CRIF1基因启动子克隆及活性分析

目的研究急性髓性白血病基因1(AML-1/RUNX1)调控CR6相互作用因子(CRIF1)基因启动子的主要活性区域。方法采用PCR技术克隆CRIF1基因启动子并测序,构建截短突变体,以双荧光素酶报告系统检测AML-1/RUNX1调节CRIF1基因启动子的主要活性区域。结果克隆出CRIF1基因启动子-2 505—+9共计2 514 bp的活性区域,并构建了截短突变体CRIF1-1 800、1 500、1 000、600及300 bp;较之CRIF1基因启动子全长序列转录活性,CRIF1-300 bp突变启动子活力明显下降,CRIF1-600 bp内启动子活力与其相当,CRIF1-1 500 bp区启动子活性是它的2.8倍。结论本研究提示CRIF1基因启动子-1 500—-2 514 bp间可能是AML-1/RUNX1对其进行转录负性调控的主要活性区域。

一种进行基因表达研究的有效技术——小鼠全胚胎RNA原位杂交

目的 建立小鼠整体胚胎水平研究基因表达的方法。 方法 采用地高辛配基标记的造血相关基因 Runx1和神经发生相关基因 Runx3RNA探针 ,对 10 .5～ 14天小鼠全胚胎进行 RNA原位杂交 ,通过检测胚胎组织中 m RNA的存在状况来观察基因的表达。结果 在小鼠胚胎观察到 Runx1和 Runx3基因在不同组织中的清晰的杂交信号 ;不同探针和不同大小的胚胎需要不同的最适蛋白酶 K处理条件。 结论 小鼠全胚胎 RNA原位杂交技术是一种有效的研究基因表达的方法 ,可以从整体水平反映基因表达的全貌 ,在功能基因组学时代将具有很大的应用潜力 ,为基因表达研究提供了一种可与 L ac Z染色和免疫组织化学媲美的选择。蛋白酶 K处理条件是否适当是小鼠全胚胎 RNA原位杂交成功的关键因素。