结核分枝杆菌Rv3194c蛋白的表达、纯化及活性鉴定

【目的】Rv3194c基因编码的是结核分枝杆菌的PDZ信号蛋白,本研究对其是否具有黏附素特性进行了探索。【方法】对Rv3194c进行原核表达,然后Rv3194c蛋白分别与透明质酸、硫酸软骨素、Ι型胶原蛋白在不同温度(37、38、39、40°C)的缓冲液中孵育过夜,然后用Western blot和ELISA分析其上清液中组分含量的变化。【结果】Western blot鉴定结果表明,His-Rv3194c蛋白以可溶形式表达,蛋白质的分子质量大小为35 k Da。Western blot表明,39°C实验组的上清中His-Rv3194c蛋白含量(***P<0.001)显著小于其它实验组(37、38、40°C);ELISA表明,39°C实验组的上清中透明质酸(HA)、硫酸软骨素(CS)、Ι型胶原蛋白(CollagenΙ)的含量(***P<0.001)极显著小于其它实验组(37、38、40°C)。【结论】首次证实了Rv3194c蛋白具有黏附素特性,可成为研发新型抗结核药物的靶点蛋白。

结核分枝杆菌Rv3194c蛋白的亚细胞定位

【目的】Rv3194c基因编码的是结核分枝杆菌的PDZ信号蛋白,本研究探讨该蛋白的亚细胞定位,为其细胞结合蛋白的筛选奠定基础。【方法】从H37Rv基因组中扩增出编码只含有PDZ结构域的tRv3194c (Rv3194c 1–234 aa)的基因片段,在3′端加T2A和EGFP序列,一并插入真核表达载体构建出pcDNA3.1-tRv3194c-T2A-EGFP。将构建好的质粒瞬时转染L929细胞,并共感染重组痘苗病毒vTF7-3,用间接免疫荧光、流式细胞分选以及Western blotting检测融合蛋白的表达以及亚细胞定位。【结果】成功构建出真核表达载体pcDNA3.1-tRv3194c-T2A-EGFP,瞬时转染L929细胞后融合蛋白tRv3194c定位于线粒体膜上,且重组痘苗病毒vTF7-3的感染有助于靶蛋白表达水平的提高。【结论】Rv3194蛋白的PDZ结构域与线粒体外膜相关蛋白结合,为了解该蛋白在细胞内的致病机制提供重要线索。