运脾柔肝方治疗便秘型肠易激综合征疗效观察及基于rs-fMRI脑区活动水平变化的研究

目的:观察运脾柔肝方治疗肝郁气滞型便秘型肠易激综合征(IBS-C)的临床疗效,运用静息态功能性磁共振(rs-fMRI)观察IBS-C患者的脑区活动水平变化。方法:选取我院门诊43例IBS-C患者,评价运脾柔肝方的临床疗效。选取20例健康受试者,观察IBS-C患者及健康受试者脑区活动水平差异。进行焦虑、抑郁评估,观察伴与不伴焦虑抑郁状态的患者脑区活动水平的差异。观察IBS-C患者治疗前后脑区活动水平差异。结果:治疗组与对照组治疗均有效(P>0.05)。治疗组患者经治疗后SAS和SDS评分均降低(P<0.05)。对照组患者经治疗后SAS评分降低(P<0.05)。静息状态下,IBS-C组患者左舌回的脑区活动水平升高,左额下回、右额中回的脑区活动水平降低(P<0.05)。伴焦虑抑郁情绪的IBS-C患者右额下回的脑区活动水平较不伴有焦虑抑郁情绪的患者升高(P<0.05)。治疗后IBS-C患者左顶叶中央后回、左侧距状裂周围皮层的脑区活动水平降低,小脑的脑区活动水平升高(P<0.05)。结论:运脾柔肝方可有效缓解IBS-C患者的临床症状,改善焦虑、抑郁情绪。在静息状态下,IBS-C患者大脑的特定区域活动异常,说明大脑的某些特定区域和相应网络的自发神经元活动的变化可能与IBS-C的病理生理密切相关。

柔肝止泻方对腹泻型肠易激综合征肝气乘脾证大鼠模型的干预效应及机制研究

目的:从肠黏膜通透性及肠道炎症角度探讨柔肝止泻方对肝气乘脾型腹泻型肠易激综合征的干预效应及机制。方法:50只SPF级Wistar雌性大鼠中随机选取8只作为空白组,其余制备肝气乘脾型腹泻型肠易激综合征(IBS-D)病证结合大鼠模型。造模后将40只成模大鼠随机分为模型组、匹维溴铵组及柔肝止泻方低、中、高剂量组,每组8只,分别给予生理盐水、匹维溴铵及不同剂量的柔肝止泻方(0.86、1.72、3.44 g·kg-1),灌胃14 d后取材。记录体质量、粪便含水量,并行相关行为学实验;光镜下观察HE染色后结肠组织形态,并于透射电镜下观察肠黏膜超微结构变化;采用ELISA法检测大鼠血浆中D-乳酸和血清中TNF-α、IL-6、IFN-γ的含量;采用Western blot法及RT-qPCR法检测大鼠结肠组织中MMP9、p38MAPK、MLCK、occludin蛋白以及mRNA的表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量下降、粪便含水量增加及新奇抑制摄食潜伏期延长(P<0.01);与模型组比较,柔肝止泻方各剂量组大鼠体质量增加、粪便含水量减少及新奇抑制摄食潜伏期缩短(P<0.05,P<0.01)。HE染色显示,各组大鼠结肠组织结构完整,未见明显的病理性改变。透射电镜可见,模型组肠上皮细胞间隙显著增宽,紧密连接及缝隙连接结构模糊,桥粒显著减少,绒毛稀疏、不齐,柔肝止泻方各剂量组肠上皮细胞间隙明显缩小,顶端连接复合体结构清晰,绒毛整密。与空白组比较,模型组大鼠D-乳酸及炎症因子含量增加(P<0.05,P<0.01),结肠组织中MMP9、p38MAPK、MLCK的蛋白及mRNA表达水平均升高(P<0.05,P<0.01),occludin的表达水平下降(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,柔肝止泻方各剂量组D-乳酸及炎症因子含量降低(P<0.05,P<0.01),结肠组织中MMP9、p38MAPK、MLCK的蛋白及mRNA表达水平均下调(P<0.05,P<0.01),occludin水平上调(P<0.01)。结论:柔肝止泻方可改善肝气乘脾型IBS-D大鼠模型肠黏膜通透性及肠道炎症,可能是通过减少炎症因子,抑制MMP9激活p38MAPK/MLCK信号通路发挥干预效应。

基于网络药理学和实验验证探讨益气柔肝解毒方治疗肝癌的作用机制

目的:基于网络药理学和实验验证探讨益气柔肝解毒方治疗肝细胞癌(HCC)的分子作用机制。方法:通过网络药理学方法获得益气柔肝解毒方调控HCC的潜在靶点及信号通路。通过动物实验构建荷瘤(肝癌细胞H22皮下移植瘤)小鼠模型,给予不同剂量组的益气柔肝解毒方治疗后,评价肿瘤组织的生长情况、HE染色检测小鼠肿瘤组织病理改变、WB检测肿瘤组织PI3K/AKT/NFκB信号通路蛋白的表达情况。结果:网络药理学分析共得到活性化合物64个,与疾病靶点交集的潜在靶点236个,核心靶点24个,益气柔肝解毒方可能通过影响TP53、ALB、PTEN、CCND1等肝癌常见的突变基因,调控Th1、Th2、Th17等细胞分化,下调PD-1检查点与PD-L1表达,以及阻断PI3K/AKT、NFκB等肝癌异常激活的关键信号通路来发挥抗肿瘤效应。实验结果表明:与模型组相比,益气柔肝解毒方能抑制荷瘤小鼠肿瘤体积增长,显著降低PI3K/AKT/NFκB通路蛋白的表达。结论:益气柔肝解毒方能通过多成分、多靶点及多途径发挥治疗HCC的作用,并可能通过影响PI3K/AKT/NFκB信号通路,抑制肝癌的发展。

益肾柔肝法联合屈螺酮炔雌醇用于体重正常型多囊卵巢综合征患者的临床疗效研究

目的:观察益肾柔肝方药联合屈螺酮炔雌醇对体重正常型多囊卵巢综合征(PCOS)的治疗效果。方法:选取2020年6月至2022年1月该院收治的体重正常型PCOS患者90例,根据随机数字表法分为西药组、中药组和中药+西药组,各30例。西药组患者口服屈螺酮炔雌醇,中药组患者口服自拟补肾柔肝方,中药+西药组患者同时口服治屈螺酮炔雌醇和自拟补肾柔肝方。持续治疗3个月后,评估三组患者的临床有效率,对比三组患者治疗前后中医证候评分变化,血清性激素[卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和抗米勒管激素(AMH)]水平,脂代谢指标[高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和总胆固醇(TC)]及胰岛素抵抗指标[空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)]水平变化。结果:治疗3个月后,西药组、中药组和中药+西药组患者的临床总有效率分别为60.0%(18/30)、76.7%(23/30)和93.3%(28/30),中药+西药组患者临床总有效率明显高于西药组、中药组,中药组患者的临床总有效率明显高于西药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗3个月后,与中药组、西药组相比,中药+西药组患者的中医证候评分明显降低,血清LH、AMH水平明显降低,FSH水平明显升高,血清LDL-C、TC水平明显降低,FBG、FINS和HOMA-IR水平明显降低,HDL-C水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗3个月后,中药组患者的中医证候评分,血清性激素、脂代谢及胰岛素抵抗指标水平改善情况均优于西药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:针对体重正常型PCOS患者的治疗,应用益肾柔肝方药和屈螺酮炔雌醇均可有效减轻患者症状,改善性激素和脂代谢水平,抑制机体胰岛素抵抗,益肾柔肝方药与屈螺酮炔雌醇联合应用的效果较单独应用更佳。

和血柔肝方对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶及其抑制物表达影响的实验研究

目的:观察和血柔肝方(HXRGF)对肝纤维化(LF)大鼠基质金属蛋白酶(MMPs)及其特异性抑制物(TIMPs)的影响,评估HXRGF对LF的疗效。方法:将80只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组(CL,n=10)和肝纤维化模型组(FL,n=70),在大鼠颈背部皮下以60%CCl 4溶液(CCl 4∶Olive oil=3∶2,3 ml/kg体重,每周2次)连续注射12周进行造模。造模成功后,原FL组大鼠被随机分为模型组、秋水仙碱组、HXRGF低剂量组、HXRGF中剂量组和HXRGF高剂量组,每组10只,分别给予相应的受试药液灌胃4周(1次/d)。比较各组大鼠的体质量、肝功能、病理Metavir评分和肝组织中MMP2、MMP13、TIMP1、TIMP2、TGFβ及Lect2的mRNA和蛋白表达量的差异。结果:①与对照组相比,模型组大鼠的肝脏形态、HE染色、免疫组化和羟脯氨酸测定结果提示肝纤维化模型复制成功,其体质量下降、肝功能恶化、病理Metavir评分升高,MMP2、MMP13、TIMP1、TIMP2、TGFβ和Lect2 mRNA水平和蛋白表达量升高(P<0.05)。②与模型组比较,HXRGF高剂量组大鼠ALT、AST水平降低(P<0.05);HXRGF高剂量组、中剂量组病理Metavir评分降低(P<0.01);HXRGF各剂量组MMP-2、TIMP1/2、TGFβ和Lect2 mRNA水平和蛋白表达量降低(P<0.05),HXRGF各剂量组MMP-13 mRNA水平和蛋白表达量升高(P<0.05)。结论:HXRGF可以显著改善CCl 4诱导的大鼠肝脏的炎症及纤维化程度,其机制可能是通过调控MMPs及其抑制物TIMPs的表达,降低Lect2调节血管生成,减少TGFβ的表达,从而减轻肝纤维化。

柔肝降酶方含药血清抑制人肝星状细胞的活化及自噬

背景:自噬在肝纤维化中发挥重要作用,可以通过诱导肝星状细胞活化促进肝纤维化的进程。前期研究表明,柔肝降酶方具有保护肝功能、抗炎、抗氧化应激反应等作用,其是否通过自噬抗肝纤维化的作用机制尚未阐明。目的:探讨柔肝降酶方含药血清对脂多糖诱导的人肝星状细胞活化及自噬的影响及其潜在的作用机制。方法:用脂多糖建立人肝星状细胞活化模型,分成不同的处理组:(1)空白组:人肝星状细胞+空白血清;(2)模型组:人肝星状细胞+空白血清+脂多糖;(3)柔肝降酶方低、中、高剂量含药血清组:人肝星状细胞+低、中、高剂量柔肝降酶方含药血清+脂多糖;(4)柔肝降酶方高剂量含药血清联合雷帕霉素组:高剂量组基础上+雷帕霉素;(5)柔肝降酶方高剂量含药血清联合PI3K抑制剂组:高剂量组基础上+LY294002。CCK-8法观察细胞增殖情况;采用单丹磺酰尸胺染色法观察细胞自噬情况;WesternBlot检测细胞通路蛋白(PI3K、P-PI3K、AKT、P-AKT、mTOR、P-mTOR)、自噬相关蛋白(P62、Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ)、人肝星状细胞活化标志蛋白(α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原纤维)表达水平的影响。结果与结论:(1)柔肝降酶方含药血清能够降低人肝星状细胞的增殖活性,下调Ⅰ型胶原纤维、α-平滑肌肌动蛋白的蛋白表达,上调自噬P62蛋白的表达,降低LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白的表达,且呈现剂量依赖性;(2)MDC荧光染色结果显示,柔肝降酶方含药血清可使细胞绿色斑点荧光强度降低;(3)加入自噬激动剂雷帕霉素后,P62蛋白表达降低,LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达升高;(4)经过柔肝降酶方含药血清处理后,PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平升高,呈剂量依赖性,这种作用能被PI3K抑制剂LY294002减弱;(5)提示柔肝降酶方含药血清可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制自噬,减少脂多糖诱导的人肝星状细胞活化。

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨扶脾柔肝方对肝纤维化(HF)大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的干预作用。方法将SD大鼠随机分为7组:正常对照组,模型组,秋水仙碱组(0.2 mg·kg^(-1)),扶正化瘀组(0.415 g·kg^(-1)),扶脾柔肝方低、中、高剂量组(20,40,80 g·kg^(-1))。采用大鼠背部皮下注射(sc)50%四氯化碳和灌胃(ig)30%乙醇的方法诱导HF,造模10周,成功建立大鼠HF模型,其后给予相应药物10 m L·kg^(-1),每日1次,连续4周,正常对照组、模型组给予等量生理盐水。检测大鼠血清TGF-β1;HE染色和Masson染色观察肝组织病理学变化;免疫组化法检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;同时,采用荧光定量PCR方法及免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中TGF-β1、Smad 3、Smad 4、Smad7 mRNA及蛋白的表达。结果模型组的HF程度较其余组明显严重,与正常对照组比较,模型组大鼠血清TGF-β1明显升高(P<0.01),肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达升高Smad 7表达降低(P<0.01);与模型组比较,扶脾柔肝方各组大鼠血清TGF-β1明显降低(P<0.05,P<0.01),肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达下调(P<0.01),Smad 7 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论扶脾柔肝方下调HF肝组织α-SMA蛋白及TGF-β1、Smad3、Smad4 mRNA及蛋白表达水平,上调Smad7 mRNA及蛋白表达水平,可能是其抗HF作用机制之一。

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体-γ与转化生长因子-β1表达的影响

目的研究扶脾柔肝方(FRF)对肝纤维化(HF)大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-γ与转化生长因子(TGF)-β1表达的影响及机制。方法 80只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组、扶正化瘀组、FRF大、中、小剂量组,采用四氯化碳加上乙醇复制大鼠HF模型,造模10 w成功后,给予对应药物干预,每日1次,连续4 w,正常对照组、模型组给予生理盐水。检测血清肝纤维化指标,采用苏木素-伊红(HE)染色观察HF程度,免疫组化法观察肝组织PPAR-γ的表达,q RTPCR、Western印迹方法检测肝组织PPAR-γ、TGF-β1 m RNA和蛋白表达水平。结果模型组的HF分期较其余组明显升高(P <0. 01),模型组大鼠肝纤维化指标较其余各组均明显升高(P<0. 01),模型组肝组织PPAR-γm RNA和蛋白表达明显下调(P<0. 01),TGF-β1表达明显升高(P<0. 01);与模型组比较,各药物干预组肝组织PPAR-γm RNA和蛋白表达上调,TGF-β1 m RNA和蛋白表达下调,其中FRF大剂量组差异有统计学意义(P<0. 01)。结论 FRF上调HF肝组织PPAR-γm RNA和蛋白表达水平,下调TGF-β1表达,可能是其抗HF作用机制之一。

清火柔肝明目方治疗慢性葡萄膜炎临床研究

目的观察清火柔肝明目方治疗以白塞病(Behcet’s disease)、伏格特-小柳-原田(Vogt-Koyanagi-Harada syndrome,VKH)综合征为代表的慢性葡萄膜炎临床效果。方法选取本院2013年11月~2015年11月住院治疗的慢性葡萄膜炎患者,随机分为治疗组和对照组,共完成治疗、随访及辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg细胞)检测93例,其中治疗组46例,68眼、对照组47例,70眼。对照组予以西医治疗,治疗组在对照组的基础上加用清火柔肝明目方加减治疗,比较两组患者的临床疗效;随访观察12个月;并收集两组患者治疗前后外周静脉血4 ml,流式细胞仪检测Th17、Treg细胞的表达。结果清火柔肝明目方治疗组治愈率明显优于对照组;清火柔肝明目方治疗组复发率明显低于对照组。慢性葡萄膜炎患者外周血中Th17细胞比例治疗后明显降低,与对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),Treg细胞比例治疗后明显升高,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论清火柔肝明目方能提高慢性葡萄膜炎的治愈率、降低复发率,改善慢性葡萄膜炎患者免疫状态。

柔肝方通过抑制纤维化蛋白抗肝纤维化的机制研究

目的:柔肝方是上海市名中医王灵台教授治疗肝纤维化的临床有效验方,本研究旨在探讨柔肝方通过抑制纤维化蛋白(FBRS)抗肝纤维化的分子机制。方法:质谱法鉴定柔肝方的化学成分及其入血成分。BALB/c小鼠随机分对照组、模型组、柔肝方高剂量组、柔肝方中剂量组和柔肝方低剂量组。通过尾静脉注射ConA(12.5 mg/kg),每周1次,共10周,建立肝纤维化小鼠模型。体外应用重组FBRS蛋白刺激人肝星状细胞系(LX2细胞),并用柔肝方大鼠药物血清干预。肝组织HE染色、天狼猩红染色和Masson染色。生化法检测血清ALT、AST、肝纤四项(LN、HA、PⅢNP、Col-Ⅳ)表达水平。Western blot法检测肝组织α-SMA,Western blot法和ELISA法检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、TGF-β1、FBRS的表达水平。结果:各剂量柔肝方均可减少ConA肝纤维化模型小鼠肝脏的胶原沉积,且呈剂量依赖性抑制;柔肝方可明显降低模型小鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Col-Ⅰ和FBRS的表达水平;体外应用重组FBRS蛋白可上调LX2细胞的α-SMA、TGF-β1、Col-Ⅰ和FBRS的表达,柔肝方药物血清可抑制FBRS介导的LX2细胞的活化及胶原表达。质谱分析鉴定淫羊藿苷、丹酚酸B、绿原酸是柔肝方中含量较高的活性成分。结论:柔肝方通过下调肝星状细胞FBRS的表达抑制其活化及胶原沉积,发挥抗肝纤维化作用。

柔肝解毒方含药血清体外抗肝癌的实验研究

目的:通过体外抑制肿瘤细胞增殖试验,观察柔肝解毒方体外防治肝癌的药效作用。方法:制备柔肝解毒方含药血清,用MTT法观察含药血清对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721细胞增殖的影响。结果:柔肝解毒方含药血清能显著抑制人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721的增殖,对HepG2的最高抑制率为69.73%,对SMMC-7721的最高抑制率为62.64%,与空白对照组及PBS组相比差异显著(P<0.01);最高剂量组与含5-氟尿嘧啶血清抑制肝癌细胞的效果相比,无显著性差别(P>0.05)。中药组的抑制率呈一定的量效关系,随着给药剂量的增加其抑制率升高。结论:柔肝解毒方具有良好的体外抗肝癌的药效作用。

扶脾柔肝方对肝纤维化大鼠自噬相关蛋白Beclin-1及LC3-Ⅱ表达的影响

目的探讨扶脾柔肝方(FRF)对肝纤维化大鼠肝组织自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响。方法将70只SD大鼠随机分为正常组,模型组,FRF高、中、低剂量组(17.08、8.54、4.27g·kg^-1),秋水仙碱组(0.2mg·kg^-1),扶正化瘀组(0.415g·kg^-1)。采用大鼠腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液(1.5mL·kg^-1)联合灌胃30%乙醇(10mL·kg^-1)制备肝纤维化模型,连续造模8周;其后灌胃相应药物(10mL·kg^-1),每日1次,连续4周,正常组、模型组给予等体积生理盐水。检测大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GGT)及总胆红素(TBIL)水平;Masson染色法观察大鼠肝纤维化程度;透射电镜观察大鼠肝组织超微结构;免疫组化法检测肝组织中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;qRT-PCR以及WesternBlot法检测大鼠肝组织Beclin-1、LC3-ⅡmRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、γ-GGT、TBIL含量显著增高(P<0.05,P<0.01),ALB含量显著降低(P<0.01),肝组织α-SMA蛋白及Beclin-1和LC3-ⅡmRNA、蛋白表达上调(P<0.01)。与模型组比较,FRF中、高剂量组的γ-GGT显著下降(P<0.05,P<0.01),FRF各剂量组的大鼠血清ALT、AST、TBIL明显降低(P<0.05,P<0.01),ALB升高(P<0.05,P<0.01),肝组织α-SMA蛋白及Beclin-1、LC3-ⅡmRNA、蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论FRF能干预纤维组织增生,改善肝功能,其抗肝纤维化机制可能与下调Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达,抑制细胞自噬功能相关。

扶脾柔肝方及拆方对肝纤维化大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白表达的影响

目的探讨扶脾柔肝方及拆方对肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)大鼠肝组织线粒体自噬相关蛋白表达的影响。方法48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱组(0.2 mg·kg^(-1))、扶脾柔肝方组(8.54 g·kg^(-1))、扶脾方组(4.58 g·kg^(-1))、柔肝方组(3.96 g·kg^(-1))。采用四氯化碳腹腔注射和乙醇灌胃复制HF大鼠模型,灌胃给药4周。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST);HE、Masson染色观察病理变化情况;电镜观察大鼠肝组织超微结构;Western Blot和qRT-PCR方法检测大鼠肝组织PINK1、Parkin、Beclin 1和LC3-Ⅱ基因及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组的HF程度明显,胶原容积分数明显增加(P<0.01),电镜发现自噬小体增多,线粒体结构损害,大鼠血清ALT、AST明显升高(P<0.01),肝组织PINK1、Parkin、Beclin 1和LC3-ⅡmRNA及蛋白表达上调(P<0.01);与模型组比较,扶脾柔肝方及拆方HF程度有减轻,胶原容积分数明显下降(P<0.01),自噬小体减少,线粒体损害减轻,全方及扶脾方组大鼠血清ALT、AST明显降低(P<0.01),肝组织PINK1、Parkin、Beclin 1和LC3-ⅡmRNA及蛋白表达下调(P<0.01,P<0.05)。结论扶脾柔肝方及拆方抗肝纤维化,全方可发挥最佳疗效,其机制可能与下调PINK1、Parkin、Beclin 1和LC3-Ⅱ基因及蛋白的表达,干预细胞线粒体自噬水平有关。

巴芪柔肝方促进Th22细胞活化及IL-22分泌抗肝纤维化机制

目的 研究巴芪柔肝方抗肝纤维化的作用机制。方法 60只8周龄的BALB/c小鼠随机分为对照组(Control)、模型组(ConA)和巴芪柔肝方组(RGF)。模型组和RGF组制备刀豆蛋白A(ConA)诱导肝纤维化动物模型,RGF组随后灌服巴芪柔肝方(8.5 g/kg)至实验结束。体外分离健康人外周血CD4+T细胞和树突状细胞(DCs),诱导后分别与人肝星状细胞系(LX2细胞)共培养。检测相关基因和蛋白的表达水平。结果 与对照组比较,模型组小鼠血清谷氨酸丙酮酸转氨酶(ALT)、转化生长因子-β(TGF-β)、透明质酸(HA)、白介素-22(IL-22)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-23(IL-23)水平均升高(P<0.01,P<0.05),白蛋白(ALB)水平降低(P<0.01)。与模型组比较,RGF组ALT、TGF-β、HA降低(P<0.01),IL-22、IL-6、TNF-α、IL-23均升高(P<0.01)。病理结果显示巴芪柔肝方对ConA诱导的肝纤维化有保护作用。与空白血清组比较,巴芪柔肝方含药血清组(0.5、1、10μg/mL) DCs分泌的IL-6、TNF-α、IL-23 mRNA水平升高(P<0.01)。在共培养体系中,与空白血清组比较,巴芪柔肝方含药血清组IL-22 mRNA和蛋白的表达水平升高(P<0.01),LX2中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1(Col1 α1)的mRNA和蛋白水平降低(P<0.01)。对衰老相关炎症基因的RT-PCR分析显示,巴芪柔肝方含药血清组可以上调基质金属蛋白酶9(MMP9)、IL-6、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP2)、p53和p21 mRNA的表达水平(P<0.01),同时下调基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1) mRNA的表达水平(P<0.01)。结论 巴芪柔肝方通过促进DCs分泌IL-6/TNF-α/IL-23,激活Th22细胞,增加其IL-22的分泌,从而抑制肝星状细胞(HSCs)的活化,促进活化的HSCs衰老。

扶脾柔肝方配方颗粒对肝纤维化大鼠肝组织诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:观察扶脾柔肝方配方颗粒对肝纤维化大鼠肝组织诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、秋水仙碱(0.2 mg·kg-1)组、扶正化瘀(0.415 g·kg-1)组、扶脾柔肝方配方颗粒高、中、低剂量(80,40,20 g·kg-1)组,采用四氯化碳复合乙醇诱导大鼠肝纤维化模型,造模8周成功后,分别给予相应药物ig,每日1次,连续4周,正常组、模型组ig等体积生理盐水。第12周末,检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基酸转移酶(AST),透明质酸(HA);苏木素伊红(HE)染色观察肝组织病理情况;采用实时荧光定量PCR(Realtime PCR)及免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织i NOS mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中ALT,AST,HA含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、扶正化瘀组、扶脾柔肝方低、中剂量组血清中的ALT,AST含量均明显降低(P<0.05),高剂量组ALT,AST含量显著降低(P<0.01),秋水仙碱组、扶正化瘀组、扶脾柔肝方中剂量组血清中的HA含量明显降低(P<0.05),扶脾柔肝方高剂量组HA含量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各药物干预组肝组织内纤维化程度均有不同程度减轻(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠肝组织i NOS mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,各药物干预组大鼠肝组织i NOS mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),其中以扶脾柔肝方高剂量组最明显。结论:扶脾柔肝方配方颗粒下调纤维化肝组织i NOS mRNA和蛋白表达水平,可能是其抗肝纤维化作用机制之一。

补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织纤维化的影响及机制研究

目的:观察补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织中TβRⅠ、TβRⅡ及α-SMA的mRNA和蛋白表达的影响,探讨补肾柔肝方抗肝纤维化的作用机制。方法:Wistar大鼠53只,随机分为4组,空白对照组、模型组、秋水仙碱组、补肾柔肝方组。除空白对照组外,其余均造模,造模组首次于背部皮下注射纯CCl45 ml/kg,3 d后皮下注射40%(V/V)CCl4花生油3 ml/kg,每周2次,造膜8周制备肝纤维化模型。造模后秋水仙碱组用秋水仙碱水溶液灌胃(5 ml·kg-1·d-1),补肾柔肝方组给予补肾柔肝方流浸膏灌胃(5 ml·kg-1·d-1),连续8周。取各组大鼠肝组织,分别采用PT-PCR法和Western blot法检测肝组织TβRⅠ、TβRⅡ、α-SMA mRNA表达和蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠的TβRⅠ、TβRⅡ、α-SMA蛋白表达升高;TβRⅠ、TβRⅡmRNA、α-SMA mRNA表达明显升高(P<0.01);与模型组大鼠相比,秋水仙碱组及补肾柔肝方组TβRⅠa、TβRⅡ、α-SMA蛋白表达水平有所降低;TβRⅠ、TβRⅡmRNA、α-SMAmRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论:补肾柔肝方能够降低大鼠肝脏内TβRⅠ、TβRⅡ、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平,减轻大鼠肝脏的纤维化程度。

补肾柔肝方抑制血管新生的抗小鼠肝纤维化作用机制

目的:从血管新生角度探讨补肾柔肝方抗小鼠肝纤维化作用机制。方法:雄性C57小鼠按体质量分层随机分为正常组、模型组、补肾柔肝方组、索拉非尼(Sorafenib)组。模型组、补肾柔肝方组、索拉非尼组以0.4%二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射,1次/d,每周3次,共8周,诱导肝纤维化模型。造模第5周开始给药,8周后处死留取血清、肝组织样本。记录小鼠体质量变化及死亡情况;取材后检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及白蛋白(ALB)含量。以天狼猩红胶原染色和肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量评估肝纤维化程度;以肝组织血小板内皮细胞粘附分子-1(CD31)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)蛋白表达情况评价肝脏血管新生情况。结果:模型组小鼠死亡率为15.4%(2/13),补肾柔肝方组无小鼠死亡,索拉非尼组小鼠死亡率7.7%(1/13)。补肾柔肝方组及索拉非尼组小鼠血清ALT、AST含量较模型组降低(P<0.05),血清ALB含量升高(P<0.05);补肾柔肝方组和索拉非尼组小鼠肝组织Hyp含量较模型组显著降低(P<0.05)。天狼星红染色显示,补肾柔肝方组和索拉非尼组纤维化程度较模型组明显减轻;Western blot及肝组织免疫组化实验显示,补肾柔肝方组和索拉菲尼组小鼠肝组织CD31和VEGFR2蛋白表达较模型组均显著下调(P<0.05)。结论:补肾柔肝方可有效改善DMN诱导小鼠模型肝纤维化,其作用机制可能与抑制血管新生有关。

柔肝方对肝纤维化小鼠肝脏内IL-22分泌和IL-22R1表达作用的研究

目的:监测柔肝方对刀豆蛋白A(ConA)联合3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶(DDC)诱导的肝纤维化小鼠肝脏内白介素-22(IL-22)分泌及白介素-22受体1(IL-22R1)表达的影响,探讨柔肝方抗肝纤维化的作用机制。方法:60只小鼠随机分为对照组、模型组和柔肝方组,每组20只。模型组和柔肝方组小鼠尾静脉注射ConA,每周1次,并予DDC饮食;对照组小鼠尾静脉注射等体积0.9%NaCl溶液,正常饮食。柔肝方组小鼠按8.5 g/kg灌胃给予柔肝方颗粒,每天1次;对照组和模型组小鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液。药物连续干预10周。10周后处死小鼠,监测各组小鼠肝功能、肝脏中IL-22分泌及IL-22R1表达。结果:(1)与对照组比较,模型组和柔肝方组小鼠肝脏中IL-22、IL-22R1、IL-10R2和STAT3 mRNA表达明显升高(P<0.01,P<0.001);与模型组比较,柔肝方组小鼠肝脏中IL-22和IL-10R2 mRNA表达明显升高(P<0.001)。(2)与对照组比较,模型组肝星状细胞(HSCs)表面的IL-22R1 mRNA表达明显升高(P<0.05)、HSCs内的STAT3 mRNA表达明显升高(P<0.05),柔肝方组HSCs表面的IL-22R1和IL-10R2 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.001),柔肝方组HSCs内的STAT3 mRNA表达升高(P<0.001);与模型组比较,柔肝方组HSCs表面的IL-22R1 mRNA和HSCs内的STAT3 mRNA表达明显升高(P<0.01,P<0.001)。(3)与对照组比较,模型组和柔肝方组Th22细胞数量明显增加(P<0.001);与模型组比较,柔肝方组Th22细胞数量明显增加(P<0.01)。结论:柔肝方可增加肝脏内IL-22分泌及HSCs表面IL-22R1的表达,从而发挥抗肝纤维化的作用。

柔肝化纤解毒方治疗原发性肝癌TACE术后综合征的临床疗效观察

目的:观察柔肝化纤解毒方治疗原发性肝癌患者经导管肝动脉化疗栓塞(TACE)术后综合征的临床疗效,为中药联合TACE治疗原发性肝癌提供临床证据。方法:纳入接受TACE术治疗的原发性肝癌患者60例,采用随机单盲的方法分为两组,对照组采用TACE术后常规西药对症支持治疗;治疗组在常规西药对症治疗的基础上加服柔肝化纤解毒方,治疗14d。观察治疗前后两组患者的中医证候积分和TACE术后综合征的持续时间和程度;在治疗前、治疗后分别进行KPS评分和血清甲胎蛋白(AFP)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)检测。结果:治疗组总有效率为93.3%(28/30),对照组总有效率为63.3%(19/30),治疗组临床中医证候疗效显著优于对照组(P<0.05);治疗组TACE术后肝区疼痛、发热、恶心呕吐、便秘的持续时间均较对照组显著缩短(P<0.05);与治疗前比较,两组患者TACE的KPS评分,血清AFP、ALT、AST、TBIL均显著下降(P<0.05);与对照组比较,治疗组TACE术后KPS评分,血清AFP、ALT、AST、TBIL均显著下降(P<0.05)。结论:柔肝化纤解毒方可显著降低TACE术后中医证候积分和TACE术后综合征症状程度和持续时间,降低血清AFP、ALT、AST、TBIL,提高KPS评分,改善患者生活质量,值得临床推广。