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猪戊型肝炎病毒RT-nPCR检测方法的建立及应用
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作者 丁宁 佟铁铸 +3 位作者 朱事康 王国胜 江礼华 刘康 《畜牧兽医科技信息》 2017年第9期24-24,共1页
猪戊型肝炎病毒(以下简称为SHEV)一般是正链的RNA病毒,能够使猪感染猪戊型肝炎。现如今,此类病毒在我们国家十分普遍,如果没能将其进行控制,则会造成更大的风险。
关键词 猪戊型肝炎病毒 rt—npcr检测方法 应用
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同时检测美洲型及欧洲型PRRSV的多重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:12
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作者 施开创 莫胜兰 +3 位作者 张步娴 屈素洁 赵日浪 钟诚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期810-814,共5页
为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp... 为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp2基因(338 bp/248 bp)、第3对引物扩增欧洲型病毒株ORF5基因(614 bp)。经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分美洲型经典病毒株、HP-PRRSV株以及欧洲型病毒株的多重RT-PCR检测方法。该方法可以特异扩增3种病毒的基因,其重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝;而与猪的其它重要病原均无交叉反应。应用该方法检测176份临床疑似病料样品,结果 PRRSV阳性45份,其中美洲型变异病毒株41份、经典病毒株4份,未检测到欧洲型病毒株。表明本研究建立的多重RT-PCR检测方法可以用于PRRSV的快速鉴别诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型病毒株 欧洲型病毒株 多重rt.PCR 检测方法
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牛冠状病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量:8
3
作者 刘合义 孙留霞 +5 位作者 王进轶 刘双翼 王红 余丽芸 朴范泽 侯喜林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第2期25-27,共3页
关键词 牛冠状病毒 PCR检测方法 犊牛腹泻 rt 呼吸道疾病 成年牛 水样腹泻 世界性
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实时荧光RT-PCR方法检测马铃薯V病毒 被引量:6
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作者 张永江 辛言言 +4 位作者 李桂芬 马洁 魏梅生 朱水芳 沈建国 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第6期36-38,共3页
为了给马铃薯V病毒提供快速灵敏的检测技术以防止其传播扩散,根据其外壳蛋白基因核苷酸保守序列设计引物和TaqMan探针,通过特异性及灵敏度试验建立该病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法检测灵敏度高,至少可检测到36 pg/μL的总RNA;... 为了给马铃薯V病毒提供快速灵敏的检测技术以防止其传播扩散,根据其外壳蛋白基因核苷酸保守序列设计引物和TaqMan探针,通过特异性及灵敏度试验建立该病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法检测灵敏度高,至少可检测到36 pg/μL的总RNA;对马铃薯V病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯A病毒、李痘病毒及马铃薯X病毒具有良好的特异性。该方法快速、灵敏、无需任何PCR后处理且交叉污染风险小,可用于马铃薯V病毒的快速检测。 展开更多
关键词 马铃薯V病毒 实时荧光rt—PCR方法 检测
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应用RT-PCR方法检测辣椒轻微斑驳病毒 被引量:15
5
作者 黄粤 马荣群 岳文辉 《山东农业科学》 2004年第5期56-57,共2页
为调查青岛地区侵染辣椒植株的辣椒轻微斑驳病毒 (PMMoV)的情况 ,以健康植株和带病植株为试验材料提取总RNA ,并以此总RNA为模板进行RT -PCR扩增 ,建立了PMMoV的RT -PCR检测体系 。
关键词 rt—PCR方法 检测技术 辣椒 斑驳病毒 带病植株
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禽流感病毒通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR检测方法研究 被引量:4
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作者 杨素 廖秀云 +4 位作者 廖明 沙才华 徐海聂 曹伟胜 陈伟生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期165-171,共7页
将套式PCR与荧光RT-PCR技术相结合,叠加这两种技术在敏感性和特异性方面的优势,建立敏感性高于常规荧光RT-PCR的套式荧光RT-PCR检测方法。从GenBank下载禽流感病毒NP基因和HA基因序列,通过比对选取较为保守的片段,设计AIV通用型及H5亚... 将套式PCR与荧光RT-PCR技术相结合,叠加这两种技术在敏感性和特异性方面的优势,建立敏感性高于常规荧光RT-PCR的套式荧光RT-PCR检测方法。从GenBank下载禽流感病毒NP基因和HA基因序列,通过比对选取较为保守的片段,设计AIV通用型及H5亚型套式荧光RT-PCR引物和TaqMan探针;利用体外转录技术制备阳性对照,构建目的片段重组质粒;经反应体系和反应条件的优化,建立套式荧光RT-PCR检测方法。试验结果表明,该方法可特异性地检测禽流感病毒及H5亚型AIV,在30份鱼类养殖水样中检测到19份阳性样品,具有较高的敏感性和良好的特异性;具有高通量、快速的特点,可对大批量样品同时进行检测,试验耗时仅需5h,是自然环境样品中极微量禽流感病毒检测的好方法。 展开更多
关键词 禽流感病毒 通用型 H5亚型 套式荧光rt—PCR 检测方法
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番茄环斑病毒的普通RT-PCR和巢式PCR检测方法 被引量:4
7
作者 杨翠云 于翠 +1 位作者 沈禹飞 代光辉 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2005年第4期396-400,共5页
根据番茄环斑病毒(ToRSV)外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计了2对引物(引物对I和II),利用RT-PCR分别扩增出预期大小的800bp和580bp的条带,其中引物对II扩增效率较高、特异性较好。以引物对I和II进行2轮PCR扩增,建立了巢式PCR检测方法,其... 根据番茄环斑病毒(ToRSV)外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计了2对引物(引物对I和II),利用RT-PCR分别扩增出预期大小的800bp和580bp的条带,其中引物对II扩增效率较高、特异性较好。以引物对I和II进行2轮PCR扩增,建立了巢式PCR检测方法,其灵敏度比普通RT-PCR提高100~200倍。序列测定和分析表明所测定的序列为ToRSVCP基因的部分序列,在系统关系树上与ToRSV的其他分离物形成一簇,亲缘关系很近。 展开更多
关键词 番茄环斑病毒 rt—PCR 巢式PCR 检测方法
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RT-PCR检测猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒方法的建立与应用 被引量:14
8
作者 涂宜强 杨增歧 徐辉 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第6期52-53,共2页
作者参考国内外已发表猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒(PRRSV)的基因序列和PRRSV相关的RT-PCR检测方法报道,根据PRRSV高度保守、高特异性的NP蛋白基因设计了一对引物,通过对疫苗毒株、细胞分离株的检测,建立了PRRSVRT-PCR检测方法。进一步... 作者参考国内外已发表猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒(PRRSV)的基因序列和PRRSV相关的RT-PCR检测方法报道,根据PRRSV高度保守、高特异性的NP蛋白基因设计了一对引物,通过对疫苗毒株、细胞分离株的检测,建立了PRRSVRT-PCR检测方法。进一步对40份临床样品进行了检测应用,结果有17份阳性样品,与临床症状和血清学结果相符。 展开更多
关键词 呼吸道综合征 猪繁殖障碍 病毒 rt PCR检测方法 PRRSV 基因序列 基因设计 疫苗毒株 检测应用 临床样品 临床症状 国内外 特异性 分离株 血清学
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机械生长因子实时荧光定量RT-PCR检测方法研究 被引量:4
9
作者 肖卫华 陆耀飞 《上海体育学院学报》 CSSCI 北大核心 2010年第6期43-45,共3页
目的:建立机械生长因子(MGF)基因表达的实时荧光定量RT-PCR方法。方法:应用实时定量RT-PCR法检测腓肠肌中MGF基因表达。结果及结论:荧光定量RT-PCR法能绝时定量MGF兴奋剂基因表达水平,相关系数大于0.99。
关键词 机械生长因子 信使核糖核酸 荧光定量rt—PCR 检测方法
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同时检测PRRSV美洲型经典株、变异株和TJM-F92疫苗株的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立及应用 被引量:2
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作者 施开创 官家明 +4 位作者 胡杰 李凤梅 莫胜兰 陈汉忠 李军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期453-457,共5页
为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV美洲型经典株、变异株及弱毒活疫苗TJM-F92株的基因序列差异,设计了2对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分PRRSV美洲型经... 为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV美洲型经典株、变异株及弱毒活疫苗TJM-F92株的基因序列差异,设计了2对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分PRRSV美洲型经典株、变异株及TJM-F92疫苗株的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,与猪其他常见病毒无交叉反应;经典株、变异株、TJM-F92疫苗株重组质粒标准品的检出下限均为2.68拷贝/μL,比常规PCR敏感100倍;组内及组间重复试验的变异系数均小于1.5%。此外,该方法对324份疑似PPRSV感染的临床样品进行检测,结果显示PRRSV阳性114份,其中美洲型变异株105份、经典株6份、TJM-F92疫苗株3份,变异株和经典株混合感染4份。本研究建立的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法可以为PRRSV美洲型野毒株、疫苗株的快速鉴别检测及流行病学调查提供有效的技术手段。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型病毒株 TJM—F92疫苗株 多重TaqMan荧光定量rt—PCR 检测方法
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口蹄疫通用型实时荧光RT-PCR检测方法的建立 被引量:2
11
作者 邱杨 肖性龙 +6 位作者 刘建丽 梅艳群 岳学民 李惠芳 张经纬 余以刚 吴晖 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第8期20-22,共3页
关键词 PCR检测方法 口蹄疫病毒 世界动物卫生组织 通用型 联合国粮农组织 烈性传染病 rt 荧光
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西尼罗热病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 姜焱 张常印 陈国强 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2005年第5期25-27,共3页
参考Genebank发表的西尼罗热病毒(WestNilevirus,WNV)E糖蛋白基因序列,自行设计合成一对引物,对WNV进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,呈现一条约400bp的条带,将其克隆入pMD18-T-Vector载体中,并进行序列测定,与已发表的WNV基因比较... 参考Genebank发表的西尼罗热病毒(WestNilevirus,WNV)E糖蛋白基因序列,自行设计合成一对引物,对WNV进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,呈现一条约400bp的条带,将其克隆入pMD18-T-Vector载体中,并进行序列测定,与已发表的WNV基因比较发现,核苷酸的同源性为99.7%,证实为WNV的E基因,通过对样品多次检测,都能扩增出一条约400bp的条带,表明该方法比较稳定。 展开更多
关键词 PCR检测方法 rt 病毒 Vector virus PCR扩增 基因序列 设计合成 电泳分析 序列测定 方法比较 糖蛋白 琼脂糖 同源性 核苷酸 E基因 条带
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PRRSV的荧光抗体和RT-PCR方法检测 被引量:1
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作者 赵化阳 白玉 +6 位作者 李玉荣 苏晓鸥 尹小敏 周向梅 杨建民 赵德明 刘思当 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第8期68-69,共2页
关键词 PRRSV PCR方法 荧光抗体 正链RNA病毒 猪繁殖与呼吸综合征 检测 rt 开放阅读框架
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马动脉炎病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量:3
14
作者 杜建 王志亮 +2 位作者 陈继明 金宁一 张念祖 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2005年第5期28-30,共3页
根据已报道的马动脉炎病毒基因组保守基因核苷酸序列,设计并合成了1对引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,成功地从病毒感染的细胞中扩增出约200bp的片段,与理论设计值(204bp)大小一致。而正常的RK-13、BHK-21和Vero细胞和同为动脉炎病... 根据已报道的马动脉炎病毒基因组保守基因核苷酸序列,设计并合成了1对引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,成功地从病毒感染的细胞中扩增出约200bp的片段,与理论设计值(204bp)大小一致。而正常的RK-13、BHK-21和Vero细胞和同为动脉炎病毒科的猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)作为对照的扩增结果均为阴性。敏感性试验表明,该方法可以检测出10-4个TCID50的病毒含量,说明具有较好的敏感性。 展开更多
关键词 PCR检测方法 马动脉炎病毒 rt 呼吸道综合征 Vero细胞 TCID50 核苷酸序列 病毒基因组 PCR扩增 敏感性试验 病毒感染 病毒含量 设计值 猪繁殖
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猪流行性腹泻病毒套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:3
15
作者 贾赟 胡传伟 +4 位作者 刘文斌 陈阳 简中友 袁文泽 陈溥言 《检验检疫科学》 2005年第3期7-9,共3页
〔目的〕建立PEDV的新型套式RT-PCR检测方法,为该病的诊断和流行病学研究提供更为敏感和可靠的手段。〔方法〕根据Genbank已发表的猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的基因序列,设计合成两对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了检测PED... 〔目的〕建立PEDV的新型套式RT-PCR检测方法,为该病的诊断和流行病学研究提供更为敏感和可靠的手段。〔方法〕根据Genbank已发表的猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的基因序列,设计合成两对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了检测PEDV的新型套式RT-PCR方法,并用该方法对PEDV进行了快速诊断和分析。〔结果〕外引物扩增目的片段长度为1328bp,内引物扩增目的片段为540bp。〔结论〕该套式RT-PCR方法比普通RT-PCR更加灵敏、可靠,可用于PEDV的快速诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 PCR检测方法 rt GENBANK PCR方法 PEDV 应用 流行病学研究 流行病学调查 快速诊断 基因序列 设计合成 反应条件 片段长度 N蛋白 引物 可靠
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毛细管电泳RT-PCR方法在中国明对虾抗菌肽基因表达定量检测中的应用
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作者 柳峰松 董波 +2 位作者 李富花 李莉 相建海 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期77-81,共5页
建立了毛细管电泳RT-PCR检测基因表达谱的方法,并利用实时定量PCR技术对此方法进行基因表达定量的可靠性进行了验证.利用此新方法研究了弧菌和白斑综合征病毒(WSSV)感染对中国明对虾抗菌肽(penaeidin)基因mRNA表达的影响.结果表明,弧菌... 建立了毛细管电泳RT-PCR检测基因表达谱的方法,并利用实时定量PCR技术对此方法进行基因表达定量的可靠性进行了验证.利用此新方法研究了弧菌和白斑综合征病毒(WSSV)感染对中国明对虾抗菌肽(penaeidin)基因mRNA表达的影响.结果表明,弧菌感染后对虾肽基因表达变化可分为三个阶段:迅速下调,缓慢回升,持续稳定.WSSV感染后对虾肽基因表达的变化显示出与弧菌感染组不同的变化趋势:迅速下调,迅速回升,再次下降. 展开更多
关键词 中国明对虾 毛细管电泳rt—PCR 对虾肽 基因表达 弧菌 WSSV rt-PCR方法 基因表达谱 毛细管电泳 定量检测
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RT-PCR方法检测甲醛固定、石蜡包埋的肿瘤组织标本可以诊断伴YWHAE-FAM22基因融合的子宫内膜间质肉瘤(英)
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作者 马亚琪(译) 刘爱军(校) 《诊断病理学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第3期164-164,共1页
经典的低级别子宫内膜问质肉瘤(ESS)常发生JAZF1-SUZ12基因融合。与低级别ESS不同的是,有一部分ESS具有t(10:17)(q23:p13)基因异常,导致YWHAE与高度同源FAM22家族成员-FAM22A或FAM22B发生基因融合,该型ESS显示高级别组织学... 经典的低级别子宫内膜问质肉瘤(ESS)常发生JAZF1-SUZ12基因融合。与低级别ESS不同的是,有一部分ESS具有t(10:17)(q23:p13)基因异常,导致YWHAE与高度同源FAM22家族成员-FAM22A或FAM22B发生基因融合,该型ESS显示高级别组织学特征,临床经过更具侵袭性(即频繁和早期复发)。 展开更多
关键词 子宫内膜间质肉瘤 基因融合 PCR方法 甲醛固定 组织标本 石蜡包埋 检测 rt
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BVDV荧光RT-PCR检测方法的建立及应用
18
作者 姚晓辉 李华强 +4 位作者 陈瑞爱 练炳洲 王林川 邓月嫦 王凤国 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期154-157,共4页
根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)毒株序列,选择5’NTR保守区域设计1对特异性引物和1条Taqman探针,通过矩阵法筛选引物探针的最佳浓度,建立了检测BVDV的荧光RT-PCR方法。结果显示,用1.5μL上下游引物混合液(10μmol/L)和0.5μ... 根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)毒株序列,选择5’NTR保守区域设计1对特异性引物和1条Taqman探针,通过矩阵法筛选引物探针的最佳浓度,建立了检测BVDV的荧光RT-PCR方法。结果显示,用1.5μL上下游引物混合液(10μmol/L)和0.5μL探针溶液(10μmol/L)对BVDV进行检测,可获得较小Ct值、较高吸光值,并可降低检测成本。对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验,结果表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好。将该方法应用在疫苗生产中,可快速准确地筛选出合格的原辅材料和半成品,为生产提供及时准确可靠的数据。 展开更多
关键词 BVDV 荧光rt—PCR 检测方法
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新型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量:7
19
作者 宋永峰 温纳相 +3 位作者 宋延华 周全 周丽 高恒 《中国家禽》 北大核心 2009年第18期19-21,共3页
根据GenBank中已发表的1型鸭病毒性肝炎(duck hepatitis virus type1,DHV-1)和新型鸭病毒性肝炎(new type duck hepatitis virus,N-DHV)全基因序列,在非同源区域设计一对新型鸭病毒性肝炎特异性引物P1/P2,对鸭病毒性肝炎病毒、鸭瘟病毒... 根据GenBank中已发表的1型鸭病毒性肝炎(duck hepatitis virus type1,DHV-1)和新型鸭病毒性肝炎(new type duck hepatitis virus,N-DHV)全基因序列,在非同源区域设计一对新型鸭病毒性肝炎特异性引物P1/P2,对鸭病毒性肝炎病毒、鸭瘟病毒、鹅细小病毒细胞毒、流感病毒等鸭常见病病原进行RT-PCR扩增。结果表明引物特异性良好,引物P1/P2仅能特异性扩增出N-DHV的638bp基因片段;敏感性试验结果表明:N-DHV RNA最低检出量为21pg。同时对临床样品的检测中发现DHV-1和N-DHV存在混合感染的情况。该方法的建立为鸭病毒性肝炎病毒尤其是新型鸭病毒性肝炎病毒的鉴定及快速诊断提供了可靠的依据。 展开更多
关键词 新型鸭肝炎病毒 rt—PCR 检测方法
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禽流感病毒通用型荧光RT-PCR快速检测方法的应用
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作者 王海斌 《养殖技术顾问》 2010年第4期143-143,共1页
荧光PCR技术是将荧光素标记的探针与引物一起,在荧光PCR仪中反应,电脑对整个反应进行实时监测,避免了交叉污染,大大提高检测的敏感性。荧光PCR的与普通PCR比较,敏感性提高约100倍,可检测到组织中的微量病毒。
关键词 快速检测方法 荧光素标记 PCR技术 禽流感病毒 通用型 应用 rt 荧光PCR
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