猪δ冠状病毒结构蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

为了获得猪δ冠状病毒(PDCoV)结构蛋白并评价其免疫原性,通过RT-PCR技术,扩增PDCoV CZ2020株中完整的S、E、M和N基因,克隆至pCAGGS真核表达载体,构建pCAGGS-PDCoV-S、pCAGGS-PDCoV-E、pCAGGS-PDCoV-M、pCAGGS-PDCoV-N真核表达质粒,经测序鉴定后转染HEK293T细胞,采用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot(WB)方法检测PDCoV的S、E、M、N蛋白表达。将4种蛋白分别皮下注射BALB/c小鼠,制备重组蛋白多克隆抗体,并用WB法和IFA法测定抗体效价,评价免疫反应性。结果:重组质粒pCAGGS-PDCoV-S、pCAGGS-PDCoV-E、pCAGGS-PDCoV-M、pCAGGS-PDCoV-N能够在HEK293T细胞内正常表达,并与PDCoV阳性猪血清特异性结合;制备的pCAGGS-PDCoV-S、pCAGGS-PDCoV-E、pCAGGS-PDCoV-M和pCAGGS-PDCoV-N的多克隆抗体效价可达1∶10 000以上,表明重组蛋白可诱导小鼠产生高水平抗体。结果表明pCAGGS-PDCoV-S、pCAGGS-PDCoV-E、pCAGGS-PDCoV-M和pCAGGS-PDCoV-N真核表达质粒成功构建,试验制备的多克隆抗体具有较强的免疫反应性,能够为研制诊断试剂盒和新型疫苗提供基础。