Comparative genomics and phylogenetic analysis of S. dysenteriae subgroup

Genomic compositions of representatives of thirteen S. dysenteriae serotypes were investigated by performing comparative genomic hybridization (CGH) with microarray containing the whole genomic ORFs (open reading frames, ORFs) of E. coli K12 strain MG1655 and spe-cific ORFs of S. dysenteriae A1 strain Sd51197. The CGH results indicated the genomes of the serotypes contain 2654 conserved ORFs originating from E. coli. However, 219 intrinsic genes of E. coli including those prophage genes, molecular chaperones, synthesis of specific O antigen and so on were absent. Moreover, some specific genes such as type II secretion system associ-ated components, iron transport related genes and some others as well were acquired through horizontal transfer. According to phylogenic trees based on genetic composition, it was demon-strated that A1, A2, A8, A10 were distinct from the other S. dysenteriae serotypes. Our results in this report may provide new insights into the physiological process, pathogenicity and evolution of S. dysenteriae.

RAPD技术在志贺菌及沙门菌鉴别中的应用

以鸡鲍氏志贺菌、鸡白痢沙门菌和痢疾志贺菌为研究对象,分别提取基因组DNA,利用6条随机引物以随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因组DNA进行了分析.结果表明,4条随机引物能较好地在这3种菌中检测到多态性分子标记.共扩增出了59个DNA片段,其中3个菌株共有的谱带有7条,而显示多态性的片段有52条,占88.1%.引物P6的扩增图谱可用于3株细菌的鉴别.在对3株细菌扩增中发现,鸡鲍氏志贺菌与人痢疾志贺菌的扩增条带相同率达67%,但各有自己的特征性谱带.鸡沙门菌与志贺菌的扩增谱带相差甚远.

鸡源鲍氏志贺菌的RAPD分析

【目的】确定鸡源鲍氏志贺菌的进化地位。【方法】选用6条随机引物（P1～P6）,采用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术,对1株鸡源鲍氏志贺菌、2株鸡白痢沙门菌、2株鸡肠致病性大肠杆菌和2株痢疾志贺菌共7株菌的基因组DNA进行分析,同时对个别特殊序列进行克隆测序,并在此基础上分析了鸡源鲍氏志贺菌与其他15个相关菌株的进化关系。【结果】6条随机引物中有4条引物（P1,P2,P4和P6）能较好地在志贺菌、鸡白痢沙门氏菌和鸡致病性大肠杆菌3种菌中检测到多态性分子标记;这4条有效引物共扩增出了64个DNA片段,其中7个菌株共有的谱带有3条,多态性片段有61条,多态率达95.3%。引物P2可根据扩增图谱将志贺菌和大肠杆菌与沙门菌鉴别出来;用引物P6对上述7株细菌进行扩增,发现同种菌株间谱带特别相似,其中鸡鲍氏志贺菌与人痢疾志贺菌扩增条带的相同率达66.7%,与鸡肠致病性大肠杆菌扩增条带的相同率达44.4%,而鸡白痢沙门菌与志贺菌的扩增谱带相差甚远,可用于3种细菌的鉴别。对扩增片段进行的测序及进化分析结果显示,鸡源鲍氏志贺菌与人源志贺菌的进化距离最近。【结论】鸡源鲍氏志贺菌可能是人源志贺菌的一个变异株或新的亚种。

串联电极阵列压电传感技术自动检测病原体

以串联电极阵列压电石英晶体（SPQC）传感器为基础构建了一台8通道微生物自动检测仪。电极插入培养基检测溶液电导的变化。池常数k=0．05m，使用中性、低电导的氨基酸培养基（AaB），电导控制灵敏度区间为550-600μs。利用拟合-微分的方法简单准确地得到频率检测时间（FDT）。对普通的金黄色葡萄球菌（S．aureus）和痢疾杆菌（S．dysenteriae）进行自动检测，结果表明：FDT和样品中细菌浓度呈线性关系（R〉0．99），检测范围为10-10^6CFU·mL^-1。该方法准确度与国标的平板记数法相当（置信区间为95％），但重现性更好，更稳定，灵敏度更高。

活性非可培养状态痢疾志贺菌蛋白分析研究

目的研究处于活性非可培养状态(VBNC状态)的痢疾志贺菌血清1型蛋白表达情况。方法将低温寡营养诱导处于VBNC状态与处于对数生长期的痢疾志贺菌血清型1型全蛋白提取,用2D电泳将蛋白质分开,TOF/TOF二级质谱鉴定差异蛋白。结果共获得14个差异点,11个为酶,3个为具有酶活性的蛋白,这些蛋白质可调节细菌的能量代谢和物质合成。处于VBNC状态的痢疾志贺菌保持较高水平的代谢活性,有氧氧化和底物水平磷酸化水平较高,但是细菌蛋白表达能力下降,分裂能力下降。结论从蛋白水平证实了处于VBNC状态的痢疾志贺菌有活性,并解释了难于在常规培养基上形成菌落的原因。

微量量热法测定钴配合物抑制痢疾杆菌作用的有关参数

微量量热法测定并研究计算了在不同浓度的钴配合物作用下痢疾杆菌的生长速率常数和最佳用药量

痢疾杆菌及其L型内毒素与细胞凋亡

目的 探讨痢疾杆菌及其L型内毒素与细胞凋亡的关系。方法 将痢疾杆菌诱导为稳定L型 ,分别制备原菌内毒素和L型内毒素 ,用尾静脉注射法感染小鼠 ,观察小鼠的发病情况 ,并对死亡小鼠进行组织学及凋亡细胞检查。本实验共分三组 :A组原菌内毒素组 ,B组L型内毒素组 ,C组生理盐水组。结果 A组致小鼠细胞凋亡作用最强 ,以肝细胞凋亡最明显 ,A、B两组之间致凋亡的差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 痢疾杆菌内毒素可致小鼠肝细胞凋亡 ,而其L型 ,由于失去细胞壁 ,内毒素丢失 。

水中活的非可培养状态痢疾志贺菌荧光定量PCR检测方法研究

目的建立活的非可培养（viable but noncuhurable state，VBNC）状态痢疾志贺菌逆转录荧光定量PCR（reverse transcription quantitative PCR，RT—qPCR）检测方法。方法低温寡营养诱导痢疾志贺菌进入VBNC状态，用平板计数法和荧光显微镜检法确定细菌的可培养数和活菌数，以痢疾志贺菌的志贺毒素基因stx（GenBank：M19437）、侵袭性毒力基因ipaH（GenBank：NC_007607）为目的基因设计引物，提取RNA进行RT—qPCR检测，研究检出限并建立标准曲线，用加标于环境水体中的志贺菌水样进行方法验证。结果建立处于VBNC状态的痢疾志贺菌RT—qPCR检测技术，检测时间少于6h，复杂环境水体中每500恤l水样可培养的痢疾志贺菌检出限为1—5cfu，VBNC状态的痢疾志贺菌3～25cfu。结论该方法检测快速，可实现对VBNC状态志贺菌的检测，可用于复杂水样的直接检测，适用于水体污染调查和应急反应时快速筛查志贺菌。

活的非可培养状态痢疾志贺菌感染细胞能力的研究

目的研究处于活的非可培养(viable but nonculturable,VBNC)状态的痢疾志贺菌黏附Vero细胞和感染HT-29细胞的能力,探讨其潜在致病性。方法用低温寡营养诱导的处于VBNC状态的痢疾志贺菌血清型1型感染Vero细胞以研究其细胞毒性,感染HT-29细胞以研究其黏附性。结果处于VBNC状态的痢疾志贺菌血清型1型能使贴壁生长的Vero细胞丧失贴壁能力,能够黏附HT-29细胞。结论处于VBNC状态的痢疾志贺菌血清型1型具有细胞毒作用;具有黏附细胞的能力,具有潜在的致病能力。