荧光假单胞菌2P24中RstA蛋白的功能鉴定

探究荧光假单胞菌2P24 中OmpR 家族转录因子RstA 的功能,明确其对EmhABC 外排泵的调控作用及机制。利用共适应分析预测RstA 的潜在功能;采用同源重组技术构建rstA、emhABC 基因缺失菌株ΔrstA 和ΔemhABC,检测野生型、ΔrstA、ΔemhABC 对多种抗生素的敏感性;通过qRT-PCR 和β-半乳糖苷酶实验检测emhABC 在野生型和ΔrstA 菌株中的转录、表达水平;表达纯化His-RstA 蛋白并经凝胶阻滞实验检测RstA 蛋白与emhABC 基因启动子区域的结合活性。结果显示,RstA 同EmhABC 存在共适应性,并预测RstA 与多种抗生素胁迫环境的适应相关;ΔrstA 和ΔemhABC 对多种抗生素耐受性下降;与野生株相比,突变株ΔrstA 中emhABC 的转录、表达水平均下降超过3 倍;成功表达纯化His-RstA 蛋白,经凝胶阻滞实验显示重组His-RstA 蛋白可与emhABC 基因启动子区域特异性结合。OmpR 家族转录因子RstA 通过结合在emhABC 上游启动子区域正向调控EmhABC 的表达,并影响荧光假单胞菌2P24 的多重耐药性。