伴RUNX1突变的MDS患者临床特征及预后分析

目的探究RUNX1突变在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)患者中的临床特征及预后影响。方法收集2009年1月~2021年2月于上海交通大学医学院附属第六人民医院初诊的661例MDS患者的骨髓标本,采用二代测序检测一系列基因突变,重点回顾性分析RUNX1患者的临床特征、共同突变表达谱及预后意义。结果661例MDS患者中,65例伴有RUNX1突变。与无RUNX1突变患者比较,RUNX1突变患者骨髓原始细胞比例增加(P<0.001),其预后分层在修订国际预后积分系统(Revised International Scoring System,IPSS-R)较高危组和IPSS-M(IPSS-Molecular)高危/极高危组均占比较高(P<0.001)。59例RUNX1突变患者同时存在其他基因突变,突变频率较高的是ASXL1(24.62%)、TET2(24.62%)、EZH2(21.54%)和U2AF1(21.54%)等,主要为表观遗传学基因(63.62%)和剪切子基因(38.46%)。相关性分析发现,RUNX1突变与EZH2、PHF6和U2AF1突变呈正相关(Q<0.05)。RUNX1突变患者总体生存期较短(16个月vs 47个月,P<0.001),急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)转化风险较高(P<0.001),但在RUNX1主克隆和亚克隆突变间患者总体生存差异无统计学意义。结论RUNX1突变在MDS患者中发生率较高,且常伴有表观遗传学基因和剪切子基因突变。RUNX1突变预示着较短的总体生存期和较高的AML转化风险。

微小RNA-15a-5p通过RUNX1增强胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性机制研究

目的探讨微小RNA-15a-5p(miR-15a-5p)影响胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移及胶质瘤细胞对替莫唑胺(TMZ)敏感性的机制。方法选取胶质瘤细胞H4、SHG-44、正常星形胶质细胞HA1800及TMZ耐药H4细胞,将miR-NC、miR-15a-5p mimics质粒分别转染至H4细胞,记为miR-NC组、miR-15a-5p组;将Vector、OE-RUNX1质粒分别转染至miR-15a-5p组细胞,并分别用400μmoL/L TMZ处理,分别记为miR-15a-5p+Vector组、miR-15a-5p+RUNX1组、TMZ+Vector组及TMZ+RUNX1组。miR-NC组、miR-15a-5p组细胞用400μmoL/L TMZ处理,记为TMZ+miR-NC组、TMZ+miR-15a-5p组。未进行任何处理的细胞设为Control组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力。采用Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力。采用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞RUNX1 mRNA及miR-15a-5p表达水平。采用Western blot检测细胞RUNX1蛋白表达水平。采用TargetScan在线网站预测miR-15a-5p与RUNX1的结合位点。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-15a-5p与RUNX1的靶向关系。结果H4、SHG-44细胞的RUNX1 mRNA及其蛋白表达水平高于HA1800细胞,H4、SHG-44细胞miR-15a-5p表达水平低于HA1800细胞,差异有统计学意义(P<0.0001)。与Control组比较,TMZ耐药H4细胞miR-15a-5p表达水平降低,差异有统计学意义(t=18.89,P<0.0001);与Control组比较,TMZ耐药H4细胞RUNX1 mRNA及其蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(t=34.11、18.07,P<0.0001)。上调miR-15a-5p、TMZ均可抑制细胞的增殖、侵袭及迁移,而上调miR-15a-5p联合TMZ可显著抑制细胞的增殖、侵袭及迁移。miR-15a-5p可负性调控RUNX1表达。RUNX1过表达可逆转上调miR-15a-5p、TMZ对胶质瘤细胞增殖、侵袭及迁移的抑制作用。结论miR-15a-5p负性调控RUNX1抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭、迁移,以及提高肿瘤细胞对TMZ的敏感性。

FISH信号类型和染色体核型分析在ETV6/RUNX1阳性B-ALL患儿中的诊疗价值评估

目的探讨FISH信号类型和染色体核型分析对ETV6/RUNX1阳性B系急性淋巴细胞白血病(B-acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)的诊疗价值。方法收集164例ETV6-RUNX1融合阳性B-ALL患者的临床病理资料,对其染色体核型和FISH的结果进行回顾性分析。结果164例患者中FISH检出163例阳性,其中61例为经典阳性信号2F1R1G;102例为非经典信号,其中2F1G和1F1R2G信号类型最多,提示ETV6缺失;164例患者中有8例患儿未做染色体核型分析,31例患儿因无核分裂象未能进行染色体核型分析,可以进行核型分析的125例患儿中,正常核型106例,异常核型19例,且均未检出t(12;21)易位。结论FISH技术检测ETV6/RUNX1融合基因敏感度高,且多表现为包括ETV6缺失在内的非经典信号类型;染色体核型分析有助于发现复杂核型和超倍体,但不利于t(12;21)融合的检出。因此FISH信号类型和染色体核型分析在ETV6/RUNX1阳性B-ALL中具有不可或缺的作用。

RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性急性髓系白血病骨髓形态学特点分析

目的探讨RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性急性髓系白血病(AML)骨髓形态学特点。方法选取2017年1月至2023年1月该院初诊的20例RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性AML病例作为A组,20例融合基因阴性的AML病例为B组,24例PML-RARA融合基因阳性AML病例为C组,对骨髓形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学检查进行回顾性分析,同时结合国内外文献分析类似病例骨髓细胞形态学特点。结果A组骨髓中出现不同程度增多的早幼粒细胞,早幼粒细胞数目与B组相比,差异有统计学意义(P<0.05),与C组相比差异亦有统计学意义(P<0.001)。A组部分早幼粒细胞存在形态异常且A组融合基因的表达量与骨髓早幼粒细胞数目呈正相关(r=0.478,P=0.039)。A组CD56、CD19表达及c-Kit突变情况明显高于B组(P<0.05),A、B两组1个疗程化疗缓解情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组易出现CD56和CD19同时表达,易伴随性染色体的缺失。结论RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性AML在骨髓形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学方面有其独特的特点。骨髓中粒细胞系统易见不同程度的病态造血,变异性大,早幼粒细胞数目的增多及形态异常亦可作为RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性AML骨髓形态学特点之一。

伴RUNX1基因突变骨髓增生异常综合征患者的临床特征及预后分析

目的:探讨伴RUNX1基因突变的骨髓增生异常综合征(MDS)患者的临床特征及生存分析;方法:回顾性分析了2015年10月1日至2022年10月31日就诊于空军军医大学第二附属医院血液内科的177例初诊MDS患者临床资料,采用二代测序技术进行基因突变检测,分析RUNX1基因突变患者的临床特征并进行预后分析。结果:共有30例(16.95%)检测出RUNX1基因突变,突变位点均位于21号染色体上,突变类型包括错义突变15例(50.0%),移码缺失突变9例(30.0%),剪接位点突变4例(13.3%),插入突变1例(3.3%),无义突变1例(3.3%)。伴有RUNX1基因突变的患者诊断时中位年龄68.5(62.25-78.50)岁。伴有RUNX1基因突变与非突变患者在年龄、性别、初诊时外周血白细胞计数、血红蛋白水平、骨髓及外周血原始细胞比例、IPSS-R细胞遗传学,IPSS-R分期等方面均无统计学差异,但在血小板计数及是否伴有复杂染色体核型上有统计学差异,伴有RUNX1基因突变患者的血小板计数更低(P=0.018),初诊时不易出现复杂核型(P=0.01)。Cox风险比例模型分析结果显示,保持其他协变量不变时,血小板计数越高,生存情况愈好(HR=0.995,95%CI:0.990-0.999,P=0.036);IPSS-M预后分层中,保持其他协变量不变时,中高危组、低危组与高危组相比骨髓增生异常综合征进展或死亡的风险显著降低(HR=0.149,95%CI:0.031-0.721,P=0.018;HR=0.026,95%CI:0.003-0.234,P=0.001)。生存分析结果显示,伴RUNX1基因突变的MDS患者总生存时间差于未突变的患者(P<0.001);在WHO早期组中伴有RUNX1突变患者的中位OS差于非突变患者;IPSS-M危险分层低危组RUNX1基因突变患者的中位OS和中位LFS均差于非突变患者。结论:RUNX1基因突变是MDS患者预后不良因素,尤其IPSS-M预后分层低危、中高危组及WHO分类早期患者。

RUNX1基因突变对成人急性髓细胞白血病的预后有不良影响

目的了解Runt相关的转录因子1(RUNX1)在急性髓系白血病(AML)中的突变率及分布情况;探索RUNX1基因突变与临床特征的相关性及其对患者预后的影响。方法收集158例初发AML患者的骨髓标本,提取骨髓基因组DNA,采用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增目的基因片段,应用基因测序分析RUNX1基因突变情况。同时检测ASXL1、DNMT3A、TET2、FLT3、CEBPA、NPM1、IDH2、NRAS及c-KIT突变情况,分析其突变与RUNX1突变的关系。用Kaplan-Meier方法进行生存分析,并行Log-rank检验比较生存时间差异。结果158例初发急性髓系白血病患者中,共发现RUNX1突变19例,突变率为12.0%,其中A166G 9例,A142T 6例,A162L 4例。RUNX1基因突变组与野生型组的年龄差异有统计学意义(P<0.01),突变组患者年龄偏大,在M4和M5型中的发生率较高,较野生型组更易表达CD36、CD7。RUNX1突变发生于正常核型或预后中等风险核型的患者中,但差异均无统计学意义(P>0.05)。突变组的完全缓解率和生存率均低于野生型组(P<0.05),而两组在性别、初诊时白细胞计数、血红蛋白、血小板计数、骨髓原始细胞比例以及乳酸脱氢酶水平的差异无统计学意义(P>0.05)。结论RUNX1基因突变对AML患者的预后具有不良影响。

SDF-1/RUNX1融合蛋白介导的间充质干细胞对造血干细胞增殖和趋化作用的研究

目的研究基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/RUNX1融合蛋白介导的间充质干细胞(MSCs)对造血干细胞(HSCs)增殖和趋化能力的作用。方法分离培养人脐带源性MSCs和人脐血源性CD34+干细胞。重组腺病毒pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP感染MSCs,免疫荧光显微镜下观察感染效率,ELISA方法检测上清液中SDF-1和RUNX1的表达。流式细胞仪检测感染了重组腺病毒的MSCs对CD34+干细胞的扩增倍数,Transwell试验测定CD34+干细胞的迁移指数。结果重组腺病毒感染人脐带源性MSCs后,第3天的转染效率和SDF-1/RUNX1的表达最高,第7天也有较高表达,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。感染重组腺病毒的MSCs和CD34+干细胞共培养第3、7、14天,B1、C1组较A1组CD34+干细胞显著扩增(P<0.05)。培养第7、14天,B1组中CD34+干细胞的扩增倍数显著高于C1组(P<0.05)。Transwell试验中,B2、C2组的迁移指数明显高于A2组(P<0.05),并且C2组的迁移指数明显高于B2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SDF-1/RUNX1融合蛋白介导的MSCs可促进CD34+干细胞的增殖和归巢。

Runx1基因mRNA表达与非小细胞肺癌发生及淋巴转移的相关性研究

目的:探讨Runx1基因mRNA表达与人非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展的关系。方法:取37例NSCLC标本,1O例肺良性病变旁正常肺组织,应用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测NSCLC中Runx1的mRNA表达水平,进行统计分析。结果:肺癌肿瘤组织中Runx1基因表达水平显著低于肺良性病变旁正常肺组织(P<0.01),肺癌组织中Runx1基因表达水平降低与淋巴结转移相关(P<0.05),与肺癌组织学类型、细胞分化程度以及患者的年龄、性别无关(P>0.05)。结论:与良性病变旁正常肺组织相比,Runx1基因的mRNA水平在肿瘤组织中表达下降,并且与淋巴结转移相关,提示其可能参与肺癌的发生发展过程。

SDF-1/RUNX1融合蛋白腺病毒载体的构建及滴度测定

目的构建SDF-1/RUNX1融合蛋白腺病毒表达载体,并测定其滴度,为研究SDF-1/RUNX1融合蛋白介导的间充质干细胞对造血干细胞定向募集的作用打下基础。方法全基因合成SDF-1-(GlySer)3-RUNX1片段,并在其两端添加限制性酶切位点XhoI及EcoRI,经测序验证基因序列是否正确。采用分子克隆技术构建pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP腺病毒载体,转染入293A细胞中进行包装,采用免疫法测定腺病毒滴度。结果全基因合成SDF-1-(GlySer)3-RUNX1片段经测序验证基因序列正确,长约3 000bp。将其连接至目的载体pIRES2-EGFP,构建出含有SDF-1-(GlySer)3-RUNX1基因序列的GFP共表达质粒编号为B。以B质粒为模板,扩增出带attB1和attB2位点的SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-EGFP片段,长约4 300bp。采用BP重组系统将上述目的片段重组到载体pDONR221,构建出BP重组质粒C。再采用LR重组系统将目的序列重组到腺病毒载体pAD/CMV/v5-DEST上,构建出pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP腺病毒载体。经293细胞包装后,采用免疫法测定腺病毒滴度为1.03×1011 ifu/mL。结论成功构建出SDF-11/RUNX1融合蛋白腺病毒表达载体,且腺病毒滴度较高,有利于后续试验。

合并t(8;21)/RUNX1-RUNX1T1^+初治AML患儿预后影响因素分析

目的:探讨合并t(8;21)/RUNX1-RUNX1T1^+初治急性髓系白血病(AML)患儿预后影响因素。方法:回顾性分析本院2009年1月-2017年1月收治合并t(8;21)/RUNX1-RUNX1T1^+初治AML患儿41例临床资料,记录基线临床特征、累积复发、无事件生存及总生存情况,并通过χ^2检验和Cox回归模型评价预后影响因素。结果:41例患儿行诱导方案化疗后首个疗程和第2个疗程完全缓解率分别为82.93%(34/41)和97.56%(40/41);中位无事件生存时间和总生存时间分别为30和31个月。首个疗程达完全缓解患儿无事件生存率和总生存率显著高于未达完全缓解患儿(P<0.05);男性患儿无事件生存率显著高于女性患儿(P<0.05);发病年龄<10岁患儿总生存率显著高于≥10岁患儿(P<0.05)。第2次诱导缓解后RUNX1-RUNX1T1基因表达水平是患儿累积复发率、无事件生存率及总生存率影响因素(P<0.05);Cox回归模型多因素分析显示,第2次诱导缓解后RUNX1-RUNX1T1基因表达下降<3 log是影响患儿无事件生存率和总生存率独立危险因素(P<0.05);同时RUNX1-RUNX1T1基因表达下降3 log水平后升高>1 log水平患儿累积复发率显著高于≤1 log水平患儿(P<0.05)。结论:合并t(8;21)/RUNX1-RUNX1T1^+初治AML患儿行规范化疗后临床预后良好,RUNX1-RUNX1T1基因表达水平与AML患儿复发及远期生存密切相关。

LncRNA RUNX1-IT1对恶性多形性腺瘤miR-195/CyclinD1的调控作用探讨

目的 :探讨恶性多形性腺瘤(malignant pleomorphic adenoma, MPA)细胞中长链非编码RNA(long non-coding RNA, LncRNA)RUNX1-IT1对微小RNA-195(microRNA-195, miR-195)/细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的调控作用。方法:收集手术切除的MPA组织及癌旁组织,检测LncRNA RUNX1-IT1、miR-195、CyclinD1 mRNA的表达水平,分析三者与MPA临床病理的关系。培养MPA细胞系SM-AP1,转染阴性对照(NC)siRNA、LncRNA RUNX1-IT1 siRNA、miRNC、miR-195抑制物,检测细胞增殖水平A490及miR-195、CyclinD1的表达水平,分析LncRNA RUNX1-IT1靶向miR-195、miR-195靶向CyclinD1的关系。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果 :MPA中LncRNA RUNX1-IT1、CyclinD1的表达水平显著高于癌旁组织,miR-195的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。LncRNA RUNX1-IT1与miR-195呈负相关、与CyclinD1呈正相关,miR-195与CyclinD1呈负相关。肿瘤直径≥3 cm、复发、远处转移的MPA癌组织中,LncRNA RUNX1-IT1、CyclinD1表达更高(P<0.05),miR-195表达更低(P<0.05)。敲低LncRNA RUNX1-IT1后,SM-AP1细胞的A490水平、CyclinD1表达水平降低,miR-195表达水平增加(P<0.05)。LncRNA RUNX1-IT1通过直接靶向作用于SM-AP1细胞中的miR-195,miR-195通过直接靶向作用于SM-AP1细胞中的CyclinD1。抑制miR-195后,敲低LncRNA RUNX1-IT1降低A490水平及CyclinD1表达水平的作用减弱(P<0.05)。结论:LncRNA RUNX1-IT1可能通过调控miR-195/CyclinD1表达,参与MPA的发生、发展。

ETV6/RUNX1阳性儿童急性B系淋巴细胞白血病临床预后研究

目的 探讨和验证ETV6/RUNX1融合基因在中国汉族B系急性淋巴细胞白血病（B-ALL）患儿中的阳性率及其对疾病预后的影响.方法 回顾性分析2007 年1 月1 日至2014 年12 月31 日确诊并序贯治疗的B-ALL患儿经FISH技术检测的ETV6/RUNX1融合基因结果及其临床资料.结果 共有723例B-ALL患儿,其中ETV6/RUNX1阳性B-ALL患儿151例,阳性率20.89%;在723 例B-ALL患儿中91 例患儿复发,其中ETV6/RUNX1阳性患儿复发10 例,占复发患儿的10.99%.同时,在ETV6/RUNX1阳性患儿中,除1例在诊断后65 d复发,其余9例的复发时间均超过300 d,复发时间中位数为1 155 d（P25 - P75= 395.3 - 1 301.5）;ETV6/RUNX1阴性患儿复发时间为484 d（P25 - P75= 259.0 - 1 017.5）,两组复发时间差异无统计学意义（P = 0.158）.对复发时间的分布区域分析发现,ETV6/RUNX1阳性患儿的复发期主要集中于临床化疗结束后,而阴性患儿的复发期主要集中于维持治疗期,两者的复发时间段分布差异有统计学意义（P 〈 0.001）.结论 ETV6/RUNX1在中国汉族儿童B-ALL中也是预后良好的标志之一.

小鼠骨髓间充质干细胞中RUNX1对WNT5A基因转录活性的调控

本研究旨在探讨小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)中转录因子RUNX1对WNT5A转录活性的调控,探索骨髓造血微环境对造血干细胞调控的机制。体外分离、培养、鉴定小鼠骨髓MSC;利用RT-PCR方法检测小鼠骨髓MSC中RUNX1的表达;利用染色质免疫共沉淀研究RUNX1与WNT5A启动子之间的直接相互作用;利用逆转录病毒表达系统将RUNX1导入小鼠间充质干细胞中,用RT-PCR的方法检测基因的表达,研究RUNX1对WNT5A的转录调节作用。结果发现:体外分离培养得到的MSC经脂肪、成骨、软骨诱导后,分别用油红O、von Kossa、甲苯胺蓝染色呈阳性。RUNX1表达于小鼠骨髓来源MSC中,RUNX1能与WNT5A启动子直接结合,并对WNT5A具有转录激活作用。结论:小鼠骨髓MSC中表达RUNX1,WNT5A是RUNX1的一个下游靶基因,其转录活性受RUNX1调控。

伴RUNX1基因突变急性髓系白血病患者临床特征的分析

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者中RUNX1基因及其伴随基因突变的发生率,并分析其临床特征及预后。方法:采用基因组DNA-PCR方法扩增RUNX1基因外显子,应用基因测序分析其基因突变,同时检测NPM1、DNMT3A、FLT3-ITD、IDH1/2、K/N-RAS、CEPBA、TET2、WT1伴随突变的情况,随访患者并判定疗效和预后。结果:171例AML患者中,17例检测存在RUNX1基因突变,突变率为9.9%。RUNX1基因突变类型为错义突变9例,框移突变4例,无义突变4例,突变组患者初诊时外周血白细胞数[3(1-101)×10^(9)/L]明显少于未突变组[26(1-298)×10^(9)/L](P=0.002),而突变组的血小板数为79(22-166)×10^(9)/L,明显高于未突变组[50(8-351)×10^(9)/L](P=0.010),突变组患者骨髓原始细胞比例37(0-72)%低于未突变组的53(0-98)%(P=0.020)。M0型患者RUNX1突变率55.6%,M4型患者13.6%,显著高于其他FAB亚型(P=0.003)。两组的年龄、性别、血红蛋白浓度、外周血单核细胞绝对值无明显统计学差异(P>0.05)。细胞遗传学预后中、高危组患者突变率分别为88.1%和89.7%,显著高于低危组,差异有显著统计学意义(P=0.018)。RUNX1与具体核型异常包括Trisomy 8、Del(7q)、t(8;21)、Inv(16)均无显著相关(P>0.05)。RUNX1基因突变与IDH1/2、N/K-RAS基因突变有显著相关性(P<0.01);RUNX1突变组化疗完全缓解率为37.5%,明显低于未突变组的79.4%(P=0.001);RUNX1基因突变组总生存率低于未突变组(P<0.05)。结论:伴RUNX1基因突变的AML患者具有独特的临床及生物学特点,RUNX1基因突变可以作为AML患者预后不良的分子学标志。

免疫性血小板减少症转化为RUNX1基因阴性的儿童急性巨核细胞白血病临床分析

目的分析免疫性血小板减少症转化为RUNX1基因阴性的儿童急性巨核细胞白血病患者资料,复习此类罕见病的文献资料,探讨该病的临床特征。方法选择安徽省儿童医院血液科2018年1~12月收治的2例急性巨核细胞白血病患儿为研究对象,回顾性分析患儿的临床资料及实验室检查结果。结果2例患儿既往经骨髓细胞学等检查诊断为免疫性血小板减少症(ITP),曾对激素、丙球显效或部分显效,其后因出血症状就诊,经骨髓MICM分型等检查,确诊为RUNX1基因阴性的急性巨核细胞白血病。结论反复血小板减少幼儿患者,应密切随访骨髓细胞学检查,并及时进行相关基因检测。

微量残留病监测在ETV6/RUNX1阴性和阳性急性B淋巴细胞白血病患儿预后中的意义

目的探讨微量残留病(MRD)监测在ETV6/RUNX1融合基因阴性、阳性急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿预后中的意义。方法收集2018年1月—2021年6月郑州大学附属儿童医院234例B-ALL患儿临床资料,其中ETV6/RUNX1融合基因阳性78例(阳性组)、阴性156例(阴性组)。比较阳性组和阴性组无复发生存期(RFS)差异;统计2个组诱导化疗第15天、第33天和巩固治疗开始前(第12周)MRD检测结果,分别记为MRD1、MRD2、MRD3;分析2个组组内MRD1、MRD2、MRD3在B-ALL患儿预后中的意义。结果与阴性组比较,阳性组RFS延长(P=0.029)。在阴性组内,MRD1阴性和阳性患儿RFS差异无统计学意义(P>0.05);MRD2、MRD3阴性患儿RFS均长于MRD2、MRD3阳性患儿(P<0.05);MRD3阳性是B-ALL患儿预后的独立影响因素(比值比值为=3.678,95%可信区间为1.254~10.785,P=0.018)。在阳性组内。MRD1、MRD2阴性和阳性患儿RFS差异无统计学意义(P>0.05);MRD3阴性患儿RFS长于MRD3阳性患儿;多因素分析结果显示,MRD3阳性并非患儿RFS的独立影响因素(P>0.05)。结论监测MRD对ETV6/RUNX1融合基因阴性B-ALL患儿预后的意义更大,建议持续监测;对于ETV6/RUNX1融合基因阳性患儿,MRD监测意义较弱,临床可根据实际情况决定是否采用。

RUNX1-RUNX1T1阳性儿童急性髓细胞白血病融合转录本动态监测的临床意义

目的探讨RUNX1-RUNX1T1+急性髓细胞白血病(AML)RUNX1-RUNX1T1转录本(融合转录本)的动态变化及其对预后的指导作用。方法回顾性队列研究,纳入2006年10月1日至2015年3月31日在首都医科大学附属北京儿童医院(我院)采用BCH-AML 05方案治疗的全部RUNX1-RUNX1T1+AML患儿,根据初诊(time point 0,TP0)、诱导Ⅰ后(TP1)、诱导Ⅱ后(TP2)、巩固Ⅰ后(TP3)、巩固Ⅱ后(TP4)和巩固Ⅲ后(TP5)融合转录本的检测情况,相应地分为高表达组和低表达组,分组界值分别为每104GUS中融合转录本拷贝数10~4、10~3、10~2、10、1和0,随访至2017年12月31日。采用χ2检验比较初诊高表达组和低表达组临床和生物学特征的差异;Kaplan-Meier法分析患儿5年总生存(OS)和无复发生存(RFS),通过Log-rank检验比较组间差异,以Cox比例风险回归模型分析影响患儿5年OS和RFS的独立预后因素。结果符合本文纳入标准的患儿52例,男27例,中位年龄8(2~14)岁;2例TP1时失访,21例在随访中死亡,其余29例中位随访时间62.2(34.0~134.3)个月。(1)初诊高表达组(17/50)和低表达组(33/50)患儿的年龄、性别、WBC、Hb、PLT计数和骨髓幼稚细胞数、除CD15(P=0.004)外的免疫学表型、TP1~TP5的MRD差异均无统计学意义。(2)单因素分析表明,TP1和TP5融合转录本水平与患儿的5年OS和RFS相关,性别、初诊PLT与5年OS相关,初诊WBC与5年RFS相关。多因素分析显示,TP1时融合转录本水平>103拷贝/104GUS是5年OS的独立不良因素(HR=0.095,95%:CI:0.011~0.860,P=0.036)。结论 RUNX1-RUNX1T1+AML患儿第1次诱导治疗结束后融合转录本水平是患儿长期预后的独立影响因素。

MDS铁过载小鼠模型建立及鉴定

目的:建立一种MDS铁过载小鼠模型,研究铁过载对MDS的影响。方法:通过逆转录病毒,将外源突变基因RUNX1-S291fs插入小鼠骨髓单个核细胞基因组,然后移植给经60Coγ射线照射的C57BL/6小鼠。8周后,腹腔注射铁剂,建立MDS铁过载小鼠模型。移植24周后,取小鼠外周血、骨髓、股骨、肝脏和脾脏进行鉴定:对外周血和骨髓细胞行瑞氏染色观察形态特征;对股骨、肝脏和脾脏组织行HE染色检测病理变化;对肝脏、脾脏和骨髓行普鲁士蓝染色观察铁沉积情况;应用流式细胞术检测小鼠骨髓细胞抗原表达情况;对骨髓单个核细胞和脾组织蛋白行免疫印迹实验,确认RUNX1-S291fs基因转入并表达蛋白。移植后对小鼠定期监测血常规指标和移植细胞嵌合率。结果:相比空白质粒对照小鼠,RUNX1-S291fs突变小鼠外周血白细胞计数、血红蛋白水平和血小板计数均降低;外周血和骨髓细胞显示病态造血;肝脏和脾脏明显增大;在股骨、肝脏和脾脏可见组织结构异常;骨髓细胞表面抗原表达异常;骨髓细胞和脾组织有RUNX1-S291fs蛋白表达。相比生理盐水对照小鼠,铁剂注射小鼠普鲁士蓝染色可见骨髓、肝脏和脾脏组织有明显铁沉积。结论:注射铁剂的RUNX1-S291fs突变组小鼠合并有MDS和铁过载的病理特征,成功构建了MDS铁过载小鼠模型,为研究铁过载对MDS的影响奠定了基础。

阿伐替尼桥接异基因造血干细胞移植治疗伴有KIT突变的复发/难治性RUNX1-RUNX1T1阳性急性髓系白血病7例疗效分析

目的探讨阿伐替尼桥接异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗伴KIT突变复发/难治性RUNX1-RUNX1T1阳性急性髓系白血病(AML)的疗效。方法对2019年6月至2023年6月期间在苏州大学附属第一医院接受阿伐替尼桥接allo-HSCT治疗的7例伴RUNX1-RUNX1T1融合基因与KIT突变的复发/难治性AML患者进行回顾性研究。结果7例AML患者中男1例,女6例,中位年龄37(18~56)岁。7例患者均伴有KIT突变(D816V突变阳性5例,D816Y突变阳性2例)。难治患者2例,复发患者5例(均为骨髓复发)。所有患者移植前至少完成1个疗程阿伐替尼治疗。4例患者在阿伐替尼治疗后获得完全缓解(CR),6例患者KIT基因突变转阴,1例患者KIT基因突变负荷较前下降。全相合无关供者移植3例,单倍体移植4例。所有患者均接受改良Bu/Cy预处理方案。移植后所有患者均顺利植入,复查骨髓象均达CR且微小残留病(MRD)转阴,5例患者融合基因转阴。移植后2例患者死于感染。结论阿伐替尼桥接allo-HSCT对于伴有KIT-D816突变的RUNX1-RUNX1T1阳性AML患者可能是一种有效、安全的治疗新策略。

RUNX1-RUNX1T1融合基因定量监测在儿童急性髓系白血病中的应用价值

目的研究RUNX1-RUNX1T1融合基因定量监测在伴t（8；21）／RUNX1-RUNX1T1阳性的儿童急性髓系白血病（AML）中的预后评估价值。方法2005年8月至2016年1月北京大学人民医院收治的伴t（8；21）／RUNX1-RUNX1T1阳性AML患儿共81例，所有患儿于初诊时、治疗结束后在北京大学人民医院应用实时荧光定量PCR（qPCR）方法检测RUNX1-RUNX1T1基因拷贝数，采用Kaplan—Meier曲线评估患儿的累积复发率（CIR）、无事件生存（EFS）率和总体生存（OS）率，COX回归模型评估预后因素。结果以初诊时RUNX1-RUNX1T1基因定量水平为基线，将治疗后基因定量水平是否比诊断时下降3个对数级（3log）为界，第2次诱导缓解治疗结束后，下降≥3log者（51例）与〈3log者（28例）相比：5年EFS分别为82．4％及57．6％（χ2=7．454，P〈0．01），5年OS率分别为93．6％及59．3％（χ2=9．703，P〈0．01），差异均有统计学意义。COX多因素回归分析显示，第2次诱导缓解结束后RUNX1-RUNX1T1基因下降是否〉3log水平是影响患儿EFS[风险比（HR）=4．223，95％置信区间（CI）：1．507-11．836，P〈0．01]与OS率的独立危险因素（HR=5．002，95％CI：1．282～19．516，P〈0．05）。定期监测RUNX1-RUNX1T1基因，81例患儿中有63例患儿监测6次以上基因定量，将基因定量下降3log后又上升了1log水平的患儿分为A组（10例），其余患儿分为B组（53例），A组和B组CIR比较差异有统计学意义（46．7％比4．7％，P〈0．01）。结论通过qPCR方法检测RUNX1-RUNX1T1基因拷贝数，可以判断伴t（8；21）／RUNX1-RUNX1T1阳性AML患儿的治疗效果，预测患儿的复发及评估长期预后，具有极大的临床应用价值。