水稻Rubisco亚基结合蛋白的纯化及性质研究

以水稻叶片为材料，经热处理、硫酸铵分部，采用了ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅｆａｓｔｆｌｏｗ和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ－３００层析，阶段和线性洗脱相结合的步骤，纯化了Ｒｕｂｉｓｃｏ亚基结合蛋白，其得率比前人报道的方法提高了１倍．纯化的Ｒｕｂｉｓｃｏ亚基结合蛋白的式量为７０８０００，亚基式量为５８９００，故为十二聚体．该蛋白在紫外区有２个吸收峰，分别为２１２．６ｎｍ和２７９．４ｎｍ．该蛋白的氨基酸组分分析表明，含较多的苯丙氨酸，酸性氨基酸和碱性氨基酸的比例为１∶１．３３．

光和蛋白合成抑制剂对水稻RubisCO大、小亚基和RubisCO亚基结合蛋白基因表达的影响

水稻RubiCO在体内周转率很低,而其亚基结合蛋白(rbcBP)的周转却很迅速。水稻黄化幼苗随照光时间增加,在24h内Ru—bisCO蛋白量迅速上升,而 rbcBP在照光 6h后,其蛋白含量即维持恒定。 在转录水平上,RubisCO小亚基(rbcS)对光最为敏感;同样,rbcS的转录对蛋白合成抑制剂的反应也最为敏感。用亚胺环己酮和氯霉素处理水稻叶片,得到结果与光处理基本一致。 光与蛋白质合成抑制剂对rbcL、rbcS和rbcBP在基因表达各种水平上均有不同程度的影响,而以翻译水平上的调控较为灵敏。rbcS在基因表达调控上可能起某种支配作用;rbcBP与 rbcL、rbcS表达调控协调性不很紧密。

豌豆核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶亚基结合蛋白的纯化及特性

用^(35)S-Met在照光下与豌豆完整叶绿体保温,显示新合成的标记的RubisCO大亚基与结合蛋白形成一复合物,经ATP处理后解离为结合蛋白亚基,同时释放出的标记的RubisCO大亚基参与了RubisCO的装配。豌豆叶片提取液经热处理,硫酸铵分部,DEAE-Sepharose fast flow和Sephacryl S-300柱层析在ND-PAGE,SDS-PAGE上显示为一条带,估计纯度达90％以上,得率比以前报道的高12倍。纯化的结合蛋白表面巯基数经测定为12±1个,总巯基数为36±1个。远紫外CD光谱具有典型的α-螺旋结构的光谱特性,α-螺旋度为39％。此外,以纯化的豌豆结合蛋白制备了多克隆抗体。琼脂糖双扩散实验显示,结合蛋白的抗体与结合蛋白产生一条沉淀线,而与豌豆的RubisCO无沉淀反应,这表明所得到的抗体是高度专一的。