结核分枝杆菌H37Rv蛋白Rv2364c的表达纯化与生物信息学分析

目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌H37Rv的Rv2364c蛋白,为研发抗结核分枝杆菌的药物提供材料。方法 PCR扩增目的基因Rv2364c。将PCR产物克隆至原核表达载体p ET-28a中,构建重组原核表达质粒p ET-28a-Rv2364c。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。表达产物经镍亲和层析柱纯化,并对该蛋白做生物信息分析。结果双酶切和基因测序结果表明,成功构建了含有Rv2364c基因的重组表达质粒。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白在大肠杆菌中得到了大量表达,经镍亲和层析柱纯化后目的蛋白的纯度达到了90%以上。生物信息学分析表明Rv2364c为稳定酸性蛋白,α-螺旋和无规卷曲为其主要二级结构元件,主要结构域类型有Era结构域和KH结构域两种。结论成功表达和纯化了Rv2364c蛋白,并利用生物信息学方法初步预测其结构域等,为进一步研究Rv2364c在结核病发生发展中的作用奠定了基础。