嗜碱性兼性自养莫拉氏菌M-z1.5-二磷酸核酮糖羧化酶基因的克隆

以莫拉氏菌(Moraxella sp).M-z 1.5-二磷酸核酮糖羧化酶(RubisCO)大小亚基N-末端氨基酸序列和真养产碱菌(Alcaligenes eutrophus)RubisCO大亚基靠C-末端保守区域DNA序列为依据,合成3个引物,以莫拉氏菌M-z染色体DNA为模板通过PCR扩增制备了二种探针,Southern杂交分析表明上述探针与莫拉氏菌M-z染色体DNA的两个ApaⅠ酶切片断(5kb、4kb)呈阳性杂交反应。认为完整的RubisCO基因包含在这两个片段中。分别将含目的基因的5kb,4kb DNA片段克隆至pUC118和pBluescript KS^+,构成质粒pP-CL511和pBS4,并绘制了这二个质粒限制性核酸酶酶谱。