目的拟靶向结核分枝杆菌(M.tb)感染后的分泌期抗原Rv1626,构建其原核表达质粒pPROEX-Rv1626并表达纯化,通过人群和动物实验评价其免疫原性。方法构建重组载体pPROEX-Rv1626,以全血干扰素释放分析技术(WBIA)检测其是否能被山西省长治市M...目的拟靶向结核分枝杆菌(M.tb)感染后的分泌期抗原Rv1626,构建其原核表达质粒pPROEX-Rv1626并表达纯化,通过人群和动物实验评价其免疫原性。方法构建重组载体pPROEX-Rv1626,以全血干扰素释放分析技术(WBIA)检测其是否能被山西省长治市M.tb感染者的T细胞特异性识别;同时免疫小鼠,检测其特异性诱导脾细胞分泌的IFN-γ、TNF-α和IL-2水平及抗体水平。结果 (1)成功构建重组载体pPROEX-Rv1626,并成功诱导表达、纯化和鉴定;(2)rRv1626蛋白诱导M.tb感染者外周血中淋巴细胞产生的IFN-γ水平均显著高于健康者对照者(P<0.001),ATB患者外周血中淋巴细胞分泌IFN-γ水平显著高于LTBI人群(P<0.001);(3)BCG+Rv1626/DMT组产生的特异性相关抗体滴度显著高于Rv1626/DMT组及BCG组(P<0.01);Rv1626/DMT组和BCG+Rv1626/DMT组的IgG2a/IgG1比值显著高于DMT组和BCG组(F=33.69),且前两组IgG2a/IgG1>1,倾向于Th1型细胞免疫应答;(4)不同免疫组小鼠无论是PPD或r Rv1626蛋白刺激,BCG+Rv1626/DMT组均分泌最高水平的IL-2、IFN-γ和TNF-α,其次为BCG组、Rv1626/DMT组,PBS组为最低。同时Rv1626/DMT组显著高于DMT组(P<0.01)。结论 r Rv1626能被M.tb感染者T细胞所识别,免疫小鼠能诱导抗原特异性Th1型细胞免疫应答,可能与其提供的免疫保护力密切相关。展开更多
文摘目的拟靶向结核分枝杆菌(M.tb)感染后的分泌期抗原Rv1626,构建其原核表达质粒pPROEX-Rv1626并表达纯化,通过人群和动物实验评价其免疫原性。方法构建重组载体pPROEX-Rv1626,以全血干扰素释放分析技术(WBIA)检测其是否能被山西省长治市M.tb感染者的T细胞特异性识别;同时免疫小鼠,检测其特异性诱导脾细胞分泌的IFN-γ、TNF-α和IL-2水平及抗体水平。结果 (1)成功构建重组载体pPROEX-Rv1626,并成功诱导表达、纯化和鉴定;(2)rRv1626蛋白诱导M.tb感染者外周血中淋巴细胞产生的IFN-γ水平均显著高于健康者对照者(P<0.001),ATB患者外周血中淋巴细胞分泌IFN-γ水平显著高于LTBI人群(P<0.001);(3)BCG+Rv1626/DMT组产生的特异性相关抗体滴度显著高于Rv1626/DMT组及BCG组(P<0.01);Rv1626/DMT组和BCG+Rv1626/DMT组的IgG2a/IgG1比值显著高于DMT组和BCG组(F=33.69),且前两组IgG2a/IgG1>1,倾向于Th1型细胞免疫应答;(4)不同免疫组小鼠无论是PPD或r Rv1626蛋白刺激,BCG+Rv1626/DMT组均分泌最高水平的IL-2、IFN-γ和TNF-α,其次为BCG组、Rv1626/DMT组,PBS组为最低。同时Rv1626/DMT组显著高于DMT组(P<0.01)。结论 r Rv1626能被M.tb感染者T细胞所识别,免疫小鼠能诱导抗原特异性Th1型细胞免疫应答,可能与其提供的免疫保护力密切相关。
