轮状病毒的生物素核酸探针及分子杂交的研究

用亚硫酸氢钠-乙二胺溶液对轮状病毒的ssRNA胞嘧啶修饰和转氨基作用,与生物素e-氨基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯反应,制备探针与结合在硝基纤维膜上的核酸样品杂交,然后用亲和素和生物素化碱性磷酸酶温育,2-萘酚磷酸和固蓝B盐显色,阳性反应呈蓝紫色;轮状病毒生物素核酸探针可检测20～39pgRNA靶序列。SA_(11)或NCDV探针可识别同源的SA_(11)和NCDV核酸序列,也能识别同属A群的Wa株,羊轮状病毒S_1株的核酸序列。检测141份猪、羊和人腹泻粪样,杂交阳性118份,并对几株细胞培养物进行了杂交试验。结果表明,该法制备的生物素探针具有稳定、特异、灵敏等特点,较其他化学方法制备生物素探针简单,取材容易,价廉,可以广泛应用于各种微生物的基础研究及其所致疾病的临床诊断。

轮状病毒基因重配株血清型鉴定方法的研究

Ａ组轮状病毒中根据基因９的不同目前至少已发现有１３个不同Ｇ血清型，其中能引起人类致病的有Ｇ１－Ｇ４，Ｇ８，Ｇ９和Ｇ１２型。建立可靠的血清型鉴定技术对于轮状病毒疫苗的研制和分子流行病学的研究具有重要意义。本文首次报导了一种鉴定轮状病毒Ｇ血清型的新方法，利用已知有关轮状病毒ＶＰ７基因的序列资料，设计合成了一套鉴定轮状病毒Ｇ血清型的寡核苷酸探针，利用地高辛标记上述探针。待检品经反转录ＰＣＲ扩增后与上述一套寡核苷酸探针分别进行杂交得以确定其血清型。这一方法与目前常用的套式ＰＣＲ方法相比更适合于大量样品的操作而且结果可靠。用这一方法对本实验室组建的四株基因重配疫苗株进行实验，其结果与套式ＰＣＲ方法完全一致。

地高辛标记核酸探针斑点杂交法检测轮状病毒疫苗中残余MA－104细胞DNA含量的研究

本文报导用地高辛标记核酸探针和分子斑点杂交技术检测轮状病毒基因重配株Ｌ－３株活疫苗中残余ＭＡ－１０４细胞ＤＮＡ含量的方法。提取和纯化ＭＡ－１０４细胞ＤＮＡ，将其ＡｌｕＩ酶切片段用随机引物法引导ＤＮＡ标记为探针。待检样品抽提核酸后点膜进行斑点杂交。此法灵敏度高，可检出０．１４ｐｇ的ＤＮＡ，特异性强，与非同源性ＤＮＡ无杂交。用此法检测轮状病毒基因重配株Ｌ－３株制备的疫苗，ＭＡ－１０４细胞残余ＤＮＡ含量低于１４ｐｇ低于ＷＨＯ限量标准，结果表明此重配株用于研制疫苗是安全的。

B组轮状病毒RT-PCR来源的cDNA探针核酸诊断方法的建立

近十年来，国内外学者相继报道在人以及牛、羊、猪、大鼠的腹泻粪样中检出Ｂ组轮状病毒〔１－３〕。洪涛等于１９８３年首次报道成人腹泻轮状病毒（ＡＤＲＶ）属于Ｂ组轮状病毒〔４〕。目前，轮状病毒Ｂ组已被公认为引起人及不同动物腹泻的流行病学的重要因素。由于Ｂ组轮...