结核分枝杆菌Rv0073基因在大肠杆菌中的表达及纯化

目的 构建结核分枝杆菌（MTB） Rv0073基因原核表达载体并进行表达和纯化.方法 以MTB H37Rv基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因片段,构建原核表达载体pET26b-Rv0073,经测序确定无误后转化至大肠杆菌（E.coli）感受态细胞BL21中.用聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）方法检测重组蛋白表达,检测异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导不同时间、不同温度条件下重组蛋白表达量.采用His镍磁珠进行外源蛋白小量纯化.结果 成功构建重组表达质粒,重组蛋白经IPTG诱导后,2h开始明显表达且表达量无时间依赖性,在不同温度诱导下,重组蛋白的表达量随温度的增高而减少.重组蛋白以包涵体形式存在,经His镍磁珠纯化后获得重组蛋白.结论 成功构建并表达Rv0073蛋白,为后续Rv0073的大量纯化及其功能研究奠定了基础.