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结核分枝杆菌RD区基因Rv1988的构建、表达及免疫学功能研究
被引量:
2
1
作者
张延鹏
王晓春
+3 位作者
许礼发
张健
张京燕
毛莉蓉
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020年第9期1015-1020,1027,共7页
目的构建结核分枝杆菌(Mtb)Rv1988基因原核表达载体pET30b-Rv1988,诱导目的蛋白的表达并进行纯化,通过体外试验和动物试验观察rRv1988诱导人淋巴细胞及小鼠的免疫应答类型及水平。方法设计目的基因Rv1988特异性引物,PCR扩增Rv1988基因,...
目的构建结核分枝杆菌(Mtb)Rv1988基因原核表达载体pET30b-Rv1988,诱导目的蛋白的表达并进行纯化,通过体外试验和动物试验观察rRv1988诱导人淋巴细胞及小鼠的免疫应答类型及水平。方法设计目的基因Rv1988特异性引物,PCR扩增Rv1988基因,将克隆片段与质粒pET30b进行连接,构建重组质粒pET30b-Rv1988,以基因工程技术表达并纯化目的蛋白rRv1988。从山西省长治医学院和平医院感染科募集26例符合要求的受试者,采用全血IFN-γ分析试验(WBIA)检测Rv1988抗原诱导Mtb感染者和健康对照者外周血淋巴细胞产生的IFN-γ水平及其差异。其中动物试验设5个组(PBS组、BCG组、DMT组、rRv1988/DMT组及BCG+rRv1988/DMT组),皮下免疫C57BL/6小鼠,9周后处死并检测特异性抗体滴度,脾淋巴细胞培养上清中Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的水平,并进行数据分析。结果成功构建了Rv1988基因重组载体,表达并纯化了重组蛋白rRv1988。rRv1988蛋白刺激Mtb感染者淋巴细胞产生的IFN-γ浓度显著高于健康对照者[如rRv1988刺激值为(1118±70.53)pg/ml和(207.1±31.58)pg/ml,t=10.21,P<0.01]。经BCG初免后以rRv1988蛋白联合佐剂DMT免疫C57BL/6小鼠,诱导产生高水平的特异性IgG抗体及其亚类(F=755.1、326.5和193.1,均P<0.01),IgG2a/IgG1趋向Th1型应答;同时诱导小鼠脾淋巴细胞产生高水平的IFN-γ和TNF-α(F=58.71和131.2,均P<0.05),而IL-2在BCG+rRv1988/DMT组、rRv1988/DMT组和BCG组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论原核表达了rRv1988蛋白,该蛋白能被Mtb感染者的T细胞所识别,并可引发机体产生特异性Th1型细胞免疫应答,表明rRv1988蛋白具有免疫原性,为结核病疫苗的研制奠定了基础。
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关键词
结核分枝杆菌
rv1988
原核表达
免疫应答
原文传递
题名
结核分枝杆菌RD区基因Rv1988的构建、表达及免疫学功能研究
被引量:
2
1
作者
张延鹏
王晓春
许礼发
张健
张京燕
毛莉蓉
机构
安徽理工大学医学院病原生物学教研室
安徽理工大学医学院免疫学教研室
安徽理工大学医学院临床医学系
长治医学院和平医院检验科
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020年第9期1015-1020,1027,共7页
基金
安徽省高校自然科学研究重点项目(No.KJ2016A211)。
文摘
目的构建结核分枝杆菌(Mtb)Rv1988基因原核表达载体pET30b-Rv1988,诱导目的蛋白的表达并进行纯化,通过体外试验和动物试验观察rRv1988诱导人淋巴细胞及小鼠的免疫应答类型及水平。方法设计目的基因Rv1988特异性引物,PCR扩增Rv1988基因,将克隆片段与质粒pET30b进行连接,构建重组质粒pET30b-Rv1988,以基因工程技术表达并纯化目的蛋白rRv1988。从山西省长治医学院和平医院感染科募集26例符合要求的受试者,采用全血IFN-γ分析试验(WBIA)检测Rv1988抗原诱导Mtb感染者和健康对照者外周血淋巴细胞产生的IFN-γ水平及其差异。其中动物试验设5个组(PBS组、BCG组、DMT组、rRv1988/DMT组及BCG+rRv1988/DMT组),皮下免疫C57BL/6小鼠,9周后处死并检测特异性抗体滴度,脾淋巴细胞培养上清中Th1型细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的水平,并进行数据分析。结果成功构建了Rv1988基因重组载体,表达并纯化了重组蛋白rRv1988。rRv1988蛋白刺激Mtb感染者淋巴细胞产生的IFN-γ浓度显著高于健康对照者[如rRv1988刺激值为(1118±70.53)pg/ml和(207.1±31.58)pg/ml,t=10.21,P<0.01]。经BCG初免后以rRv1988蛋白联合佐剂DMT免疫C57BL/6小鼠,诱导产生高水平的特异性IgG抗体及其亚类(F=755.1、326.5和193.1,均P<0.01),IgG2a/IgG1趋向Th1型应答;同时诱导小鼠脾淋巴细胞产生高水平的IFN-γ和TNF-α(F=58.71和131.2,均P<0.05),而IL-2在BCG+rRv1988/DMT组、rRv1988/DMT组和BCG组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论原核表达了rRv1988蛋白,该蛋白能被Mtb感染者的T细胞所识别,并可引发机体产生特异性Th1型细胞免疫应答,表明rRv1988蛋白具有免疫原性,为结核病疫苗的研制奠定了基础。
关键词
结核分枝杆菌
rv1988
原核表达
免疫应答
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
rv1988
prokaryotic expression
immune response
分类号
R378.911 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌RD区基因Rv1988的构建、表达及免疫学功能研究
张延鹏
王晓春
许礼发
张健
张京燕
毛莉蓉
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2020
2
原文传递
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