转录组分析揭示荷叶离褶伞菌多糖LDS-1抗小鼠S180肿瘤的分子机制

以荷叶离褶伞菌多糖LDS-1、甘露聚糖肽和空白对照作用下的小鼠S180肿瘤细胞为研究材料,运用RNA-Seq测序技术进行生物信息学分析,结果显示LDS-1组、甘露聚糖肽组和空白对照组分别获得8.27、 8.35和8.97 G的分析数据.高表达基因(FPKM>2 200)分析显示LDS-1主要通过下调Rplp1基因调控细胞分裂,将S180细胞停滞在G1期以抑制其分裂.差异基因分析结果显示LDS-1主要通过上调Alb、 Timp4、 Apoa1基因调节蛋白表达或者细胞黏连性,抑制S180肿瘤细胞迁移.KEGG(京都基因与基因组百科全书)通路富集结果显示, LDS-1抑制S180肿瘤生长的关键基因主要富集在过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路中,上游Fabp3基因下调,激活下游Apoa1、Slc27a2和Adipoq等多个基因上调,调控S180细胞的脂质代谢和胆固醇代谢. LDS-1能够通过调控高表达关键基因Rplp1,差异表达关键基因Alb、 Timp4、 Apoa1,以及PPAR信号通路抑制S180肿瘤细胞的增殖分裂、能量获取和迁移侵袭.

草黄口蘑多糖对S180荷瘤小鼠抗肿瘤活性分子机制研究

多糖作为口蘑属真菌的主要功能成分之一,具有免疫调节、抗氧化及抗肿瘤等活性。为明确草黄口蘑多糖的结构特征及其对S180荷瘤小鼠抗肿瘤活性相关分子机制,该研究以草黄口蘑子实体经热水浸提法提取的草黄口蘑多糖[Tricholoma lascivum (Fr.)Gillet polysaccharide,TLG-1]为实验材料,初步解析TLG-1结构,以S180荷瘤小鼠为模型检测体内抗肿瘤活性,并采用转录组测序技术对S180肿瘤组织总RNA进行测序分析。结果表明,TLG-1重均分子质量为13 442 Da,由木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖4种单糖组成,其比例为1.57∶1.45∶2.84∶4.14。TLG-1可显著抑制荷瘤小鼠S180肿瘤的生长(P<0.01),抑瘤率为53.8%。转录组测序分析显示,TLG-1能显著上调mt-Co1、Prlr、Foxa1以及下调Pitx2、Rplp1、Eef1a1及Lgals1等基因,影响S180肿瘤细胞的代谢途径,调控细胞周期并抑制上皮间质转化过程。基因本体富集分析表明,TLG-1可激活细胞因子介导的信号通路,引发细胞免疫。京都基因与基因组百科全书富集分析显示,在Jak-STAT信号通路中的Il21、Il12rb2、Il12b、Il2ra、Il2rb、Il2rg、Il15ra和Ifng等基因显著上调,通过转换肿瘤相关巨噬细胞表型及分泌干扰素-γ等,增强小鼠抗肿瘤免疫应答。该研究结果为草黄口蘑多糖的开发和利用提供了一定的理论基础。

鸡血藤醇提物的提取及抗鼠肝癌S180活性研究

目的制备鸡血藤乙醇提取物水溶性部位,研究其体内抗肿瘤活性。方法采用乙醇索氏回流提取、水沉淀的方法制备鸡血藤乙醇提取物水溶性部位,并应用高效液相色谱法对其中的芒柄花素进行含量测定。采用S180荷瘤小鼠模型研究鸡血藤乙醇提取物水溶性部位的体内抗肿瘤活性,记录移植实体瘤抑制率,HE染色观察实体瘤组织和脾脏的病理改变,免疫组织化学法观察实体瘤组织Caspase-3蛋白表达情况。结果本提取工艺获得鸡血藤水溶性乙醇提取物生药含量:3.75 g生药/g浓缩稠膏,每克生药含56.25μg芒柄花素。鸡血藤醇提物高剂量能有效抑制荷瘤小鼠脾脏肥大及抑制实体瘤的生长,抑瘤率为44.70%(与模型对照组比较P<0.01)。病理HE结果表明模型组脾脏组织有肿瘤细胞浸润,实体瘤组织肿瘤细胞规整;鸡血藤醇提物高、中剂量组脾脏组织肿瘤细胞浸润减轻,实体瘤组织肿瘤细胞核固缩,肿瘤细胞凋亡、坏死,实体瘤组织Caspase-3蛋白表达增加。结论鸡血藤醇提物能显著抑制S180荷瘤小鼠实体瘤生长及减少肿瘤细胞转移,其机制可能与促进肿瘤细胞凋亡相关。

双黄连可溶性粉对S180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞C3b和Fc受体的影响

旨在探究双黄连可溶性粉对S180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞表面C3b受体、Fc受体活性的影响,为扩大双黄连可溶性粉临床使用范围提供科学依据。以双黄连可溶性粉为研究材料,S180荷瘤小鼠为研究对象,YC-花环、EA-花环试验为研究手段,巨噬细胞C3b、Fc受体活性为检测指标,研究双黄连可溶性粉对S180荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞C3b、Fc受体活性的影响。结果显示,小鼠接种S180瘤细胞,荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞Fc、C3b受体活性不受影响,免疫抑制剂环磷酰胺具有降低C3b受体活性的作用(对Fc受体活性没有影响),连续给予4 d~14 d不同剂量的双黄连口服液,荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞Fc、C3b受体活性增强,吞噬能力增强,作用优于或相当于黄芪多糖。研究结果为双黄连可溶性粉的临床应用研究提供了科学依据。

基于180s劲度模量的低温开裂指数预测

提出了一种通过材料性能测试,预测5~10年状况下沥青路面实际开裂的方法。依托开裂指数同沥青材料低温性能的关系,利用CAM模型(一种数学模型)拟合得到了5类常用沥青的180 s劲度模量值,预测并提出了PAV(压力老化)状态下各类沥青的开裂指数。通过数据分析,验证了该种模拟方式预测的准确性。借助长吉高速实地芯样开裂情况调研,验证CI值(低温开裂指数)对沥青路面实际开裂水平的预测效果。结果表明,CAM模型下得到的沥青梁180 s模量计算方法简单,数据置信度高,预测得到的SBS改性沥青开裂指数与路面实际开裂水平一致,证明了利用沥青材料性能预测路面实际抗裂能力这一方法的可行性。依据规范提法,给出了五类北方常用沥青的CI值参考区间。

苦参碱联合PFC方案化疗对腹水型S180小鼠生存期及P170蛋白表达的影响

目的探讨苦参碱联合PFC方案(顺铂+5-氟尿嘧啶+环磷酰胺)化疗对腹水型S180小鼠生存期及P170蛋白表达的影响。方法选择健康昆明小鼠80只,适应性饲养1周,随机分为模型组、PFC组、5%苦参碱+PFC组、10%苦参碱+PFC组,每组20只。各组于右侧腋窝皮下注射S180细胞构建腹水型S180小鼠模型。接种7 d后,模型组予生理盐水0.2 mL/10 g体质量灌胃,其余三组予PFC方案化疗,5%苦参碱+PFC组、10%苦参碱+PFC组在PFC方案化疗同时分别予5%、10%苦参碱溶液0.2 mL/10 g体质量灌胃,每天1次。各组均干预4周。统计各组生存时间;接种移植瘤7 d开始称量体质量,之后7 d称量1次体质量,计算7 d体质量增加情况;称量完体质量后,抽取腹水,检测腹水中P170蛋白表达及S180细胞凋亡率。结果各组接种S180细胞1周肿瘤直径约为5 mm,小鼠出现精神萎靡、行动迟缓、毛发干枯蓬松。模型组第2周开始出现死亡,至第4周时全部死亡。其余各组第3周开始陆续出现死亡。与模型组比较,各药物干预组生存时间长(P均<0.01);与PFC组比较,5%苦参碱+PFC组和10%苦参碱+PFC组生存时间长(P均<0.05);与5%苦参碱+PFC组比较,10%苦参碱+PFC组生存时间长(P<0.05)。5%苦参碱+PFC组和10%苦参碱+PFC组干预2、3、4周体质量增加均高于PFC组同期,且10%苦参碱+PFC组干预2、3、4周体质量增加均高于5%苦参碱+PFC组同期(P均<0.05)。5%苦参碱+PFC组和10%苦参碱+PFC组干预3、4周腹水中P170蛋白表达均低于PFC组同期,S180细胞凋亡率均高于PFC组同期,以10%苦参碱+PFC组干预3、4周变化更明显(P均<0.05)。结论5%、10%苦参碱联合PFC方案化疗均能显著改善腹水型S180小鼠生存期,抑制腹水中P170蛋白表达,促进腹水中S180细胞凋亡,以10%苦参碱联合PFC方案化疗效果较好。

美洲大蠊提取物CⅡ-3对荷S180肉瘤小鼠抑瘤作用及机制初探

目的:探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3对荷S180肉瘤小鼠抑瘤作用及机制。方法:将荷S180肉瘤小鼠随机分为模型组、阳性对照(CTX)组、CⅡ-3高、中、低剂量组,另设正常对照组,每组10只小鼠,观察给药后各组小鼠肿瘤组织的病理改变,计算抑瘤率;ELISA试剂盒检测血清中血管内皮生长因子(VEGF)和端粒酶(TE)水平;免疫组织化学法检测肿瘤组织中p53、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、微血管密度(MVD)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达。结果:CTX组、CⅡ-3高、中、低剂量组小鼠抑瘤率分别为85.71%、55.71%、44.28%、34.28%。CⅡ-3高、中剂量组小鼠肿瘤组织坏死区域明显。与模型组相比,CⅡ-3高剂量组小鼠血清中TE活力降低(P<0.05),CⅡ-3高、中剂量组小鼠肿瘤组织中p53、Bcl-2、MVD、COX-2表达显著降低(P<0.01),Caspase-3表达显著增加(P<0.01)。结论:CⅡ-3能显著抑制S180肉瘤的生长,其机制可能与降低TE活力,减少肿瘤组织中p53、Bcl-2、MVD、COX-2表达,增加Caspase-3表达等途径相关。

绞股蓝总皂甙对小鼠S_(180)肉瘤及K_(562)细胞的抑制作用

目的 绞股蓝总皂甙 (GP)对小鼠S180 肉瘤及K562 细胞的抑制作用。方法 通过动物实验观察绞股蓝总皂甙对小鼠S180 肉瘤生长状况、肿瘤坏死面积 (TNA)与肿瘤总面积 (TTA)的比率、瘤周瘤内免疫活性细胞浸润状况及荷瘤小鼠脾脏的影响 ;通过细胞培养观察绞股蓝总皂甙对K562 细胞生长的抑制作用。结果 经重复实验证实 ,GP能显著抑制小鼠S180 肉瘤的生长 ,TNA与TTA的比率显著增加 ,瘤周尤其是瘤内淋巴细胞、巨噬细胞浸润数量明显增加 ,荷瘤小鼠脾重增加、脾白髓数目增多、体积增大。同时证实 ,GP对K562 细胞株具有明显的生长抑制作用。结论 GP的抑瘤作用主要是直接杀伤瘤细胞 。

番茄红素对S_(180)荷瘤小鼠抗肿瘤作用的实验研究

目的 研究番茄红素 (LP)的体内抗肿瘤作用。方法 通过S1 80 肉瘤建立荷瘤小鼠模型 ,给予番茄红素后观察荷瘤小鼠肿瘤生长情况及对小鼠免疫系统和抗氧化酶的影响。结果 给药后能够增强脾脏淋巴细胞增殖能力 ,提高自然杀伤细胞 (NK)活性 ,可升高小鼠血清SOD、GSH Px活性 ,降低MDA含量 (P <0 0 5 )。结论 番茄红素具有明显的抗肿瘤作用 ,其作用可能是通过提高免疫系统功能和机体的抗氧化酶活力来实现的。

天然红心鸭蛋中的类胡萝卜素及对S_(180)肿瘤抑制作用的初步研究

本文对天然红心鸭蛋中的类胡萝卜素做了初步分析,同时探讨了红心鸭蛋中的类胡萝卜素对S180肿瘤的作用。初步结果表明,天然红心鸭蛋中的类胡萝卜素包含有虾青素及其它一些种类的类胡萝卜素。天然红心鸭蛋中的类胡萝卜素对肝匀浆MDA的产生有显著的抑制作用, 对昆明小白鼠S180肿瘤具有显著的抑制作用,且具有明显的量效关系。低、中、高剂量组的类胡萝卜素对肿瘤的抑制率分别为23.2%、35.7%和42.9%,对肿瘤小鼠的内脏指数有显著改善作用,并可显著地降低肿瘤小鼠血清MDA含量。

苦参碱对获得性多药耐药小鼠S_(180)肿瘤细胞基因表达产物P_(170)、LRP及TOPOⅡ表达的影响

目的 :实验观察苦参碱口服给药对化疗诱导的多药耐药基因表达产物P170 、肺耐药蛋白LRP和拓扑异构酶Ⅱ的影响 ,探讨其干预多药耐药的分子生物学基础 ,以指导临床应用苦参碱干预化疗多药耐药的产生。方法 :以亚于治疗剂量的联合化疗PFC方案 ,建立小鼠S180 肿瘤细胞多药耐药模型 ,同时给予苦参碱 4周 ,流式细胞仪荧光检测P170 、LRP、TOPOⅡ。结果 :苦参碱明显降低化疗诱导后耐药细胞P170 、LRP的表达率和ROPOⅡ活性。说明苦参碱可通过对相关生物活性物质的调节 ,干预化疗诱发的肿瘤细胞多药耐药的产生。

薏苡仁注射液对小鼠移植性S180肉瘤血管形成抑制的作用

目的 探讨薏苡仁注射液对肿瘤血管形成抑制作用。方法 通过建立动物肿瘤模型 ,运用薏苡仁实验治疗 ,检测其抑瘤率和肿瘤内血管密度 ,以及瘤体VEGF和bFGF表达的改变。结果 薏苡仁具有明显的抑制S180肉瘤生长作用。实验组的S180瘤体内微血管密度均明显低于对照组 ;免疫组化显示薏苡仁大、中剂量组均可下调S180瘤体内VEGF、bFGF的表达。结论 薏苡仁注射液对肿瘤血管形成均有明显抑制作用 ,降低VEGF、bFGF的表达可能是其抑制肿瘤血管形成的主要机制之一。

基因重组别藻蓝蛋白对小鼠S_(180)肉瘤的抑制作用

研究基因重组别藻蓝蛋白 (RAPC)的抑瘤作用 ,给皮下接种S180 瘤细胞的小鼠 ,每天分别ig及ipRAPC 13 4mg/kg ,6 7mg/kg和 3 4mg/kg ,共 10d ,第 11d处死小鼠 ,称瘤重和胸腺重 ,计数白细胞。结果表明 ,RAPC对小鼠S180 肉瘤有显著抑制作用 ,瘤重抑制率在 45 %～ 64 %之间 ,ig及ip均有效 ,对荷瘤小鼠的胸腺指数和白细胞数量无明显影响。

马齿苋多糖对S_(180)荷瘤小鼠免疫功能的影响

本文探讨马齿苋多糖对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响。马齿苋采用水提醇沉法得到马齿苋多糖,分别以50、100、200mg/kg通过腹腔给药10d,观察马齿苋多糖对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用及对小鼠淋巴细胞转化功能、腹腔巨噬细胞的吞噬能力、白介素l(IL l)和白介素2(IL2)生成量的影响。结果显示,马齿苋多糖对S180荷瘤小鼠有明显的抑瘤作用,抑瘤率分别为16.92%、51.45%和64.96%。不同剂量马齿苋多糖与对照组相比可明显促进淋巴细胞的转化、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力,可有效的增加荷瘤小鼠脾淋巴细胞的转化和腹腔巨噬细胞的吞噬能力以及白介素1(IL1)和白介素2(IL2)的分泌。说明马齿苋多糖对S180荷瘤小鼠具有显著的抗肿瘤作用,其作用机制与增强小鼠免疫作用有关。

阳和汤对移植S_(180A)小鼠抑瘤及体内诱生干扰素作用的实验研究

目的:探讨阳和汤抗肿瘤作用。方法;取昆明种小白鼠50只,常规接种S_(180A)瘤株于右后肢外侧皮下,次日分组给药,共给药10d,末次给药次日处死动物,称取瘤重,计算抑瘤率;无菌取脾,分离脾细胞悬液,用微量细胞病变抑制法,按Reed-Muench法计算干扰素效价。结果:阳和汤A组(42.9g/kg)、B组(57.2g/kg)、环磷酰胺组(75mg/kg)抑瘤率分别达36.53％、39.74％、48.08％;阳和汤A组、B组脾细胞产生干扰素分别为(1087.82±463.26)、(922.06±650.99)IU/mL,与荷瘤对照组(100.00±56.68)IU/mL比较,差异有非常显著意义。结论:阳和汤对小鼠肉瘤S_(180A)有明显抑制作用,并能明显诱导机体产生干扰素。

黄芩茎叶总黄酮对小鼠肉瘤S_(180)瘤株体内增殖的抑制作用

目的:初步分析黄芩茎叶总黄酮的抗肿瘤药效。方法:采用小鼠肉瘤S180模型,观察黄芩茎叶总黄酮腹腔注射给药对移植瘤重量的影响。结果:2次重复实验,3个剂量的黄芩茎叶总黄酮皆可抑制移植肉瘤S180瘤株的体内增殖,量效关系较显著,其中,100～200mg/kg黄芩茎叶总黄酮的抑瘤率>30%,与对照组比较差异有高度显著性和显著性(P<0.01,P<0.05),但其活性低于50mg/kg环磷酰胺(平均抑瘤率达90.50%)。结论:黄芩茎叶总黄酮具有高效低毒的抗肿瘤活性,有可能开发成为新的抗肿瘤药物。

蜈蚣提取物对S180及H22荷瘤小鼠的影响及其毒性的实验研究

目的:研究蜈蚣提取物对正常小鼠和移植性S180、H22荷瘤小鼠的影响及其毒性。方法:分别对正常小鼠和S180、H22荷瘤小鼠经口服给药12 d,观察小鼠的生长情况、肿瘤生长情况、体重及小鼠胸腺、脾脏指数变化,毒性实验分别采用最大给药量口服一次给药和多次给药方法观察。结果:蜈蚣水提物对正常小鼠影响较小,蜈蚣醇提物对小鼠肝指数有增大作用。蜈蚣醇提物中低剂量组对S180荷瘤鼠肿瘤增殖有一定的抑制趋势,但无统计学差异,高剂量组无抑制作用。蜈蚣水提物对H22荷瘤小鼠不具有抑制肿瘤生长的作用,且能导致荷瘤小鼠衰弱和死亡。急性毒性实验中,小鼠给药48 g/kg,未见致死毒性。结论:蜈蚣水提物不能抑制荷瘤小鼠肿瘤增殖,蜈蚣醇提物有一定毒性,提示蜈蚣单独用于治疗癌症尚需深入研究。

红芪总多糖诱导S180瘤细胞凋亡的实验研究

目的:研究红芪总多糖(THPS)诱导小鼠S180瘤细胞凋亡作用及其机制。方法:昆明小鼠60只接种S180瘤后随机分为5组。(1)模型组(S):生理盐水腹腔注射,(2)环磷酰胺组(CY):CY腹腔注射,(3)THPS低剂量(H100),(4)THPS中剂量(H200)和(5)THPS高剂量组(H400):分别给予THPS低剂量、中剂量和高剂量腹腔注射,14 d后处死小鼠。电镜观察各组瘤细胞的形态,激光共聚焦(LSCM)测定每组瘤细胞DNA、RNA含量、细胞内钙离子浓度、自由基含量及线粒体膜电位。结果:中剂量的THPS可明显升高细胞内钙离子浓度、自由基含量及降低线粒体膜电位和瘤细胞DNARNA含量的作用。结论:THPS中剂量通过升高细胞内钙离子浓度、自由基含量及降低线粒体膜电位诱导小鼠S180瘤细胞凋亡。

牛磺酸对小鼠移植瘤S_(180)肉瘤影响的研究

小鼠喂以基础饲料，对照组和实验组两组动物分别饮水和１％牛磺酸，进行下列实验：１．接种Ｓ１８０肉瘤后，各组又分为不注射环磷酰胺（ＣＴＸ）和注射环磷酰胺进行化疗两组。观察小鼠存活时间、肉瘤大小及抑瘤率。结果表明：补充牛磺酸的荷瘤小鼠存活时间（３５．７±２３．７）天，明显长于对照组（１８．７±５．６）天，抑瘤率为４２．２６％，牛磺酸与ＣＴＸ合用的小鼠生存至６１天仍无一例死亡，也未见到肉眼肿块，抑瘤率为１００％。对照组用ＣＴＸ小鼠存活时间（３９．８±１２．３）天，与未用ＣＴＸ小鼠无差别。２．小鼠接种艾氏腹水瘤瘤细胞后，观察瘤细胞的膜流动性。结果表明：接种艾氏腹水瘤后，牛磺酸组瘤细胞膜的荧光偏振度ｐ＝０．１０８±０．０２０、微粘度η＝０．６１８±０．１４０；而对照组ｐ＝０．１３９±０．０２０，η＝０．８７４±０．１５０，说明牛磺酸组细胞膜的流动性明显优于对照组（Ｐ＜０．０１）。３．以碳素廓清法和血清溶血素生成测定两组免疫功能。牛磺酸组小鼠的免疫功能也明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。以上结果证明：牛磺酸具有抑瘤效果，在用ＣＴＸ进行化疗时，具有明显的协同效应。其抑瘤效果可能与牛磺酸能加强机体免疫功能、保护细胞膜的稳定性和?