富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在肿瘤中的研究进展

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine, SPARC)是肿瘤微环境中重要的基质成分,它作为正常细胞恶变和肿瘤发生发展过程中一个重要的分子,能够调节多种肿瘤相关细胞因子及其受体的相互作用,并调节多种信号通路以及蛋白水解酶的表达水平。由于它抑制和促进肿瘤进展的能力取决于细胞类型、肿瘤分期等,因此在多种类型的肿瘤中差异表达,并可能成为肿瘤早期诊断的新型生物标记物以及治疗的新靶点。本文就近年来SPARC在肿瘤研究中的进展作一综述。

老年2型糖尿病患者血清同型半胱氨酸、血清淀粉样蛋白A、S100β水平与颈动脉斑块稳定性的关系

目的探讨老年2型糖尿病患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、S100β水平与颈动脉斑块稳定性的关系。方法选取2021年6月至2023年6月德阳市人民医院收治的186例老年2型糖尿病患者为病例组,同期体检的186例健康者为对照组,根据斑块情况将病例组患者分为不稳定斑块组57例,稳定斑块组32例,无斑块组97例。回顾性分析受试者血清Hcy、SAA、S100β水平及不稳定斑块组、稳定斑块组、无斑块组的临床资料。采用Spearman法分析老年2型糖尿病患者血清Hcy、SAA、S100β水平与颈动脉斑块稳定性的相关性,Logistic回归模型分析老年2型糖尿病患者颈动脉斑块稳定性的影响因素,ROC曲线分析Hcy、SAA、S100β评估老年2型糖尿病患者颈动脉不稳定斑块的效能。结果病例组患者血清Hcy、SAA、S100β水平高于对照组(t=28.737、40.946、57.982,P<0.05);不稳定斑块组、稳定斑块组、无斑块组三组间糖尿病病程、空腹血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白、Hcy、SAA、S100β差异有统计学意义(P<0.05);老年2型糖尿病患者血清Hcy、SAA、S100β水平均与颈动脉斑块的不稳定性呈正相关(r=0.802、0.669、0.745,P<0.01);糖尿病病程、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白、Hcy、SAA、S100β是老年2型糖尿病患者颈动脉不稳定斑块的危险因素(OR=1.384、1.582、2.147、2.560、2.309、3.728,P<0.05);Hcy、SAA、S100β均可评估老年2型糖尿病患者颈动脉不稳定斑块,三项联合评估的效能优于单项评估(Z=2.217、1.995、1.986,P<0.05)。结论老年2型糖尿病患者血清Hcy、SAA、S100β水平与颈动脉斑块稳定性相关,三项联合评估颈动脉不稳定斑块的效能优于单项评估。

富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2在神经母细胞瘤恶性进展中的功能和机制

目的:探究富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2(cysteine and glycine-rich protein 2,CSRP2)在神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)恶性进展中的功能和作用机制。方法:利用R2数据库分析NB临床样本中CSRP2基因的mRNA水平与NB患儿临床预后的相关性;在NB细胞系SK-N-BE(2)和SH-SY5Y中利用靶向小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰CSRP2的表达或利用质粒转染过表达CSRP2;通过结晶紫染色和实时无标记动态细胞分析技术观察NB细胞的增殖情况;采用克隆形成方法观察NB细胞长时间的克隆形成能力;利用免疫荧光实验检测细胞增殖标记物Ki-67的水平;利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色流式细胞术分析细胞周期比例,Annexin V/7AAD染色分析细胞凋亡比例;采用划痕实验观察细胞的迁移能力;利用Western blot或实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测NB原发肿瘤组织和细胞系中蛋白和基因的表达水平。结果:NB临床数据库中,国际神经母细胞瘤分期(international neuroblastoma staging system,INSS)为高危险度3/4期的NB组织中CSRP2的mRNA水平显著高于低危险度的1/2期,且高表达水平组NB患儿的生存期显著低于低表达组;Western blot结果显示,CSRP2在3/4期NB组织中的蛋白水平显著高于1/2期。NB细胞中敲低CSRP2,细胞的活力减弱、增殖能力降低;NB细胞中过表达CSRP2促进细胞增殖;敲低CSRP2后,sub-G1、G0/G1和S期细胞的比例增加,Annexin V阳性细胞的比例增多;敲低CSRP2的NB细胞的划痕愈合率显著小于对照组。机制研究发现,敲低CSRP2后细胞增殖标记分子Ki-67和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)磷酸化水平显著低于对照组。结论:CSRP2在高危险度3/4期NB组织中高表达,表达水平与NB患儿生存期呈负相关;CSRP2通过促进ERK1/2活化,促进NB细胞的增殖和迁移,抑制细胞凋亡,表明CSRP2通过激活ERK1/2促进NB进展,为高危NB的靶向治疗提供了潜在的靶点。

血清高半胱氨酸蛋白61、干扰素-γ、基质金属蛋白酶-9水平与Graves眼病活动性关系研究

目的:探讨血清高半胱氨酸蛋白61(CYR61)、干扰素-γ(IFN-γ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平与Graves眼病疾病活动性的关系。方法:选择GO患者112例为研究对象,依据临床活动性评分(CAS)分为活动期组(CAS≥3分,62例)和非活动期组(CAS<3分,50例)。比较两组血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平。分析血清CYR61、IFN-γ、MMP-9与疾病活动性的相关性及影响疾病活动性的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CYR61、IFN-γ、MMP-9对GO疾病活动性的预测价值。结果:非活动期组患者血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平较活动期组下降(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平与GO患者疾病活动性呈正相关(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9为影响GO患者疾病活动性的影响因素(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9对GO患者疾病活动性均有一定的预测价值,三者联合的预测价值更高(均P<0.05)。结论:GO患者活动期血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平明显高于非活动期,与GO患者疾病活动性呈正相关,三者联合检测对GO患者疾病活动性的临床预测价值良好。

人血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂S及肿瘤标志物在口腔颌面部恶性肿瘤中的诊断价值

目的:探讨人血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂S(CST4)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)、糖类抗原19-9(CA19-9)、可溶性细胞角蛋白组分(CYFRA21-1)在口腔颌面部恶性肿瘤中的诊断价值。方法:选取2022年1—11月于河北医科大学第四医院治疗的232例口腔颌面部恶性肿瘤患者、49例口腔颌面部良性肿瘤患者以及同时期的40例健康体检者为研究对象,分析上述3组人群血清CST4、SCC、CA19-9和CYFRA21-1表达水平,制作ROC曲线评价不同指标对口腔颌面部恶性肿瘤的诊断效能。结果:口腔颌面部恶性肿瘤组的血清CST4、SCC、CYFRA21-1中位数水平明显高于良性肿瘤组和健康对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。不同部位及不同病理类型口腔颌面部恶性肿瘤患者血清CST4的表达水平无明显差异(P>0.05)。ROC曲线显示血清CST4检测对口腔颌面部恶性肿瘤的诊断价值较高(AUC=0.954,敏感度为97.5%,特异度为78.45%,截断值为74.68 ng/mL),且CST4、SCC和CYFRA21-1三者联合检测对口腔颌面部恶性肿瘤的临床诊断效能更高。结论:血清CST4、SCC和CYFRA21-1在口腔颌面部恶性肿瘤中均高表达,与单独检测血清肿瘤标志物相比,三者联合检测对口腔颌面部恶性肿瘤的诊断具有较高的参考价值,可推荐作为口腔颌面部恶性肿瘤辅助诊断的肿瘤标志物。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂S与传统肿瘤标志物在胃肠癌中的诊断价值比较

目的探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂S(CST4)在胃肠癌中的临床意义。方法利用血清CST4试剂盒(ELISA法)和化学发光法分别检测80例胃肠癌病人(胃癌40例,结直肠癌40例)和40例正常人对照血清CST4、CEA、CA19-9和CA125浓度,并对检测结果进行统计分析,评估CST4的临床意义。结果胃肠癌组CST4浓度中位数分别为78.272(36.892,188.395)U/L和66.265(39.751,108.890)U/L,均显著高于正常对照组中位数30.920(16.055,56.995)U/L,差异有统计学意义(P<0.05)。胃肠癌患者CST4的ROC曲线下面积(AUC)(分别为0.755、0.754)、胃肠癌早期(一期和二期)CST4的阳性检出率(均为26.9%)和检测灵敏度、特异性、阳性似然比(PLR)、阴性似然比(NLR)、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NNV)等检测指标均优于CEA、CA19-9和CA125。胃肠癌Ⅲ+Ⅳ期患者CST4中位数水平分别为165.653(58.767,334.933)U/L和74.365(41.192,183.306)U/L,均高于胃肠癌Ⅰ期和Ⅱ期患者,胃癌组水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃肠癌组血清CST4水平显著高于正常对照组,早期阳性检出率和诊断性能优于传统肿瘤标志物,并且与肿瘤预后相关,有望成为新的胃肠癌早期肿瘤标志物。

缺血性脑血管病患者血清同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白及白细胞介素-6水平变化临床意义

目的:探讨缺血性脑血管病患者中血清同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白及白细胞介素-6(IL-6)水平变化的临床意义。方法:选取缺血性脑血管病患者82例作为患病组,选取同期健康体检者82例作为健康对照组,其中观察组按照神经缺损程度,可分为轻度神经缺损组(n=23)、中度神经缺损组(n=44)及重度神经缺损组(n=15);观察组按照梗死体积大小,可分为小梗死灶组(n=45)、中梗死灶组(n=19)及大梗死灶组(n=18)。对比健康对照组、观察组血清同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白以及IL-6水平,比较观察组中轻度神经缺损组、中度神经缺损组及重度神经缺损组的血清同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白以及IL-6水平变化。结果:观察组血清同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白以及IL-6水平高于健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);重度神经缺损组血清同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白以及IL-6水平高于中度神经缺损组、轻度神经缺损组及健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);小梗死灶组血清同型半胱氨酸、S100A1蛋白及IL-6水平低于中梗死灶组、大梗死灶组及健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);Pearson分析结果显示,缺血性脑血管病患者发生的神经缺损程度、梗死灶体积大小与同型半胱氨酸、S100A1蛋白及IL-6呈正相关(均P<0.05)。结论:缺血性脑血管病患者同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白以及IL-6水平较健康体检者明显增高,且病情严重程度和神经缺损度、梗死体积大小存在正相关关系。

中国小麦花叶病毒富含半胱氨酸蛋白多克隆抗体的制备与应用

中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是小麦花叶病的重要病原体之一,长期威胁小麦的产量和品质;CWMV富含半胱氨酸蛋白(cysteine-rich protein,CRP)在病毒侵染过程中具有重要而复杂的功能。为了深入研究CRP的功能和CWMV侵染机制,本研究采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)从CWMV侵染的小麦叶片中获得CRP基因编码区,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,并将重组质粒pET-CRP转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;通过镍柱亲和层析法纯化CRP重组蛋白,并用作抗原免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体。蛋白质印迹法、间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和斑点ELISA分析结果显示:纯化的CRP抗体不仅具有高度的特异性,而且效价高达1∶4096000,是未纯化抗体效价的4倍;该抗体能识别0.5 ng抗原,显示出较高的灵敏度;在1∶120000稀释条件下,该抗体能特异且灵敏地识别天然CRP。综上所述,本研究所制备的CRP抗体不但可用于田间CWMV病株样品的精准诊断,还可用于植物体内瞬时表达CRP的检测分析,为后续CRP检测、定量分析及其亚细胞定位等研究提供了依据。

微RNA-103a-3p靶向调节Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白表达对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨胃癌细胞中微RNA(miR)-103a-3p与Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达的关系及其对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法将对数生长期人胃癌细胞系MKN-45细胞随机分为阴性对照(NC)组、miR-103a-3p组、RECK组、miR-103a-3p+RECK组。NC组细胞共转染miR-103a-3p-NC(miR-NC)和pCDH空表达载体,miR-103a-3p组细胞共转染miR-103a-3p模拟物(miR-103a-3p mimics)和pCDH空表达载体,RECK组细胞共转染miR-NC和含RECK的pCDH表达载体(pCDH-RECK),miR-103a-3p+RECK组细胞共转染miR-103a-3p mimic和pCDH-RECK。采用划痕试验检测各组细胞的迁移能力,采用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力,采用Western blot法检测各组细胞中RECK蛋白相对表达量。应用Starbase数据库通过生物信息分析预测miR-103a-3p与RECK的3′非翻译区(3′-UTR)是否存在结合位点,构建含有预测结合位点的野生型(Wt)、突变型(Mt)RECK 3′-UTR片段的荧光素酶报告基因载体Wt-RECK和Mt-RECK,使用脂质体2000将Wt-RECK或Mt-RECK载体与miR-NC或miR-103a-3p mimics共转染入MKN-45细胞,将转染后的细胞设为miR-NC+Wt-RECK组、miR-103a-3p+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组,使用双荧光素酶检测试剂盒检测4组细胞的相对荧光素酶活性。结果4组细胞的划痕愈合率、侵袭细胞数比较差异有统计学意义(F=16.044、60.975,P<0.05);RECK组细胞划痕愈合率显著低于NC组,miR-103a-3p组细胞划痕愈合率显著高于RECK组,miR-103a-3p+RECK组细胞划痕愈合率显著低于miR-103a-3p组(P<0.05);miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组与NC组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05);RECK组与miR-103a-3p+RECK组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05)。RECK组侵袭细胞数显著少于NC组,miR-103a-3p组侵袭细胞数显著多于NC组(P<0.05);miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数显著多于RECK组(P<0.05);miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数显著少于miR-103a-3p组(P<0.05);NC组与miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。4组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=33.473,P<0.05);RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量显著高于NC组,miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量显著低于RECK组(P<0.05);NC组与miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-103a-3p组与miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。Starbase数据库预测显示,miR-103a-3p与RECK的3′UTR存在结合位点。miR-NC+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组细胞的相对荧光素酶活性显著高于miR-103a-3p+Wt-RECK组(P<0.05);miR-NC+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组细胞的相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-103a-3p可能通过靶向抑制RECK的表达而促进胃癌细胞的侵袭和迁移。

富含半胱氨酸型酸性糖蛋白在皮肤纤维化疾病中的研究进展

皮肤纤维化疾病的主要病理特征是以胶原蛋白为主的细胞外基质(ECM)在真皮内过量沉积,进而导致皮肤的增厚或瘢痕过度增生。皮肤较为典型的纤维化病变有硬皮病、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩等。研究发现富含半胱氨酸型酸性糖蛋白(SPARC)在多种纤维化病变组织中均存在过表达的情况。SPARC是一种典型的钙结合基质蛋白,能够调节细胞/ECM的相互作用,并影响细胞对生长因子的反应。本文对SPARC在皮肤纤维化疾病中的研究进展进行综述,以期为SPARC作为减轻纤维化的潜在靶点提供依据。

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在心血管疾病中的研究进展

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)为典型的基质细胞蛋白,参与组织发育和修复,通过调节细胞黏附、增殖和生长因子信号转导,以及细胞外基质与细胞的相互作用,在心肌损伤过程发挥重要作用。该文介绍SPARC在高血压、冠状动脉粥样硬化性心脏病、心力衰竭、病毒性心肌炎等心血管疾病中的相关研究进展。

术前血清Ⅳ型胶原和富含半胱氨酸蛋白61水平与腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的关系

目的探讨分析术前血清Ⅳ型胶原(COLⅣ)和富含半胱氨酸蛋白61(Cry61)水平与腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的关系。方法选取2020年2月-2021年2月该院收治的100例行腹腔镜直肠癌根治术的患者,随访至2022年2月28日,根据术后是否复发将患者分为复发组(34例)和未复发组(66例)。比较两组患者基线资料,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测血清COLⅣ和Cry61水平,分析术前血清COLⅣ和Cry61水平与腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的关系。结果两组患者性别、年龄和病程比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而两组患者肿瘤分期、分化程度、淋巴转移、术前血清COLⅣ和Cry61水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤分期(O^R=3.384,95%CI:1.437~7.969)、分化程度(O^R=3.121,95%CI:1.493~6.521)、淋巴转移(O^R=3.476,95%CI:1.274~9.483)、术前血清COLⅣ水平(O^R=3.165,95%CI:1.290~7.765)和Cry61水平(O^R=2.924,95%CI:1.543~5.540)是腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的独立影响因素(O^R>1,P<0.05)。术前血清COLⅣ水平截断值为164.58 ng/mL时,预测腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的受试者操作特征曲线(ROC)的曲线下面积(AUC)为0.75(95%CI:0.678~0.907),此时的敏感度和特异度分别为78.34%和69.52%;术前血清Cry61水平截断值为447.36 ng/L时,预测腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的ROC AUC为0.73(95%CI:0.714~0.912),此时的敏感度和特异度分别为75.63%和68.45%;两者联合检测预测腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的ROC AUC为0.79(95%CI:0.752~0.936),此时的敏感度和特异度分别为82.49%和69.31%。结论术前血清COLⅣ和Cry61水平升高是腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的独立影响因素,术前血清COLⅣ和Cry61水平,对腹腔镜直肠癌根治术后复发,具有较好的预测价值。

巨噬细胞移动抑制因子、伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白及循环肿瘤细胞在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)及外周血循环肿瘤细胞(CTC)在骨肉瘤中的表达及临床意义。方法 将132例骨肉瘤患者设为观察组,另选取同期的129例软骨瘤患者设为对照组。对比两组患者MIF、RECK、CTC阳性表达情况;对观察组患者随访2年,分析不同预后骨肉瘤患者MIF、RECK、CTC阳性表达情况;采用Cox多元回归分析对骨肉瘤患者预后影响因素进行分析。结果 观察组患者MIF、CTC阳性表达率均明显高于对照组,RECK阳性表达率明显低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随访2年,132例骨肉瘤患者中,死亡58例,生存74例。死亡患者MIF、CTC阳性表达率均明显高于生存患者,RECK阳性表达率明显低于生存患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。发生肺部转移、低中分化、MIF阳性、RECK阴性、CTC阳性均为骨肉瘤患者预后死亡的危险因素(P﹤0.05)。结论 MIF、CTC、RECK可用于骨肉瘤患者早期诊断及预后评价中,能作为评估骨肉瘤患者预后的标志物。

血管内皮生长因子对体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞的纤维化及其富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白表达的作用

目的·探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对体外培养的人Tenon's囊成纤维细胞(humanTenon's fibroblast,HTF)的纤维化及其富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)表达的作用。方法·取斜视手术患者的Tenon's囊组织进行培养,并采用免疫荧光技术对获得的HTF进行鉴定。采用不同浓度的VEGF刺激培养HTF,并依据刺激条件将HTF分为4组,即0 ng/mL组、25 ng/mL组、50 ng/mL组和100 ng/mL组。采用蛋白质印迹和实时定量PCR分析SPARC、Ⅰ型胶原蛋白(collagen-Ⅰ)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein 9,MMP-9)的表达以及胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路磷酸化活性的改变。采用细胞活力测定实验(MTS法)和划痕实验检测HTF的增殖和迁移能力。结果·通过免疫荧光技术及倒置相差显微观察可以鉴定,所培养的原代细胞为HTF。在VEGF刺激作用下,与0 ng/mL组相比,其他3组HTF中的SPARC、collagen-Ⅰ和MMP-9蛋白及其mRNA表达均有所增加,HTF中ERK通路的磷酸化活性均有所上调,HTF细胞的增殖及迁移能力亦均有所增加,且在50 ng/mL组中影响最大。结论·VEGF在促进HTF纤维化的过程中伴随着细胞基质蛋白SPARC的上调,提示SPARC可能是这一过程的潜在调控位点。

家蚕富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白基因BmSPARC的表达及亚细胞定位

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)是一种小分子酸性糖蛋白,在有机体内广泛分布,通过与胞外基质蛋白相互作用而表现出多种生物活性。从家蚕蛹cDNA文库中获得SPARC基因(BmSPARC)的cDNA序列,GenBank登录号为FJ602783。利用生物信息学方法对此序列进行分析表明,BmSPARC的cDNA序列全长1 626 bp,含有1个954 bp的开放阅读框(ORF),编码317个氨基酸残基;同源性比较显示该基因编码蛋白的氨基酸序列在无脊椎动物中具有较高的保守性。将BmSPARC片段在大肠杆菌BL21中表达并纯化后,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,通过亚细胞定位研究发现该基因表达蛋白主要存在于细胞质中。利用实时荧光定量PCR的方法,对BmSPARC在家蚕不同发育时期、不同组织中的mRNA转录水平进行比较,并采用Western blotting方法对BmSPARC蛋白的表达进行分析,结果表明:BmSPARC在家蚕卵期和5龄幼虫丝腺组织中无表达,而在5龄幼虫、蛹、蛾发育时期及5龄幼虫的头部、脂肪体、中肠、马氏管、卵巢、表皮和气门等7个组织中均有不同程度的表达,其中在蛾期和5龄幼虫卵巢中的表达量较高。研究结果为进一步探讨BmSPARC在家蚕生长发育过程中的生物学功能打下了基础。

综合疗法对强直性脊柱炎伴骨质疏松患者血清富含半胱氨酸的酸性蛋白酶的影响

目的观察综合疗法对强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)伴骨质疏松患者血清富含半胱氨酸的酸性蛋白酶(serum secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)水平的影响,探讨SPARC在AS伴骨质疏松发生过程中可能的作用机制。方法 48例AS伴骨质疏松患者(AS组)采用推拿、静脉滴注鹿瓜多肽注射液及口服补肾祛寒治尪汤治疗3个月,并以健康人45名为健康对照组(对照组);采用酶联免疫吸附法测定AS组治疗前后及对照组的血清SPARC水平,股骨颈骨密度(bone mineral density of femoral neck,FN BMD)、腰2-腰4骨密度(bone mineral density of 2-4 lumbar spine,L2-4BMD)、骨碱性磷酸酶(bone specific alkaline phosphatase,BSAP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平。同时检测AS组治疗前后Bath AS疾病活动指数(Bath AS disease activity index,BASDAI)及Bath AS功能指数(Bath AS functional index,BASFI),并分析上述指标与血清SPARC水平间的相互关系。结果 AS组血清SPARC水平明显低于对照组(μg/L,175.30±72.04vs190.52±86.13,P<0.01)。AS组血清SPARC水平与TNF-α呈负相关(r=-0.261,P<0.01),与L2-4BMD、TGF-β1、BSAP呈正相关(r=0.437,0.256,0.385,P<0.05,P<0.01);L2-4BMD和BSAP是影响AS组血清SPARC水平的独立相关因素。AS组经综合治疗后TNF-α、BAS-DAI、BASFI明显降低,TGF-β1、BSAP、L2-4BMD和FNBMD明显升高(P<0.05,P<0.01),血清SPARC水平也显著升高[(188.32±87.50)μg/L,P<0.05]。结论综合疗法能有效改善AS伴骨质疏松患者骨代谢水平、临床症状和关节活动功能,同时升高其血清SPARC水平。

富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白在IgA肾病患者血、尿中的含量及肾组织中的表达

目的:测定富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白(SPARC)在IgA肾病患者血液、尿液中的浓度,并观察其在肾组织中的分布和表达。方法:采用夹心ELISA法对IgA肾病患者和正常人血清和尿液中SPARC、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)进行定量检测;应用夹心ELISA法检测IL-6处理后的人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞(HKC)SPARC蛋白的分泌水平;运用免疫组织化学SP法检测SPARC在IgA肾病患者及正常人肾组织中的表达及分布。结果:IgA肾病患者血液及尿液SPARC、TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均显著高于正常对照组(P<0.01或P<0.05);IgA肾病患者尿液SPARC浓度显著高于血液浓度(P<0.01)。IL-6(50 pg/ml)分别作用HMC、HKC 96 h后,SPARC蛋白的表达量明显高于对照组(P<0.01),而且HKC组SPARC蛋白的表达量明显高于HMC组(P<0.01)。在正常肾组织中,SPARC在远端小管细胞仅有极微弱表达,在IgA肾病肾组织小管上皮细胞中SPARC蛋白表达较正常肾组织肾小管细胞明显增强。结论:IgA肾病时,增多的炎症因子可刺激肾小管细胞产生和分泌SPARC蛋白增加,引起血清SPARC浓度升高,可能起到一种保护性反馈抑制系膜细胞增殖的作用。

富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白2.1肽段对体外培养人系膜细胞超微结构及其分泌细胞外基质的影响

目的:观察富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白(SPARC)2.1肽段对体外培养人肾小球系膜细胞(HMC)超微结构及其分泌细胞外基质的影响。方法:50μg/mlSPARC2.1肽段作用48h、96h后,倒置显微镜下观察HMC形态变化,透射电镜观察其超微结构,以正常培养的HMC作空白对照组。荧光定量RT-PCR法检测空白对照组和50μg/mlSPARC2.1肽段作用96h后HMC分泌细胞外基质[Ⅰ型和Ⅳ型胶原(ColⅠ、ColⅣ)、层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)]相关基因mRNA表达的变化;ELISA法比较两组HMC培养上清中细胞外基质(ColⅠ、ColⅣ、LN、FN)的蛋白含量。结果:空白对照组HMC无明显变化;50μg/mlSPARC2.1肽段作用48h电镜可见少数HMC发生凋亡早期改变;96h可见较多细胞发生典型凋亡改变,电镜下可见典型的凋亡小体。与空白对照组相比,SPARC2.1肽段作用96h后,HMC的ColⅠ、ColⅣ、FNmRNA和蛋白含量显著下调(P<0.01,P<0.05),LNmRNA及其蛋白含量无明显变化。结论:SPARC2.1肽段可在体外诱导HMC细胞的凋亡,超微结构可见典型凋亡小体,并抑制其分泌细胞外基质。

富含半胱氨酸蛋白61在球囊损伤大鼠腹主动脉中的表达变化

目的观察大鼠腹主动脉球囊损伤后富含半胱氨酸蛋白61表达的变化。方法对球囊损伤后不同时间段的大鼠腹主动脉标本采用组织形态学观察内膜增生,采用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应、免疫蛋白印记分析检测富含半胱氨酸蛋白61的表达。结果球囊损伤后可见新生内膜在术后7天出现,术后14天明显增厚,术后28天内膜继续增生,形成的新生内膜厚度不均,较假手术组明显增厚(P<0.01)。球囊损伤后7天、14天采用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应、蛋白印记分析检测富含半胱氨酸蛋白61的表达均明显增强,与假手术组比较差异有显著性(P<0.01)。28天时与假手术组比较差异没有显著性(P>0.05)。结论球囊损伤后富含半胱氨酸蛋白61的表达明显增强,提示富含半胱氨酸蛋白61可能在球囊损伤后内膜增生过程中起重要作用。

蛋白C、蛋白S、C反应蛋白、同型半胱氨酸在脑卒中病情及预后评估中的作用

目的探讨蛋白C、蛋白S、C反应蛋白（CRP）、同型半胱氨酸（Hey）在脑卒中病情及预后评估中的作用。方法将2013年7月至2014年4月保定市第五医院收治的脑卒中患者140例分为缺血性卒中纽（68例）和出血性脑卒中组（72侧），另选择同期在医院体检的健康人群60例作为对照组；140例脑卒中患者随访6-12个月，按照神经功能缺损程度分为轻度组（31例）、中度组（64例）和重度组（45例）。检测各组受试对象蛋白c、蛋白S、CRP、Hey、纤维蛋白原、总胆固醇、三酰甘油水平，并计算神经功能缺损程度与蛋白C、蛋白S、CRP、Hey的相关性。结果缺血性卒中组、出血性脑卒中组CRP、Hey显著高于对照组[（23．8±3．1）mg／L，（24．1±3．6）mg／L比（5．7±0．5）mg／L；（39±4）μmol／L，（40±5）μmol／L比（28±3）μmol／L]（P〈0．05），缺血性卒中组、出血性脑卒中组间ClIP、Hey比较差异无统计学意义（P〉0．05）。重度组、中度组CRP、Hey水平显著高于轻度组[（47．3±5．8），（28．7±3．4）mg／L比（17．9±2．5）mg／L；（45±6），（41±5）μmol／L比（30±4）μmol／L]（P〈0．05），重度组CRP、Hey水平显著高于中度组（P〈0．05）。相关性分析显示，CRP、Hey与神经功能缺损程度呈显著正相关（r=0．636，0．538，P〈0．05），蛋白C、蛋白S与神经功能缺损无明显相关性（r=0．057，0．085，P〉0．05）。结论CRP、Hey与脑卒中的发病密切相关，CRP、Hey检测能够作为评估脑卒中预后的指标之一。