蒙药悬钩子木配方颗粒HPLC指纹图谱及含量测定方法研究

目的:建立悬钩子木配方颗粒HPLC指纹图谱及含量测定研究方法,为悬钩子木配方颗粒的质量评价提供依据。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.05%磷酸为流动相,流速1 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长270 nm,测定悬钩子木配方颗粒中鞣花酸和芦丁的含量。建立15批悬钩子木配方颗粒指纹图谱,利用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行相似度分析,对特征峰进行指认。结果:含量测定方法学考察鞣花酸和芦丁在一定质量浓度范围内线性关系良好,精密度、重复性、稳定性、加样回收率的RSD均<2%,15批悬钩子木配方颗粒含量测定结果为:鞣花酸0.603%~1.802%,芦丁0.088%~0.333%。建立了15批悬钩子木配方颗粒指纹图谱,共指认10个共有峰,相似度均大于0.900,并指认表儿茶素、鞣花酸、芦丁。结论:建立的悬钩子木配方颗粒HPLC含量测定方法精密度较高,稳定性较好;HPLC指纹图谱分析方法简单,重现性良好,专属性较优,可为蒙药悬钩子木配方颗粒的物质基础及质量控制研究提供参考。

一测多评法同时测定悬钩木中3种化学成分

建立一测多评法(QAMS)同时测定悬钩木中3种成分的含量。运用高效液相色谱法(HPLC),以安捷伦SB-Aq-C18为色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液(17∶83,V/V)为流动相;柱温30℃,检测波长360 nm,流速1.0 mL/min;进样量10μL。以咖啡酸为内参物,计算鞣花酸、金丝桃苷的相对较正因子(f),并测定其含量。结果表明:咖啡酸、鞣花酸、金丝桃苷分别在0.18~1.85μg(r=0.9997),0.06~0.62μg(r=0.9998),0.03~0.30μg(r=0.9993)范围内与峰面积线性关系良好;平均加样回收率为97.66%~98.23%,RSD为1.77%~2.25%(n=9),均小于3.0%。指出了所建立的一测多评法可用于悬钩木中3种成分含量的同时测定,且方法简单、有效、结果准确。

蒙药悬钩子木黄酮类成分及其生物活性研究

目的：研究悬钩子木中黄酮类化学成分及其生物活性。方法：采用大孔吸附树脂柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、反相制备高效液相色谱及等方法分离纯化。根据理化性质及核磁共振（1D、2D-NMR）、高分辨质谱（HR-MS）等光谱方法进行结构鉴定。采用FRAP抗氧化法、Griess法及MTT法方法测定单体化合物的抗氧化、抗炎及细胞毒活性。结果：从悬钩子木的乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物分离得到8个黄酮类化合物,分别为：山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸丁酯（1）、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸丁酯（2）、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）、顺式椴树苷（4）、椴树苷（5）、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸乙酯（6）、槲皮素（7）、山柰酚（8）。活性检测表明化合物1-8均具有不同程度的抗氧化活性,化合物1、2、4、6具有显著的抗炎活性,所有化合物细胞毒活性IC50值均远大于200μmol/L。结论：蒙药悬钩子木中黄酮类成分具有抗氧化、抗炎活性,所有化合物均为首次从该植物中分离得到,其中化合物1、2、6为首次从悬钩子属内分离得到。

蒙药悬钩子木三萜类成分及其生物活性研究

目的:研究悬钩子木的三萜类化学成分及其生物活性。方法:采用ODS中低压制备液相色谱、Sephadex LH-20柱、反相制备高效液相色谱等现代色谱技术进行分离纯化。根据理化性质及核磁共振、高分辨质谱等光谱方法进行结构鉴定。采用MTT法测定单体化合物的细胞毒活性。结果:从悬钩子木的乙酸乙酯提取物分离得到12个三萜类化合物,分别鉴定为:2α,3β,19α-三羟基-24-酮-齐墩果-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、2α,3α,19α-三羟基-24-酮-乌苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、2α,3β,19α-三羟基-24-酮-乌苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、2α,3β,19α-三羟基-24,28-二酸-乌苏-12-烯-28-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、2α,3β,19α,23-四羟基-乌苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、2α,3β,19α,24-四羟基-乌苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、2α,3β,19α-三羟基-乌苏-12-烯-28-酸-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、2α,3β,19α-三羟基-乌苏-12-烯-28-酸(8)、2α,3β,19α-三羟基-24-酮-乌苏-12-烯-28-酸(9)、2β,3β,19α-三羟基-乌苏-12-烯-28-酸(10)、2-氧代-坡模酸(11)、坡模酸(12)。活性检测表明化合物12在100μmol/L具有较好的细胞毒活性。结论:所有化合物均为首次从该植物中分离得到,其中,化合物1、3、4、7、9为首次从悬钩子属植物中分离得到。化合物12具有较好的细胞毒活性。

库页悬钩子果实中微量金属元素质量分数的测定

选用湿法消解法对库页悬钩子果实进行消解,运用火焰原子吸收光谱法测定样品中Ca、Cd、Cu、Fe、Mg、Zn 6种微量金属元素的质量分数。在最优实验条件下测得各元素质量分数分别为：Ca的质量分数为55.912 0μg/g;Cd的质量分数为0.562 0μg/g;Cu的质量分数为42.746 0μg/g;Fe的质量分数为227.010 0μg/g;Mg的质量分数为75.811 0μg/g;Zn的质量分数为126.889 0μg/g。各元素的检出限为0.024 0～0.853 0μg/m L,相关系数为0.999 1～0.999 8,RSD为0.31%～1.40%,加标回收率为90.7%～103.8%。

不同采收期蒙药库页悬钩子中总皂苷的含量测定

目的研究蒙药库页悬钩子中总皂苷的含量测定方法及最佳采收期。方法选用齐墩果酸为对照品，采用紫外分光光度法，5％香草醛一冰醋酸和高氯酸显色，在547nm波长处测定吸光度，计算不同采收期库页悬钩子中总皂苷含量。结果齐墩果酸进样量在0．01096—0．43840g／L范围内与吸光度呈良好线性关系。回归方程为Y=6．77X-0．0221，R2=0．9992。平均加样回收率为98．59％，RSD为1．54％。不同采收期库页悬钩子中总皂苷含量发生明显变化，总皂苷在6～9月含量逐渐升高，9月含量最高，10月以后逐渐下降。结论该方法简便、快速、重复性好，可用于库页悬钩子总皂苷的含量测定，库页悬钩子适宜9月采集。

库页悬钩子挥发油的化学成分及抗氧化作用

目的对比库页悬钩子茎杆及果实中挥发油的化学成分,并对其抗氧化能力进行评价。方法采用同时蒸馏萃取法(SDE)提取库页悬钩子茎杆和果实中的挥发油,使用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)获得总离子流图,各色谱峰相应的质谱图经过NIST11.L标准谱库检索定性,并采用峰面积归一化法进行定量分析,计算各成分的相对百分含量;利用2,2-二苯基-1-三硝基苯肼(DPPH)法对库页悬钩子挥发油进行抗氧化活性测试。结果 GC-MS结果显示,从库页悬钩子茎杆和果实挥发油中共鉴定出153个化合物,茎杆挥发油中主要成分为氧化芳樟醇(7.25%)、棕榈酸(5.82%)、乙基苯(5.35%)、糠醛(5.33%)、己醛(4.07%)等;果实挥发油中主要成分为糠醛(16.53%)、氧化芳樟醇(3.80%)、芳樟醇(3.03%)、亚油酸(2.96%)、红没药醇(2.77%)等;当DPPH浓度为50μmol·L-1时,库页悬钩子茎杆和果实挥发油的IC50值分别为0.06 mg·mL-1和1.50 mg·mL-1。结论库页悬钩子茎杆和果实挥发油中共鉴定出153个化合物,相同成分有34种,茎杆和果实挥发油的化学成分及含量差异较大;茎杆挥发油的抗氧化作用强于果实的抗氧化作用,茎杆挥发油具有较强的抗氧化活性。

三种猕猴桃属植物形态特征补充

通过对四川攀西地区猕猴桃属植物资源的大量观察和记录,作者认为其中的显脉猕猴桃(Actinidia venosaRehd.)、昭通猕猴桃(Actinidia rubus Levl.)和红茎猕猴桃(Actinidia rubricaulis Dunn)的形态特征有必要进一步补充和完善,该特征的补充完善对确定其分类地位具有一定的指导意义。

蒙药材库页悬钩子的HPLC指纹图谱研究

目的:建立蒙药材库页悬钩子的指纹图谱,为蒙药材库页悬钩子的质量控制提供依据。方法:采用HPLC技术,Phenomsil ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.3%磷酸为流动相梯度洗脱,检验波长:290 nm,流速:1.0 ml·min-1,进样量:20μl;测定了7批不同产地、不同采收期库页悬钩子的指纹图谱,得到13个共有峰。结果:建立了各蒙药库页悬钩子药材共有峰的相对保留时间的RSD均小于3%,相对峰面积RSD均小于3%,符合指纹图谱相关要求。结论:建立的HPLC指纹图谱有较好的精密度、重现性和稳定性,可以作为蒙药库页悬钩子质量评价主要依据之一。

哈药库页岛悬钩子不同提取部位对离体大鼠胸主动脉环舒张作用及抗氧化活性的研究

目的研究库页岛悬钩子不同提取部位对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用及抗氧化活性。方法利用血管筛选平台,描记血管张力变化,考察不同提取部位的血管舒张作用。以抗坏血酸(Vc)为阳性对照,评价不同提取部位对DPPH·和·OH的清除能力。结果库页岛悬钩子提取部位中乙酸乙酯及正丁醇在一定的浓度范围对去氧肾上腺素(PE)预收缩的大鼠胸主动脉环具有浓度依赖的舒张作用且为内皮依赖。其不同提取部位均显示了较好的抗氧化活性,乙酸乙酯提取部位最高。结论库页岛悬钩子乙酸乙酯和正丁醇提取部位对离体大鼠胸主动脉环具有一定的舒张作用,不同提取部位抗氧化活性均良好。

库页岛悬钩子化学成分预实验及急性毒性、抗疲劳实验研究

目的研究库页岛悬钩子不同溶剂提取物的化学成分及其急性毒性、抗疲劳作用。方法采用试管法对库页岛悬钩子水提取物和乙醇提取物进行化学成分预实验。急性毒性实验将60只ICR小鼠随机分为6组,分别是空白组(等容积0.5%CMC-Na溶液)、库页岛悬钩子粗提物组(0.49g/mL)、乙酸乙酯提取物组(0.13g/mL)、正丁醇提取物高剂量组(1.00g/mL)、正丁醇提取物低剂量组(0.50g/mL)、水提取物组(1.01g/mL),灌胃体积40mL/kg,每天2次,每次间隔5h,连续观察14d,记录小鼠的急性毒性反应及死亡情况。抗疲劳实验采用70只ICR小鼠,随机分为7组,分别是空白组(等容积0.5%CMC-Na溶液)、库页岛悬钩子粗提物高剂量组(0.49g/mL)、中剂量组(0.25g/mL)、低剂量组(0.13g/mL)、乙酸乙酯提取物组(0.13g/mL)、正丁醇提取物组(0.13g/mL)和水提取物组(0.13g/mL),灌胃最大体积20mL/kg,连续给药30d,测定小鼠负重游泳时间。结果库页岛悬钩子中含有多糖、苷类、酚类、鞣质、黄酮类、黄酮醇苷类、生物碱类、有机酸类和强心苷类化学成分。急性毒性实验表明除库页岛悬钩子正丁醇提取物组外,其余各组小鼠全部存活,毒性反应差异无统计学意义。抗疲劳实验显示,与空白组相比,各实验组小鼠负重游泳时间均有延长,其中库页岛悬钩子粗提取物中剂量组差异有统计学意义(P<0.01)。结论库页岛悬钩子中含有多糖、苷类、酚类、鞣质、黄酮类、黄酮醇苷类、生物碱类、有机酸类和强心苷类等成分,库页岛悬钩子提取物毒性较低,具有抗疲劳的作用。

大乌泡根总黄酮提取工艺优选

目的:考察大乌泡根总黄酮的提取工艺。方法:选取料液比、乙醇浓度、提取时间、提取温度为考察因素,以总黄酮得率为评价指标,采用正交试验对提取工艺进行优化,并用紫外分光光度法对大乌泡根总黄酮含量进行测定。结果:大乌泡根总黄酮最佳提取工艺参数为料液比为1∶10,乙醇溶液体积分数为60%,提取时间为2 h,提取温度为70℃;该条件下测定大乌泡根总黄酮含量为4.8%。结论:大乌泡根总黄酮含量的测定方法简便,准确可靠,为大乌泡药材质量控制提供基础。

马林果砖红色素的提取及理化性质研究

以马林果为原料,30%乙醇作溶剂提取砖红色素并研究该色素的理化性质.通过实验证明该色素耐热,耐光.在食品工业和医药方面有一定的利用价值.

HPLC-Q-Exactive-MS/MS快速分析蒙药材悬钩子木中的化学成分

目的采用高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive-MS/MS)法快速分析蒙药材悬钩子木化学成分。方法采用CAPCELL PAK MGII C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 mL·min^(-1),进样体积20μL,柱温30℃,热电喷雾(HESI)质谱离子源,在负离子模式下采集数据。结果依据精确质量数和Chem Spider、Pub Chem数据库确定化合物分子式及结构式,通过比较对照品及文献报道的保留时间、一级质谱以及二级碎片离子,结合此类化合物的裂解规律,从悬钩子木中共鉴定出71个化学成分,包括30个有机酸类、22个黄酮类、7个三萜皂苷类、5个香豆素类、1个木质素类、1个没食子鞣质和2个芳香族化合物。结论该方法可快捷、准确地鉴定悬钩子木中复杂化学成分,为悬钩子木的药效物质基础研究提供科学依据。

不同采收期蒙药库页悬钩子中总皂苷和齐墩果酸的含量测定

目的：研究蒙药库页悬钩子中总皂苷和齐墩果酸的含量测定方法及最佳采收期。方法：选用齐墩果酸为对照品，采用分光光度法，5％香草醛-冰醋酸和高氯酸显色，在波长547nm处测定吸光度，计算不同采收期库页悬钩子中总皂苷含量；采用高效液相色谱法对齐墩果酸含量进行测定，Phenomsil C_18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），柱温为室温（25℃），流动相甲醇-0．3％磷酸水溶液（80：20），流速1mL·min-1，检测波长220nm。结果：不同采收期库页悬钩子中总皂苷和齐墩果酸含量发生明显变化。总皂苷在6-9月含量逐渐升高，9月含量最高，10月逐渐下降，齐墩果酸含量从8月开始逐渐升高，9月达最大值，10月下降。结论：该实验方法简便、快速、重复性好，可用于库页悬钩子总皂苷和齐墩果酸的含量测定，库页悬钩子宜于9月采集。

蒙药悬钩子木的rbcL序列分析

目的通过对蒙药悬钩子木DNA进行PCR扩增,测序分析不同产地悬钩子木的rbcL序列,并与悬钩子木混伪品的rbcL序列进行比较。方法采用植物基因组DNA提取试剂盒,从悬钩子木20个样本中提取总DNA,对rbcL序列进行PCR扩增并测序;从GenBank上下载悬钩子木常见混伪品的rbcL序列,鉴定不同产地悬钩子木及其混伪品的rbcL序列。结果悬钩子木的种内最大遗传距离小于混伪品的种间最小遗传距离,NJ系统发育树显示:悬钩子木20个样品聚为一支,能与同属的混伪品红泡刺藤、紫色悬钩子、拟复盆子、直立悬钩子、藏南悬钩子、多腺悬钩子、秀丽莓、无腺白叶莓、粉枝莓进行区分。结论rbcL序列可用于鉴定悬钩子木及其混伪品的条形码序列。

悬钩子木多糖的分离纯化及免疫调节活性研究

目的从悬钩子木中分离纯化多糖,初步分析其结构特征并进行免疫调节活性研究。方法采用热水浸提法提取悬钩子木粗多糖(Rubus sachalinensis polysaccharides,RSP),再经Cellulose DE-52纤维素离子交换柱、Sephadex G-100凝胶柱色谱进行分离纯化;利用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)鉴定纯度并测定相对分子质量;采用气相色谱分析其单糖组成;采用红外光谱和核磁共振波谱对其结构进行初步分析;采用CCK-8法检测其对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;利用ELISA试剂盒测定其对白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放能力的影响。结果从悬钩子木中分离纯化得到RSP1-1和RSP1-22种多糖,相对分子质量分别为13227(多分散指数1.15)和9343(多分散指数1.08);2种多糖均主要含阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其物质的量比分别是RSP1-1(9.5∶7.0∶10.3∶18.6)和RSP1-2(5.7∶11.1∶10.3∶14.2);红外光谱及核磁波共振波谱对其结构分析证明RSP1-1可能主要含有α-1,3-Ara、β-1,4-Gal、β-1,3-Glc、β-1,3-Man片段,RSP1-2可能主要含有β-1,4-Gal、β-1,3-Glc、β-1,3-Man片段。质量浓度在5~200μg/mL时,RSP1-1、RSP1-2和RSP2均可刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖(P<0.05),并且明显促进淋巴细胞分泌IFN-γ和TNF-α(P<0.05),质量浓度为5μg/mL时能促进淋巴细胞分泌IL-2(P<0.05)。结论RSP1-1和RSP1-2均为首次从悬钩子木中分离得到的天然来源的均一多糖。红外光谱及核磁共振波谱进一步表征了其纯度和结构特征。RSP1-1、RSP1-2和RSP2均能不同程度促进脾淋巴细胞的增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α,呈现一定的免疫调节活性。

蒙药材悬钩子木特征图谱研究及6种成分含量测定

目的 建立11批不同产地悬钩子木特征图谱,并测定6种主要成分含量。方法 采用CAPCELL PAK MGII C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,检测波长254 nm;建立不同产地的悬钩子木特征图谱,通过HPLC-Q-Exactive-MS/MS进行共有峰的指认,进行相似度评价,并测定6种主要成分的含量。结果 悬钩子木特征图谱共标定24个共有峰,指认了其中18个峰。S1~S8批次悬钩子木指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均>0.900,其余3批产地较远,相似度差异较大。经方法学考察,6种成分在一定浓度范围内呈良好的线性关系;精密度、稳定性、重复性均符合要求;平均加样回收率为97.72%~98.94%。其中特征性成分鞣花酸含量较大,且产地分布均匀,可作为质量控制指标性成分。结论 本研究建立的悬钩子木HPLC特征图谱、定量测定分析方法和HPLC-Q-Exactive-MS/MS定性鉴定方法简便、准确、可靠,可为悬钩子木的质量控制提供参考。