α-苦瓜素基因的克隆和原核表达

α-苦瓜素(Alpha-momorcharin)是一种多功能核糖体失活蛋白,具有抗肿瘤、抗HIV-1和抗菌活性,并同时具有免疫抑制活性。利用PCR(polymerase chain reaction)技术从苦瓜基因组中扩增出了成熟的α-苦瓜素蛋白基因,并亚克隆到表达载体pET28a(+)上,然后分别在BL21(DE3)和RosettaTM(DE3)pLysS中进行表达。结果表明只在RosettaTM(DE3)pLysS中,重组α-苦瓜素基因能成功地表达出33kD大小的重组蛋白,而且在18℃和22℃的温度下,经IPTG诱导后,能成功地表达出大量可溶性重组蛋白。利用重组蛋白的N末端带有的6×His标签,通过Ni-NTA柱纯化获得了α-苦瓜素重组蛋白。Western杂交实验表明,纯化后的重组蛋白可与鼠抗His-Tag单克隆抗体发生特异性反应。α-苦瓜素重组蛋白的获得为进一步系统研究和改造其功能与活性奠定了基础。