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结核分枝杆菌毒力基因片段Rv0450c分子克隆及原核表达
1
作者
吴俐健
李嵚
+4 位作者
孙美秋
邹傅
贾本智
苍保宏
王笑歌
《中国公共卫生》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期415-417,共3页
目的通过分子克隆的方法对结核分枝杆菌H37Rv中编码MMPL4蛋白的Rv0450c基因以及编码该蛋白一个161氨基酸的膜内区域(I161)和一个371氨基酸的膜外区域(O371)的基因片段在大肠杆菌中的表达和纯化方法进行研究,为进一步探讨MMPL4与结核分...
目的通过分子克隆的方法对结核分枝杆菌H37Rv中编码MMPL4蛋白的Rv0450c基因以及编码该蛋白一个161氨基酸的膜内区域(I161)和一个371氨基酸的膜外区域(O371)的基因片段在大肠杆菌中的表达和纯化方法进行研究,为进一步探讨MMPL4与结核分枝杆菌耐药相关功能性研究以及抗体制备提供依据。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增Rv0450c基因片段,并克隆到原核表达载体pET28b质粒中,获得的重组质粒转化原核表达宿主大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS中,经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳方法检测重组蛋白的表达,并进行纯化。结果从结核分枝杆菌基因组H37RvDNA中成功扩增出Rv0450c基因及编码I161/O371的DNA片段,并构建原核表达质粒pET28b-Rv0450c,pET28b-I161和pET28b-O371重组MMPL4蛋白和I161在大肠杆菌中表达不明显,而膜外区域O371以包涵体形式高表达。结论 Rv0450c基因原核表达质粒可以成功构建并在大肠杆菌内较好表达,为进一步MMPL4功能研究和抗体制备打下良好基础。
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关键词
结核分枝杆菌
多药耐药外排泵系统
rv0450c
表达
原文传递
题名
结核分枝杆菌毒力基因片段Rv0450c分子克隆及原核表达
1
作者
吴俐健
李嵚
孙美秋
邹傅
贾本智
苍保宏
王笑歌
机构
中国医科大学附属第四医院结核科
出处
《中国公共卫生》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期415-417,共3页
基金
辽宁省自然科学基金(20092097)
文摘
目的通过分子克隆的方法对结核分枝杆菌H37Rv中编码MMPL4蛋白的Rv0450c基因以及编码该蛋白一个161氨基酸的膜内区域(I161)和一个371氨基酸的膜外区域(O371)的基因片段在大肠杆菌中的表达和纯化方法进行研究,为进一步探讨MMPL4与结核分枝杆菌耐药相关功能性研究以及抗体制备提供依据。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增Rv0450c基因片段,并克隆到原核表达载体pET28b质粒中,获得的重组质粒转化原核表达宿主大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS中,经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳方法检测重组蛋白的表达,并进行纯化。结果从结核分枝杆菌基因组H37RvDNA中成功扩增出Rv0450c基因及编码I161/O371的DNA片段,并构建原核表达质粒pET28b-Rv0450c,pET28b-I161和pET28b-O371重组MMPL4蛋白和I161在大肠杆菌中表达不明显,而膜外区域O371以包涵体形式高表达。结论 Rv0450c基因原核表达质粒可以成功构建并在大肠杆菌内较好表达,为进一步MMPL4功能研究和抗体制备打下良好基础。
关键词
结核分枝杆菌
多药耐药外排泵系统
rv0450c
表达
Keywords
Mycobacteria tuberculosis
mmpl system
Rv0405c
expression
分类号
R378.911 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌毒力基因片段Rv0450c分子克隆及原核表达
吴俐健
李嵚
孙美秋
邹傅
贾本智
苍保宏
王笑歌
《中国公共卫生》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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