Rosa26-LEM4定点转基因小鼠模型构建

为研究LEM4基因在肿瘤发生发展中的生物学功能,采用CRISPR/Cas9技术,在小鼠基因组的Rosa26位点插入CAG-lox P-STOP-lox P-h LEM4-3×FLAG-IRES-EGFP,建立了Rosa26-LEM4定点转基因小鼠模型.依据小鼠Rosa26位点序列设计合成g RNA、构建含同源序列和目的序列CAG-lox P-STOP-lox P-h LEM4-3×FLAG-IRES-EGFP的插入序列,和Cas9核酸酶m RNA共同注射入小鼠的受精卵中并获得敲入小鼠后代,经Southern blot鉴定、以及PCR扩增插入序列后的序列分析鉴定出F_(0)首建鼠,F_(0)首建鼠与野生型小鼠杂交后获得基因型为Rosa26-LEM4^(flox-LSL/wt)的F_(1)代小鼠.Rosa26-LEM4^(flox-LSL/wt)小鼠自交后获得Rosa26-LEM4^(flox-LSL/flox-LSL)基因型小鼠.Rosa26-LEM4^(flox-LSL/flox-LSL)小鼠与EIIa-cre工具鼠杂交后获得表达人LEM4蛋白的Cre^(+/-);Rosa26-LEM4^(flox-LSL/wt)小鼠模型.该模型的建立为研究LEM4的肿瘤生物学功能提供了材料和思路.