RYR1基因突变致横纹肌溶解-肌痛综合征1例并文献复习

RYR1相关横纹肌溶解-肌痛综合征(Rhabdomyolysis-myalgia syndrome)是一种常见但可能诊断不足的骨骼肌阿诺碱受体功能障碍表现。该病的临床特征是患儿表现为横纹肌溶解症状:肌痛、肌酸激酶(CK)和肌红蛋白升高、深色尿、无力等,但症状反复发作,持续高CK血症(CK>正常CK上限50倍),或者出现无法解释的疾病严重程度,该病通常由RYR1基因突变所致,其致病性变异是先天性肌病的最常见原因,并在临床表型、组织病理学及遗传上表现出明显差异性。目前国内罕有RYR1相关横纹肌溶解-肌痛综合征报道,现结合相关文献报告如下。

脓毒症促内质网RyR1受体磷酸化增强导致大鼠膈肌功能障碍

目的研究内质网兰尼碱受体1(RyR1)表达及磷酸化修饰在脓毒症相关膈肌功能障碍中的作用。方法将30只SPF级成年雄性SD大鼠按随机数字表法随机分成5组:Sham组、CLP-6 h组、CLP-12 h组、CLP-24 h组和CLP-24 h+KN-93组,6只/组。Sham组仅腹腔探查,不进行盲肠结扎穿孔;CLP-6 h组、CLP-12 h组、CLP-24 h组、CLP-24 h+KN-93组通过盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症模型。CLP-24 h+KN-93组于术后立即单次腹腔注射KN-93,各组分别在建模后相应时间点取膈肌标本进行指标检测。采用RM6240生物信息采集系统测量膈肌复合肌动作电位(CMAP),计算离体膈肌疲劳指数,拟合频率收缩曲线;Western blot检测膈肌CaMKⅡ、RyR1及P-RyR1蛋白表达水平。结果随脓毒症时间的延长,膈肌CMAP幅值下降,时程延长,且在24 h最为明显,CLP-24 h+KN-93组较CLP-24 h组幅值升高,时程缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。膈肌疲劳指数随脓毒症时间的延长而逐渐升高(P<0.05),CLP-24 h+KN-93组与CLP-24h组差异无统计学意义(P>0.05)。随脓毒症时间的延长,膈肌各组频率收缩曲线逐渐降低,且CLP-24 h组下降最为明显,CLP-24 h+KN-93组较CLP-24 h组明显升高(P<0.05)。随脓毒症病程的发展,RyR1表达水平CLP-24 h组较Sham组明显降低(P<0.05);各组P-RyR1水平随脓毒症时间的延长而逐渐升高,CLP-24 h+KN-93组较CLP-24 h组明显降低(P<0.05);CaMKⅡ表达水平CLP-24 h组较Sham组明显升高,CLP-24 h+KN-93组较CLP-24 h组明显降低(P<0.05)。结论脓毒症提高CaMKⅡ表达促进膈肌内质网RyR1受体磷酸化增强从而导致膈肌功能障碍。

猪RYR1基因的检测及其对生产性能的遗传效应

本研究以PCR RFLPs检测方法 ,分析了RYR1基因在山东省引进猪种及其杂交后代各群体中的分布。在纯种猪中 ,皮特兰猪的n基因的基因频率最高 (10 0 % ) ,其次为长白猪 (11 4 4% ) ,再次为约克夏猪 (6 68% ) ,杜洛克和汉普夏猪为 0 ;在杂种群体中 ,杜洛克×皮特兰猪最高 (5 0 % ) ,长白×约克夏猪为 10 62 % ,约克夏×长白猪为 7 86% ,约克夏×长白与长白×约克夏杂交所得的F2代为 1 31% ,杜洛克×汉普夏和汉普夏×杜洛克猪为 0。利用最小二乘模型分析了RYR1基因对生产性能的遗传效应 ,结果表明 :RYR1基因对 2 0日龄体重和 60日龄体重的影响不显著(P >0 0 5 ) ,但极显著提高日增重 (P <0 0 1)。RYR1基因可极显著地提高猪的胴体瘦肉率 ,降低猪肉的肉色评分 (P <0 0 1)。NN、Nn和nn 3种基因型对瘦肉率和肉色评分的最小二乘均值分别为 64 0 0 %、66 87%、67 87%和 2 73、2 5 7、2 0 2。在繁殖性状方面 ,RYR1基因对仔猪出生重影响不显著 (P >0 0 5 ) ,但显著降低繁殖母猪的产活仔数 (P <0 0 5 ) ,NN、Nn和nn 3种基因型对产活仔数的最小二乘均值分别为 11 16、10 0 0、8 2 6头。

福建省商业猪种MUC13、IGF2和RYR1基因主效位点的遗传变异分析

选择决定新生仔猪ETEC F4ac腹泻抗性的黏附素13(MUC13)基因,影响生长速度和背膘厚的IGF2内含子3 g.3072G>A,决定氟烷敏感性的RYR1 c.1843C>T等3个对养猪生产具有显著影响的基因位点,采用PCR-RFLP或PCR-SNaPshot方法,对福建省6家大型种猪场的杜洛克、长白、大白核心育种群进行基因型判定。结果表明:杜洛克、长白、大白的MUC13有利等位基因频率分别为0.892、0.643、0.638,IGF2有利等位基因频率分别为0.933、0.742、0.826,RYR1有利基因型频率很高,分别为:0.896、0.982、0.968。RYR1、IGF2与MUC13的有利等位基因型组合个体比例在各品种中差异较大,以杜洛克最高(65.4%),大白其次(28.4%),长白最低(19.9%)。因此,与常规育种技术相结合,需经过多世代选育才能将此3个主效位点的有利等位基因在受试种群中选育纯合。

RYR1基因对母猪繁殖性能的影响

用 PCR- RFL P法检测 2 2 5头大约克母猪的 RYR1(ryanodine receptor,RYR1)基因 ,它具有 NN、Nn和 nn3种基因型 ,其频率分别为 0 .76、0 .14和 0 .10 ;等位基因 N和 n的基因频率分别为 0 .83和 0 .17。该基因处于遗传不平衡状态 (P<0 .0 1)。具有 NN、Nn和 nn基因型母猪第 1胎产仔数分别为 10 .2 1、9.6 2和 8.2 2头 ;断奶仔猪数分别为9.2 1、8.13和 7.11头。等位基因 n使仔猪断奶应激效应具上升趋势 ,对增重有不利影响 ;降低母猪的产仔数和仔猪成活率 ,对繁殖性能有不良的遗传效应 ,有必要从母猪群中清除该等位基因。

我国部分引进猪种IGF2和RYR1基因主效位点的遗传变异分析

胰岛素样生长因子2(Insulin-like growth factor2,IGF2)是一类多功能细胞增殖调控因子。它在胎儿生长发育、肿瘤细胞增殖、肌肉生长等方面具有重要的调控作用。猪IGF2基因第3内含子3072G>A突变是迄今少数几个被确证的影响农业动物数量性状的主效突变位点(Quantitative Traits Nucleotide,QTN)。兰定尼受体基因(RYR1)c.1843C>T突变位点是造成猪应激综合症的主效基因位点。本研究采用PCR-RFLP及PCR-SSCP的方法,检测了深圳、江苏、江西等4个猪场5个引进猪种(品系)的323头种猪个体在IGF2的第3内含子3072G>A位点突变和RYR1基因的c.1843C>T突变位点的基因型,以此指导猪的育种实践,提高猪产肉量和经济效益,剔除氟烷应激敏感基因,选育抗应激种群。

猪RYR1基因对繁殖性能的影响

用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测了大约克和大长（大约克×长白）母猪的ＲＹＲ１基因。它具有ＮＮ、Ｎｎ、ｎｎ３种基因型，其频率分别为０．７９、０．１６和０．０５；Ｎ和ｎ的基因频率分别为０．８８和０．１２。该基因处于非遗传平衡状态。携ｎ等位基因可降低母猪的产仔数和仔猪成活率，对繁殖性能有不良的遗传效应，有必要从母猪群中清除该等位基因。

Bi-PASA技术及其在RYR1基因多态性研究中的应用

双向PCR扩增特异等位基因 (Bi PASA)是一项建立在PCR基础之上的分子生物学新技术。它通过 2对引物的一次PCR反应可以迅速、有效地检测出基因组中单个碱基的突变 ,从而识别个体基因型的差异。现以猪氟烷基因即兰尼定受体 (Ryanodinereceptor 1 )基因的多态性检测为例 ,介绍该技术的基本原理。

姜曲海猪和苏姜猪IGF2、MUC13、PHKG1、RYR1和VRTN基因主效位点的遗传变异分析

IGF2、MUC13、PHKG1、RYR1和VRTN基因是应用于实践生产的影响猪抗病、肉质及生长性能的基因。利用PCR扩增、Sanger测序和RFLP技术在姜曲海猪和苏姜猪核心群中检测了这5个基因的基因型。结果表明:姜曲海猪中的IGF2、VRTN基因和苏姜猪中的VRTN基因的有利等位基因频率相对较低。RYR1基因的检测结果显示姜曲海猪混有外来血缘,需要进行提纯复壮。通过分子标记辅助选择和常规育种技术,苏姜猪需要经过多世代选育才能将这5个基因的有利等位基因纯合。

七个贵州地方猪种RYR1基因突变的分布

兰尼定受体1(Ryanodine Receptor1,RYR1)基因中的单个氨基酸(R615C)是导致猪应激综合征、影响肉质的重要原因。采用RFLP方法,以大白猪、二个杂交猪群(杜洛克×长白猪×大白猪和长白猪×大白猪)为对照,研究了糯谷猪、萝卜猪、柯乐猪、宗地花猪、香猪、关岭猪和黔南黑猪7个贵州地方猪种RYR1基因突变的分布类型。结果表明,从柯乐猪中检测到一例杂合基因型RYR1Nn,杂合基因型的发生频率为2.08%,其余6个贵州地方猪种糯谷猪、萝卜猪、宗地花猪、香猪、关岭猪和黔南黑猪均为正常的基因型RYR1NN,对照组中,外三元、外二元杂交猪和大白猪中均检测到RYR1Nn基因型,杂合基因型的发生频率分别为11.11%、12.12%和5.77%,说明贵州地方猪种中RYR1基因的突变频率低于商品猪,但也存在一定的比例,应加强对地方猪种的利用和保护。

2个猪品种的背最长肌组织中兰尼定受体(RYR1)基因表达的发育性变化

本研究采用实时荧光定量PCR方法检测了长白猪和梅山猪背最长肌组织中RYR1基因mRNA表达量在初生(0月龄)、1月龄、2月龄、3月龄、4月龄和5月龄间的变化及其与体重、肌纤维面积(CSA)和肌内脂肪含量(IMF)之间的相关性。结果表明:长白猪的体重、CSA在多数月龄均高于梅山猪,而梅山猪的IMF在多数月龄均高于长白猪。两品种RYR1基因表达量的发育性表达模式极为相似,均表现为波动起伏中逐渐上升的趋势。相同月龄时,梅山猪RYR1基因的表达量均高于长白猪。本文初步揭示了两猪种生长发育过程中RYR1基因表达的发育性变化模式和品种差异,为进一步研究RYR1基因对猪肉质性状的影响提供了基础数据。

猪RYR1基因三种PCR-RFLPs检测方法的比较

猪应激综合症是猪在应激因子 (如运输、转栏、高温、预防注射和配种等 )的作用下诱发的一种综合症 ,其发生主要是由于RYR1基因的点突变造成的。本研究对RYR1基因的三种PCR -RFLPs检测方法进行了比较 ,分别利用三种方法对 60头猪的检测结果证明 :三者具有相同的准确性。但是三引物法和四引物法较二引物法所需的时间更少 。

模拟失重后再超重对猴咬肌细胞RyR1 mRNA表达的影响

目的:探讨模拟失重后再超重环境对猴咬肌细胞RyR1 mRNA表达的影响。方法:健康雄性猕猴23只,随机分为7组:正常对照组(A组)、模拟失重(B组)、模拟超重(C组)以及失重后再超重+11Gx/270 s(D1组)、+13Gx/230 s(D2组)、+15Gx/200 s(D3组)(以上各组恢复2 d)、+13Gx/230 s组(D4组)(恢复10 d);各组进行相应模拟实验后处死动物,取其咬肌组织制作冰冻切片,HE染色法观察咬肌细胞的组织形态学变化;RT-PCR法检测咬肌细胞中RyR1 mRNA的表达水平。结果:1单纯失重和单纯超重组咬肌细胞胞膜边界模糊不清,横纹不清晰或消失,间质稀疏;模拟失重后再超重各组部分肌细胞肿胀,偶见细胞核呈扁平状;2各实验组(除D4组外)咬肌细胞中的RyR1 mRNA表达水平均明显下降(P<0.05);失重后再超重各组分别与单纯超重组(C组)相比,其中D2、D3组的RyR1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05);而D4组的RyR1 mRNA表达水平则有所上升,并高于D2组(P<0.05)。结论:一定范围失重、超重和失重后再超重环境均可不同程度地造成咬肌细胞组织形态学改变,并可引起RyR1 mRNA表达水平的下降,这些改变是可恢复的。

母猪RYR1基因对仔猪早期生长的影响

用PCR-RFLP法对13 头大约克母猪的RYR1 基因分型。用数学模型分析3 种基因型的82 头仔猪生长发育情况,发现仔猪正常生长规律符合指数模型, 断奶到断奶应激结束时间内的生长符合二次多项式模型。RYR1NN 型母猪所产仔猪从初生到65 日龄的体重均显著低于RYR1Nn和RYR1nn型母猪的仔猪(P< 0.05)。3 种基因型母猪的仔猪间断奶应激差异不显著(P> 0.05)。

ESR和RYR1基因的多态性在监利猪、大白猪及杂交大监猪群中分布特征的探讨

采用PCR-RFLP技术测定了ESR基因和RYR1基因在监利猪、大监猪和大白猪3个猪群中的多态性分布,并将基因型频率和基因频率进行了对比分析。结果表明:ESR基因在监利、大白和大监猪中都具有多态性,同前人的研究相似,国内地方品种监利和大监猪都具有较高的B等位基因频率,分别为0.571和0.757。RYR1基因在大白猪中存在多态,而在监利猪、大监猪中只含有等位基因N。监利猪、大监猪携带较高频率有利于产仔数提高的基因型B,及抗应激等位基因N。

江口萝卜猪和梅山猪的猪应急综合征主效基因RYR1的PCR-RFLP检测

猪兰尼定受体1(Ryanod ine Receptor1,RYR1)基因是导致猪应激综合征、影响猪肉质的主效基因。试验采用RFLP方法,以大白猪、2个杂交猪群(杜洛克×长白猪×大白猪和长白猪×大白猪)为对照,检测了江口萝卜猪与引入的梅山猪群RYR1基因的分布类型。结果表明,对照组中,外三元、外二元杂交猪和大白猪中均检测到RYR1Nn基因型,杂合基因型的发生频率分别为11.11%、12.12%和5.77%;在梅山猪中检测到不利的n等位基因,n等位基因频率为5.56%,说明n等位基因已经侵入梅山猪中,应加强梅山猪的保护;江口萝卜猪中未检测到n等位基因,表明江口萝卜猪具有良好的抗应激能力。

用商品猪群定位RYR1、PIT1和PRKAG3

利用一个由汉普夏、皮特兰猪等5品种杂交商品群建立了参考家系,采用微卫星标记构建连锁图谱的方法对分别位于6、13、15号染色体的3个基因RYR1、PIT1、PRKAG3进行了定位.结果表明RYR1位于6号染色体的S0087和Sw316之间,PIT1位于13号染色体的Sw225和Sw1056之间,PRKAG3位于15号染色体的Sw946和Sw906之间,与已发表的结果基本一致.为下一步分析这3个基因对经济性状的影响奠定了基础.

甘肃黑猪合成系RYR1基因的PCR-RFLP检测试验

采用PCR RFLPs技术对甘肃黑猪合成系RYR1基因进行了测定 ,并对其对繁殖性能的效应进行了研究。结果表明 ,RYR1Haln 基因频率甘肃黑猪瘦肉型Ⅰ系为 0 ,甘肃黑猪瘦肉型Ⅱ为1 79% ,约克夏为 7 7%。

可乐猪RYR1基因的群体遗传特性分析

氟烷基因(RYR1基因)是使猪产生劣质肉及应激综合征的主要因素之一。本研究采用PCR-RFLP技术对45头可乐猪RYR1基因的多态性进行了检测,并通过直接测序对检测结果进行了验证。结果表明:试验猪群体中仅存在显性纯合(HalNN)和杂合(HalNn)两种基因型,不存在隐性纯合基因型(Halnn)。其中,HalNN为优势基因型,频率为0.9111;HalN为优势等位基因,频率为0.955 6。同时,在可乐猪群体中,RYR1基因的变异位点为低度多态(PIC<0.25),并偏离了Hardy-Weinberg平衡(P<0.05)。本研究结果为可乐猪的选育及开发利用提供了理论依据。

PCR一步法检测猪RYR1基因

在传统的PCR加酶切检测猪的RYR1基因基础上,设计能特异地扩增突变和正常序列的4条引物,根据扩增片段大小和条带多少可直接鉴别不同的RYR1基因型,从而建立了简单、廉价、准确地PCR一步检测猪应激综合征的新方法。