结核分枝杆菌Rv2623蛋白的表达、纯化及诱导特异性免疫应答研究

目的对结核分枝杆菌潜伏期Rv2623蛋白进行原核蛋白表达、纯化,并对其免疫学特性进行初步研究。方法应用生物信息学方法分析Rv2623蛋白序列,PCR扩增基因,克隆到pET30b载体上,在大肠埃希菌BL21菌株中以IPTG诱导表达重组蛋白。经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,亲和层析法纯化蛋白。将重组Rv2623免疫C57BL/6小鼠,制备免疫小鼠脾细胞,ELISA检测上清液特异性IFN-γ含量,流式细胞术联合胞内因子染色法,分析脾细胞中分泌TNF-α^+、IFN-γ^+的多功能CD4^+T细胞水平。结果成功构建、表达并纯化得到31.7kDa的重组Rv26232蛋白,SDS-PAGE及Western blot分析表明表达产物正确。重组Rv26232蛋白免疫小鼠后,诱导其脾细胞分泌的特异性IFN-γ水平(121.9pg·mL^(-1))高于PBS组(37.8pg·mL^(-1)),同时诱导高水平能分泌TNF-α^+、IFN-γ单阳或双阳的特异性多功能CD4+T细胞(P<0.05)。结论本研究成功表达并纯化结核分枝杆菌潜伏期蛋白Rv2623,明确其具有良好的免疫原性,并能诱导特异性免疫应答,为后续新型疫苗的研发奠定基础。