纹饰具有一定的相似性,但仍然在条纹走向和孔穴穿透等非数量性状方面有所差异,从而对外壁纹饰进一步细分为不同类型。聚类分析结果表明:所有材料被划分为4个类群。【结论】香水月季是蔷薇属中一个较为进化的物种。

植物生长调节剂对香水月季原变种扦插生根的影响

为保护香水月季原变种种质资源和为种苗扩繁进一步进行推广应用奠定基础,研究了植物生长调节剂IBA、IAA、NAA不同浓度处理对香水月季原变种扦插生根成活率的影响。结果表明:不同的植物生长调节剂及其浓度对香水月季扦插成活率和插条生根量有极显著的影响,但对不定根长度的影响不显著。其中,500 mg/L IAA溶液处理的插条成活率最高,达90%;500 mg/L IBA溶液处理的插条生根量最多,平均可达32条;IAA处理的插条不定根长于其他处理的。综合来看,香水月季原变种的插条用500 mg/L IAA溶液处理10 min后,其成活率、根系数量及根系长度明显提高,扦插效果最佳。

大花香水月季叶绿体基因组密码子使用偏性分析

以大花香水月季叶绿体基因组为研究对象,利用codonW等软件,通过分析大花香水月季叶绿体基因组54个基因密码子的使用偏性,探讨影响密码子偏好性形成的主要因素。结果表明:1)中性绘图分析显示GC3与GC12的相关系数为0.141,不显著相关,说明密码子第1、2位与第3位碱基组成变异无明显关联。2)ENC绘图分析显示,期望值曲线下方分布了大部分基因,偏性较强,而仅少量基因沿曲线分布或在曲线附近,偏性较弱。3)基于RSCU的对应性分析表明,第1轴能够解释基因总变异的10.35%,第1轴与CAI、CBI呈负显著相关。4)PR2-plot分析显示,密码子第3位碱基的使用存在偏性,嘧啶比嘌呤使用更为频繁。5)最终确定了TTT、CTT和TCA等13个最优密码子,且均以A或T结尾。综上所述,大花香水月季叶绿体基因组密码子的使用受突变影响较弱,更多地受到如选择压力等其他因素的影响。

梁王山大花香水月季居群表型多样性分析

以云南省澄江市梁王山一带3个大花香水月季居群240个个体为研究对象,采用巢式方差分析、表型变异系数分析、Pearson相关性分析等方法,对大花香水月季的花、叶等16个表型性状进行分析。结果表明:大花香水月季居群内和居群间均存在丰富的表型多样性,表型分化系数在-1.51%~26.18%之间,在较近的距离内,居群内多样性远高于居群间多样性。表型性状在居群内的平均变异系数为13.62%,离散程度相对较低,其中,变异系数最大的是花梗长,最小的是花瓣长宽比。相关性分析发现,大多数花部性状间、叶部性状间相关性较强,但花部性状与叶部性状之间相关性较低甚至不相关。

基于长尖叶蔷薇与大花香水月季转录组数据的MLO unigenes生物信息学及表达分析

在对长尖叶蔷薇和大花香水月季转录组测序的基础上,利用生物信息学方法,从其转录组数据中共获得23条MLO unigenes并对其进行了分析。结果显示它们之间的氨基酸数量、碱基数、分子量差异较小,多数为疏水性蛋白,平均亲水系数为-0.157~0.190,富含亮氨酸和丝氨酸。亚细胞定位主要分布于质膜中,包含5~9个跨膜结构;二级结构主要由α-螺旋组成。其中,等电点小于7的仅有1条,2条蛋白具有信号肽。这23条MLO蛋白具有15个长度在15~50个氨基酸间的保守基序。它们的系统进化关系分析结果揭示了MLO基因在长尖叶蔷薇与大花香水月季间具有较高的同源性和保守性。将这23条unigenes与来自于月季和拟南芥的MLO基因进行聚类分析,确定了6条可能参与抗白粉病的候选基因,对这6条候选基因进一步分析发现仅有2条unigenes符合MLO型白粉病基因的典型结构特征。最后,通过q RT-PCR试验验证,结果表明:这2条候选基因的相对表达量,在受到白粉病菌侵染后呈积极上调趋势。上述研究结果表明这2条候选基因很可能参与了寄主—白粉病菌的互作过程。

粉红香水月季花香成分分析及在城市园林中的应用

粉红香水月季为著名的古老藤本月季,前期引种发现,粉红香水月季在上海具有良好的适应性。为进一步开发利用,本研究主要对其芳香性开展研究。采用搅拌子吸附萃取脱附结合气相色谱质谱技术提取和分析鲜花花瓣中的香气成分。结果显示,粉红香水月季的主要香气成分为3,5-二甲氧基甲苯,其次为3-乙酸叶醇酯、石竹烯、香叶醇等。香气类型为以3,5-二甲氧基甲苯为代表的茶香型,香气偏清韵。同时,3,5-二甲氧基甲苯具有独特的镇定安神效果。粉红香水月季在观赏园林和保健园林的景观营造中具广阔应用前景。

大花香水月季不同基质绿枝扦插比较试验

在大花香水月季绿枝扦插繁殖中,为了选择一种最佳基质,本试验以细沙、锯木屑、细炉灰渣、蛭石、珍珠岩5种基质组成不同配比进行绿枝扦插比较试验。通过比较扦插苗的生根率、根长、根重、根粗等生根状况指标及幼苗的叶绿素含量、根系活力、可溶性糖含量等生理指标,结果得出处理2(细炉灰渣:细沙=1:1)各种生根状况指标均较好,处理2(细炉灰渣:细沙=1:1)和处理3(蛭石:细沙=1:1)的生理指标均较好。最后综合得出处理2(细炉灰渣:细沙=1:1)最适合作为大花香水月季扦插繁殖基质。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS的固公果根指纹图谱分析及DPPH抗氧化谱效关系研究

目的 建立固公果根药材的超高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)指纹图谱,并研究其与自由基清除活性的谱效关系。方法 采用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS建立固公果根的指纹图谱,评价指纹图谱相似度,结合热图分析,对其中的19个共有峰进行指认;使用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法评价固公果根的抗氧化活性,结合灰色关联度分析(grey relational analysis, GRA)研究谱效关系。结果 建立了固公果根的UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS指纹图谱,选择峰面积>1%的19个色谱共有峰,通过对照品比对法、数据库、参考文献等方法鉴定前述色谱峰。19个色谱峰的热图分析和DPPH抗氧化灰色关联度结果显示,面积颜色变动较大峰为2、4、8、14、15、17,谱效关系表明11、18、17、19、8、6、16、12、1、5、7、15号峰是与抗氧化活性关联较大的正相关峰。各取排名前五相交得以下9个化学成分作为质量评价指标:峰2(儿茶素)、峰4(表儿茶素)、峰8[(+)-喹色亭酚-(4β,8)-表儿茶素]、峰11(鞣花酸)、峰14(野蔷薇苷)、峰15(刺梨苷)、峰17(委陵菜酸)、峰18(蔷薇酸)和峰19(皂皮酸)。结论 固公果根抗氧化活性是酚类和三萜皂苷类等多成分联合效应的结果,为药材质量控制提供更全面的参考。

大孔吸附树脂法对固公果根中鞣质的吸附解吸研究

目的探讨大孔吸附树脂富集、纯化固公果中总鞣质的工艺条件参数。方法比较了8种大孔吸附树脂的静态吸附量、静态解吸率,筛选出最佳的吸附树脂。以静态、动态吸附实验相结合,确定了最佳的吸附分离工艺。采用干酪素法进行鞣质的测定。结果在考察的8种树脂中,HP20型树脂具有最佳的吸附参数,并确定了工艺条件。结论本实验筛选出HP20型树脂对固公果根中总鞣质类成分吸附解吸性能较好。

RP-HPLC法测定固公果中蔷薇酸和委陵菜酸

目的:利用RP-HPLC方法测定彝族药物固公果中蔷薇酸、委陵菜酸的量。方法:采用UltimatexB-C18(美国Welch公司,150nm×4.6mm,5μm)色谱柱,以甲醇-1.5%磷酸水溶液(33︰67)为流动相,体积流量1.0mL/min,检测波长210nm。结果:固公果中蔷薇酸与委陵菜酸能得到很好的分离。测定线性范围分别为:蔷薇酸77.4～774.3μg/mL,r=0.9999;委陵菜酸54.7～546.9μg/mL,r=0.9999。蔷薇酸平均回收率为102.5%(n=9),委陵菜酸平均回收率为103.7%(n=9)。结论:该法便捷、灵敏、准确,重复性好,可以控制该药材的质量。

基于转录组测序的香水月季花香代谢基因研究

通过转录组测序技术,探究大花香水月季及单瓣香水月季两个变种的花香代谢通路及花香差异形成的相关基因。在两个材料花蕾期、初开期及盛开期对比组中分别检测出8339、8849、7572个差异表达基因,其中3个阶段共有的差异基因3762个。GO和KEGG聚类分析显示,差异基因主要参与代谢过程、细胞过程、单一有机体过程、催化活性等生物学过程;主要富集于代谢途径、次生代谢物的生物合成、碳代谢等途径。在3组共有差异基因中共发现富集于6条重要花香物质合成通路(萜类骨架生物合成、苯丙素生物合成、脂肪酸生物合成、单萜类生物合成、双萜类生物合成及倍半萜和三萜类生物合成)中的差异基因27个。认为这27个基因对两个变种花香释放过程中的差异形成有较大影响。分析特征花香物质合成酶基因Rc_0128091及Rc_0119291在转录组数据中的表达,发现其表达量与相应的花香物质3,5–二甲氧基苯及1,3,5–三甲氧基苯释放量趋势基本一致,推测对特征花香物质的合成有决定性作用。随机选取10个差异表达基因进行qRT-PCR和RNA-seq的相关性验证,结果显示二者相关性较高,认为RNA-seq测序结果具有较高的准确性。