海胆Runx基因保守序列的克隆与初步分析

Runx(Runt box)是Runt结构域转录因子家族的成员之一。马粪海胆Runx基因第663位和728位碱基发生突变,分别为A→T和C→T。第一个突变为错义突变,使密码子编码的氨基酸由天冬氨酸变为酪氨酸,而第二个突变为同义突变,密码子编码的氨基酸未发生变化。海胆Runx基因保守序列的突变可能会导致其表达产物的变化,进而会影响海胆的生理机能。

海胆Runx基因的研究进展

海胆Runx(Runt box)基因是Runx基因家族的成员之一,在海胆的胚胎发育、细胞的增殖和分化过程中起重要的作用。海胆Runx基因表达的缺失或下调,将会影响其它相关基因的表达,进而影响胚胎的正常发育。综述了海胆Runx基因的研究进展。

结直肠癌细胞系中Runx3及Runx2基因表达分析

目的:检测在5种结直肠癌胞系中Runx3基因启动子区域甲基化状态及Runx2基因和Runx3基因的表达情况,探讨Runx2基因和Runx3基因对结直肠癌形成的影响。方法:采用甲基化特异PCR(MSP)对5种结直肠癌细胞系中Runx3基因启动子区域甲基化状态进行分析,采用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)检测Runx3及Runx2基因的表达情况。结果:MSP结果显示,有4种结直肠癌细胞系Runx3基因启动子区域呈现甲基化异常,甲基化率为80%(4/5);RT-PCR结果表明,仅在结直肠癌细胞系colo320中Runx3 mRNA明显表达,与MSP结果相符;5种结直肠癌细胞系中Runx2基因均有不同程度表达。结论:Runx2基因在结直肠癌细胞系中仍存在活性;Runx3基因启动子区域甲基化可能是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与结直肠癌的发生发展密切相关,可作为结直肠癌早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。

骨肉瘤细胞系中Runx3及Runx2基因表达分析

目的:检测在8种骨肉瘤细胞系中Runx3基因启动子区域甲基化状态和Runx2基因及Runx3基因的表达情况,探讨Runx2基因和Runx3基因对骨肉瘤形成的影响。方法:采用甲基化特异PCR(MSP)对8种骨肉瘤细胞系中Runx3基因启动子区域甲基化状态进行分析,采用逆转录多聚合酶链反应(RT-PCR)检测Runx3及Runx2基因的表达情况。结果:MSP结果显示,Runx3基因启动子区域无明显过甲基化状态发生,RT-PCR结果表明,大多数骨肉瘤细胞系中Runx2基因和Runx3基因均有不同程度表达。结论:在骨肉瘤细胞系中无明显的Runx3基因特异性表达异常,Runx3基因启动子区域未见CpG岛发生广泛甲基化等表观遗传学异常改变,提示Runx3基因与骨肉瘤的发生发展无必要联系。Runx2基因虽然在成骨细胞分化、软骨细胞成熟及骨基质蛋白产生中发挥重要作用,但在骨肉瘤细胞系中均有不同程度的表达。

膀胱癌组织RUNX3基因的甲基化改变

目的:通过检测膀胱癌组织中runt相关转录因子3(human runt-related transcription factor 3,RUNX 3)基因的甲基化状态,探讨RUNX3在膀胱癌发生、发展过程中的作用。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测33例手术切除的膀胱癌组织和其中8例相应癌旁组织标本、3例非肿瘤患者正常膀胱组织中RUNX3基因的甲基化情况。结果:33例膀胱癌组织中发现异常甲基化21例(63.7%),8例相应癌旁组织中发现甲基化1例(12.5%),2者差异有统计学意义(P<0.05)。3例非肿瘤患者正常膀胱组织未发现该基因异常甲基化。结论:膀胱癌组织中RUNX 3基因启动子高度甲基化,表明该基因异常甲基化与膀胱肿瘤发生相关。

大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化的研究

目的:检测大肠癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中Runx3基因表达和启动子区域甲基化状态,探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对结肠癌细胞系中Runx3表达的作用。方法:将手术切除的37例大肠癌组织和对应癌旁组织提取RNA和基因组DNA,采用RT-PCR检测Runx3基因的表达,甲基化特异PCR方法(MSP)检测Runx3基因启动子区域甲基化状态,用5-aza-dC处理结肠癌细胞系后,RT-PCR方法检测Runx3基因的表达。结果:37例大肠癌和对应癌旁组织中Runx3基因表达阳性率分别为100%(37/37),2.7%(1/37)。癌组织中Runx3基因表达明显降低(P<0.01)。MSP检测发现11例(30%)大肠癌标本及1例(3%)癌旁正常组织中Runx3基因呈甲基化状态。癌组织中Runx3基因甲基化明显高于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌细胞系HT29 5-aza-dC处理后Runx3基因表达水平增加。结论:Runx3基因启动子甲基化和Runx3基因表达在大肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著性差异,可能与结肠癌的发生发展有关。

西方蜜蜂Lozenge基因的克隆鉴定及时空表达分析

Lozenge蛋白(Lz蛋白)是昆虫的重要转录因子,在昆虫胚胎发育过程中发挥重要作用。为研究Lozenge在西方蜜蜂Apis mellifera中的作用,本研究克隆了Lozenge基因,并对其进行生物信息学分析,同时基于荧光定量PCR技术检测该基因在西方蜜蜂不同发育时期(卵期、幼虫期、蛹期和成年蜂)和10日龄哺育蜂各组织的表达谱。生物信息学分析结果显示,Lozenge基因的开放阅读框(ORF)为1 554 bp,共编码517个氨基酸,预测分子量为54.63918 kDa,等电点为6.08;结构域预测分析发现Lozenge蛋白含有一个Runt结构域,多物种蛋白序列对比发现该蛋白同源性高。时期表达谱表明,该基因在第1日卵和第2日卵的表达量远高于其他时期,在卵期表达量随时间依次递减,幼虫期表达量极低,蛹期表达量呈先增后减的趋势,而成年蜂中均有表达;组织表达谱显示,该基因在哺育蜂头部、上颚腺中的表达量较高,而在腹部的表达量低。这些结果表明,Lozenge基因可能在西方蜜蜂胚胎期细胞发育过程、哺育蜂蜂王浆合成和分泌过程中发挥重要作用,这些结果为该基因功能的深入研究提供了重要的理论参考。

与毛囊生长发育及羊毛品质相关基因的研究进展

羊绒是山羊的内层毛被,具有重要的经济价值。简要介绍了与毛囊生长发育及羊毛品质相关的基因及其研究进展,包括角蛋白家族基因、BMP及其介导的信号通路、Runx家族基因。

两个新RUNX2基因突变引起家族性锁骨颅骨发育不全

目的探讨RUNX2基因突变在锁骨颅骨发育不全病因研究中的意义及两个中国家族性锁骨颅骨发育不全家系发病的分子机制。方法提取收集到的2个锁骨颅骨发育不全家系中4例患者和4名家系健康成员、102名无关正常对照外周血基因组DNA，应用PCR扩增产物双向直接测序方法检测RUNX2基因第1～7外显子及相邻侧翼区的DNA序列，测序结果与RUNX2基因正常序列对比分析。对发现的突变位点用酶切方法证实。结果测序结果发现一家系中两例父子患者的RUNX2基因第1外显子发生错义突变c．346T〉A（W116R），该错义突变通过Bsr I限制性内切酶对PCR扩增产物行酶切分析得到进一步确认。另一家系中两例患者的RUNX2基因第3外显子发生无义突变c．610A〉T（K204X）。在两个家系中的正常家系成员和无关正常对照RUN2基因DNA序列中没有发现上述突变。结论通过RUNX2基因，检测在中国人群中发现两个RUNX2基因新致病突变，扩展了遗传性锁骨颅骨发育不全的基因突变谱，对阐明该病发病机制及其基因诊断和遗传咨询有重要意义。

肼苯哒嗪对大肠癌Lovo细胞及RUNX-3基因的影响

目的:观察肼苯哒嗪对大肠癌Lovo细胞增殖作用的影响,探讨肼苯哒嗪对大肠癌Lovo细胞中抑癌基因RUNX-3的转录调节作用及其对细胞生长和凋亡的影响。方法:应用不同浓度(0,10,20,40,80,160μmol/L)的肼苯哒嗪,于不同作用时间(24,48,72,96h)处理人大肠癌Lovo细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定肼苯哒嗪作用下Lovo细胞的生存率,倒置显微镜观察细胞的形态学变化;采用RT-PCR法检测肼苯哒嗪对RUNX-3 mRNA表达的影响。结果:①不同药物浓度组在同一作用时间下,细胞生存率差异有统计学意义(P<0.05);同一药物浓度不同作用时间组之间(24-96h)的细胞生存率无统计学意义(P>0.05);②RUNX-3 mRNA在大肠癌Lovo细胞中的表达随浓度的增加而增强。结论:肼苯哒嗪有抑制人大肠癌Lovo细胞生长的作用,抑制作用呈浓度依赖性;可以促进RUNX-3 mRNA的表达,从而促进大肠癌Lovo细胞的凋亡。