基于miR-135a/FOXO1/PINK1通路探讨柔肝化纤颗粒调控线粒体自噬抑制肝星状细胞活化的机制

目的基于miR-135a/FOXO1/PINK1通路探讨柔肝化纤颗粒通过调控线粒体自噬来抑制肝星状细胞活化与增殖的影响及其机制。方法HSC-T6分为空白组、H_(2)O_(2)组、miR-135a-NC组、miR-135a-mimic组、miR-135a-in-hibitor-NC+H 2 O2组、miR-135a-inhibitor+H_(2)O_(2)组、柔肝化纤颗粒含药血清对照组、H_(2)O_(2)+含药血清对照组、H_(2)O_(2)+含药血清组、H_(2)O_(2)+含药血清+miR-135a-NC组及H_(2)O_(2)+含药血清+miR-135a-mimic组。分别采用Real-time PCR、Western Blot、ELISA及流式细胞术检测miR-135a、FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Smad2、p-Smad2、转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、NF-κB p65、p-NF-κB p65、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TNF-α表达及线粒体膜电位、活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成。结果给予H_(2)O_(2)及过表达miR-135a可显著上调HSC-T6 miR-135a、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、p-Smad2、TGF-β1、p-NF-κB p65、TNF-α表达及ROS生成(P<0.01);下调FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ表达与线粒体膜电位(P<0.01)。给予柔肝化纤颗粒及抑制miR-135a表达可显著下调HSC-T6 miR-135a、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、p-Smad2、TGF-β1、p-NF-κB p65、TNF-α表达及ROS生成(P<0.01);上调FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ表达与线粒体膜电位(P<0.01)。给予柔肝化纤颗粒同时过表达miR-135a可抑制柔肝化纤颗粒对HSC-T6的影响(P<0.01)。结论线粒体自噬可抑制HSC-T6活化,其机制与线粒体自噬抑制ROS生成,进而抑制TGF-β1/Smad2通路及炎症反应有关;柔肝化纤颗粒亦可抑制HSC-T6活化,其机制与柔肝化纤颗粒抑制miR-135a表达,活化FOXO1/PINK1通路,从而促进线粒体自噬有关。

柔肝化纤颗粒动员骨髓间充质干细胞归巢治疗肝纤维化大鼠的机制研究

目的探讨柔肝化纤颗粒对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)归巢于肝脏的影响及治疗肝纤维化效果。方法选取SD雄性大鼠52只,分为空白对照组(10只)、模型组(42只),建模成功后将肝纤维化大鼠模型随机分为模型组、BMSCs组、柔肝化纤颗粒组、柔肝化纤颗粒+BMSCs组。干预4周后,分别采用qPCR、Western Blot检测各组肝组织AFP、ALB、CK18基因表达与SDF-1、CXCR4、HGF、EGF基因及蛋白表达、HE染色、Masson染色检测肝组织纤维化程度、PAS法检测肝脏储存糖原功能及冷冻切片检测携带绿色荧光蛋白的BMSCs向肝组织归巢情况。结果动物实验方面,与模型组相比,使用柔肝化纤颗粒联合BMSCs移植组肝脏组织AFP、ALB、CK18表达上调,HGF、EGF表达上调,肝脏内携带绿色荧光蛋白的BMSC数量明显增加,肝纤维化程度下降。结论柔肝化纤颗粒能动员BMSCs归巢于纤维化肝组织,并能够修复受损肝组织,其机制可能与SDF-1/CXCR4轴有关。

柔肝化纤颗粒联合骨髓间充质干细胞移植治疗乙肝肝硬化的临床观察

目的:观察柔肝化纤颗粒联合骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗乙肝肝硬化的疗效。方法:将90例乙肝肝硬化患者按随机数字表法分为A组(西医内科综合治疗组)、B组(MSCs移植组)、C组(MSCs移植联合柔肝化纤颗粒组)。检测患者治疗前后肝功能、凝血酶原(PT)、HBV DNA载量、表观扩散系数(ADC值)及Child-Pugh。结果:治疗后3组患者谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、PT水平均低于治疗前,白蛋白(ALB)高于治疗前,且C组患者治疗后AST、ALT、TBIL、PT均低于A组、B组(P<0.05);治疗后3组HBV DNA载量显著下降,且C组治疗后HBV DNA载量低于A组、B组(P<0.05);治疗后3组Child-Pugh评分低于治疗前,且C组治疗后Child-Pugh评分低于A组、B组(P<0.05);3组患者治疗后ADC均高于治疗前(P<0.05),且C组患者治疗后ADC高于A组、B组(P<0.05)。C组总有效率高于A组、B组,B组总有效率高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:柔肝化纤颗粒联合骨髓间充质干细胞移植治疗乙肝肝硬化能明显改善肝功能、肝硬化程度、凝血功能,并提高临床疗效。

柔肝化纤颗粒组方规律探讨

柔肝化纤颗粒是王振常教授有效治疗肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的心得方剂,现已成为广西国际壮医医院脾胃肝病科的院内制剂,临床用于治疗肝纤维化取得了显著成效。处方在祖国传统中医基础上,结合壮医药,组方严谨,方中以鳖甲、黄精、枸杞子为君药,柔肝益肾;以黄芪、薏苡仁、鸡内金、橘红为臣药,健脾化湿;以虎杖、泽兰、牡蛎为佐药,化结散瘀;以黑枣为使药,缓急止痛,调和诸药。文章从中药性味归经及功效、中医理论及现代药理学研究出发,系统阐述了其组方规律,得出柔肝化纤颗粒的治法用药核心为滋补肝肾、健脾祛湿、散瘀解毒。