Experimental study on the protective effect of Chinese medicine Ruanganyin on the liver of HBV transgenic mice

Objective: To study the protective effect of ruanganyin on the liver of HBV transgenic mice. Methods: 50 half HBV transgenic mice, male and female, were randomly divided into treatment group (high, medium and low dose Ruanganyin), model group, positive control group (entecavir dispersible tablet) and 10 non HBV transgenic mice as blank control. The mice were killed after 4 weeks of drug intervention.The serum levels of ALT, AST, TBIL, LN, HA, IV-C and PCIII were observed. Results: (1) compared with the blank control group, the ALT,AST and TBIL levels in the model group were significantly higher than those in the blank control group (P < 0.01);compared with the model group, the ALT, AST and TBIL levels in the high-dose group of ruanganyin after treatment were significantly lower than those in the model group (P<0.01/P<0.05);the ALT, AST and TBIL levels in the positive control group were lower than those in the model group (P<0.01/P<0.05) There was no significant difference in ALT, AST and TBIL levels between the two groups (P>0.05). (2) Compared with the blank control group, the level of LN, HA, IV-C and PCIII in the model group was significantly higher than that in the blank control group (P<0.01);compared with the model group, the level of LN, HA and IV-C in the high-dose group and the positive control group after treatment was significantly lower than that in the model group (P<0.01);the level of PCIII in the high-dose group and the positive control group after treatment was significantly lower than that in the model group (P<0.01);There was no significant difference in LN, HA, IV-C and PCIII levels between the two groups (P> 0.05). Conclusion: Chinese medicine Ruanganyin has the effects of protecting liver, reducing enzyme and anti fibrosis, but its mechanism of anti fibrosis needs further study.

中药软肝饮对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠TGF-1/Smad信号通路的影响

[目的]研究中药软肝饮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGF-1及Smad3,Smad7表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。[方法]Wistar大鼠40只,随机分成正常对照组,模型对照组,软肝饮治疗组,鳖甲软肝片对照组,采用CCl4背部皮下注射构建肝纤维化模型,行HE和VG染色,光镜下观察肝组织肝纤维化程度。同时免疫组化SABC方法检测各组TGF-1、Smad3和Smad7的表达。[结果]与正常对照组相比,模型组TGF-1、Smad3表达明显增强,Smad7表达明显下降。经软肝饮治疗后大鼠肝脏TGF-1表达比模型组减弱。软肝饮同时下调Smad3的表达,上调Smad7的表达。另外,软肝饮组大鼠肝脏病理变化显著改善。[结论]肝炎平对大鼠肝纤维化肝脏TGF-1/Smad信号通路有明显的影响,能抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能为抑制TGF-1表达,下调Smad3及上调Smad7的表达。

中药软肝饮对HBV转基因小鼠iNKT细胞及其表面PD-1、PD-L1表达的影响

目的:研究中药软肝饮对HBV转基因小鼠iNKT细胞及其表面PD-1、PD-L1表达的影响,探讨中药软肝饮对HBV转基因小鼠抗病毒的作用机制。方法:将50只雌雄各半HBV转基因小鼠随机分为治疗组(高、中、低剂量软肝饮)、模型组、阳性对照组(恩替卡韦分散片)等5组,另用10只非HBV转基因小鼠作为空白对照。药物干预灌胃4周后处死小鼠,观察各组小鼠外周血及肝脏中iNKT细胞及其表面PD-1、PD-L1的表达。结果:与空白对照组相比,模型组小鼠外周血iNKT细胞表达明显降低,iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达水平明显增高,差异有显著性意义(P<0.01);与模型组相比,治疗后软肝饮高剂量组和阳性对照组小鼠外周血iNKT细胞表达明显增高,iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达水平有一定程度的降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);软肝饮中剂量组小鼠外周血iNKT细胞表达有一定增加,有一定差异性(P<0.05),而iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达水平无明显变化,无明显差异性;软肝饮低剂量组小鼠外周血iNKT细胞表达及iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达无明显变化,无明显差异性(P>0.05)。HBV转基因小鼠肝脏中细胞iNKT的表达明显低于空白对照组,iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达明显高于空白对照组,均有统计学意义(P<0.05);结论:中药软肝饮调控HBV转基因小鼠的免疫机制可能通过阻断iNKT细胞上PD-1/PD-L1信号通路,调控iNKT细胞功能发挥抗HBV作用。

软肝饮对HBV转染细胞表达功能抑制的实验研究

目的 :观察软肝饮对HBV转染细胞表达功能的影响。方法 :本研究以乙型肝炎病毒 (HBV)转染细胞 (2 2 15细胞系 )作为筛选抗HBV药物的细胞模型 ,观察了纯草药方软肝饮对 2 2 15细胞分泌HBV表面抗原(HBsAg)和HBVe抗原 (HBeAg)的影响 ,并以抗病毒药物无环鸟甘为对照。结果 :软肝饮对 2 2 15细胞无明显毒性作用 ,同时显著抑制HBsAg成分。结论 :提示软肝软在体外有一定的抗病毒作用。

中药软肝饮对HBV转基因小鼠肝脏保护作用的实验研究

目的:探讨中药软肝饮对HBV转基因小鼠肝脏的保护作用。方法:通过将50只雌雄各半HBV转基因小鼠随机分为治疗组(高、中、低剂量软肝饮)、模型组、阳性对照组(恩替卡韦分散片)以及10只非HBV转基因小鼠作为空白对照,药物干预灌胃4周后处死小鼠,观察各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平以及层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原酶(Ⅳ-C)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平的表达。结果:(1)与空白对照组相比,模型组ALT、AST、TBIL水平明显比空白对照组高,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,治疗后软肝饮高剂量组ALT、AST、TBIL水平明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后阳性对照组ALT、AST、TBIL水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);而治疗后软肝饮中剂量、低剂量组ALT、AST、TBIL水平与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)与空白对照组相比,模型组LN、HA、Ⅳ-C、PCⅢ水平明显比空白对照组高,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,治疗后软肝饮高剂量组和阳性对照组LN、HA、Ⅳ-C水平明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01);治疗后软肝饮高剂量组和阳性对照组PCⅢ水平低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);而治疗后软肝饮中剂量、低剂量组LN、HA、Ⅳ-C、PCⅢ水平与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中药复方软肝饮具有保肝降酶、抗肝纤维化的作用,但其抗肝纤维化的机制还需进一步实验进行探讨研究。

基于网络药理学及细胞实验验证软肝饮治疗肝癌的可能

目的基于网络药理学及细胞实验研究软肝饮治疗肝细胞癌(HCC)的作用机制。方法基于中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、BATMAN数据库及Drugbank数据库筛选出软肝饮有效成分及靶点基因。通过GeneCards、OMIM数据库及Liverome、OncoDB.HCC数据库筛选出HCC的疾病靶点基因,运用Cytoscape构建化合物-基因靶点网络;并将有效成分靶目与疾病靶点上传到STRING数据库,构建蛋白互作网络图(PPI),使用R语言进行核心基因的筛选并对关键靶点进行GO富集分析和KEGG富集分析。基于网络分析结果,使用体外细胞实验方法对药物治疗关键靶点作用进行验证。结果(1)预测得到软肝饮治疗肝癌的有效成分59个及共作靶点1301个。有效成分中度值较高的为新隐丹参酮Ⅱ、脱氧新胰蛋白酶酮、次甲丹参醌、反式刚酸、槲皮素、茯苓甾醇、β谷甾醇等;共作靶点及PPI网络图核心基因为AKT1、TP53、PIK3CA、EGFR、JUN等;GO分析有血管收缩舒张调节、分泌颗粒腔、磷脂酶C活性等;KEGG通路分析有氨基酸代谢、神经活性配体-受体相互作用、MAPK信号通路、癌症关连通路等显著通路。(2)细胞实验表明,软肝饮含药血清处理肝癌Hu-7、HepG2细胞后,细胞增殖、迁移能力显著降低;Western Blot检测肝癌细胞经软肝饮含药血清处理后,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP凋亡相关蛋白表达相较肝癌细胞组和正常血清对照组升高;p-c-Raf、p-c-MEK、p-c-Myc、p-c-Fos蛋白表达相较肝癌细胞组和正常血清对照组下降。结论(1)生信学提示软肝饮和肝癌具有丰富的关联靶点,并通过多通路调控肝癌细胞的发生过程;(2)软肝饮可能借升高Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP凋亡蛋白表达,下调p-c-Raf、p-c-MEK、p-c-Myc、p-c-Fos肿瘤相关基因表达,从而促使肝癌Hu-7、HepG2细胞株凋亡,抑遏肝癌Hu-7、HepG2细胞株的增殖迁移侵袭能力,进而起到治疗肝癌的作用。

解毒软肝饮治疗门静脉高压随机平行对照研究

[目的]观察解毒软肝饮治疗门静脉高压症疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将68例门诊及住院患者按抛硬币法简单随机分为两组。对照组34例普萘洛尔,10mg/次,3次/d;复方鳖甲软肝片,2g/次,3次/d。治疗组34例解毒软肝饮(萆薢20g,牡蛎30g,姜黄10g,菟丝子13g,鸡骨草30g,桃仁12g,鸡内金10g;肝郁气滞加柴胡10g;毒素郁结加大黄10g,白花蛇舌草20g;气弱脾虚加党参、黄芪各20g,白术10g;发黄湿热加陈蒿20g),1剂/d,水煎250m L,早中晚口服。连续治疗180d为1疗程。观测临床症状、症状积分、不良反应。治疗1疗程,判定疗效。[结果]治疗组痊愈3例,显效11例,有效16例,无效4例,总有效率88.24%。对照组痊愈1例,显效2例,有效20例,无效11例,总有效率67.65%。治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。两组症状积分均有改善(P<0.01),治疗组改善优于对照组(P<0.05)。[结论]解毒软肝饮治疗门静脉高压症疗效满意,无严重不良反应,值得推广。