云南森林脑炎病毒的动物敏感性研究

本文对分离自云南的森林脑炎病毒进行了动物敏感性研究,实验证明云南森林脑炎病毒对小白鼠有较强的致病性,三日龄乳鼠无论经脑内、腹腔、皮下接种均能致病、死亡,但毒力较国内森林脑炎病毒标准株低;三周龄小白鼠经鼻腔接种亦能发病致死。对乳大白鼠、幼年豚鼠和金黄色地鼠能引起发病或死亡,病毒抗原定位主要在脑组织。病理检查表明感染的各种动物脑组织均有明显病变。此外,对鸡胚敏感,能引起BHK_(21)、Vero、Vero-E_6等传代细胞及人胚肾、乳猪肾原代细胞的CPE_0结果表明了云南森林脑炎病毒对细胞、动物的致病性与国内森林脑炎病毒标准株相似,仅毒力稍低。

荧光恒温扩增技术检测单纯疱疹病毒Ⅰ型RNA方法的建立

目的利用荧光恒温扩增技术(SAT)建立一种快速、可靠的单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)检测方法。方法根据Genbank上获取HSV-1开放读码框Us5区域的RNA序列设计扩增引物及优化探针,使用M-MLV反转录酶及T7 RNA多聚酶对HSV-1 RNA进行核酸扩增,同时利用荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪进行实时荧光信号收集和检测。收集儿童病毒性脑炎或疑似患儿样本212份(脑脊液样本150份、血浆样本62份),以巢式PCR+测序为参比方法,对SAT结果进行Kappa一致性分析。结果 SAT检测HSV-1 RNA的灵敏度为100拷贝/μL,采用SAT检测212份临床样本,共检测出18例HSV-1阳性样本,巢式PCR检出16例阳性,经测序证实其中12例为阳性结果。SAT与巢式PCR+测序方法的Kappa值为0.785,其敏感性为100.0%、特异性为97.0%。结论建立的SAT检测脑脊液和血浆中HSV-1 RNA的方法具有敏感性高、特异性强、准确、快速、可靠的优点,适用于临床对单纯疱疹病毒性脑炎早期的快速诊断。