阴道卷曲乳杆菌S层蛋白多样性研究

目的:分析比较西安市女性阴道卷曲乳杆菌S层蛋白的多样性及NCBI数据库中阴道来源卷曲乳杆菌S层蛋白的多样性。方法:选取100例妇科患者的阴道分泌物标本作为研究对象,从其中10例标本中分离得到480株卷曲乳杆菌,其中两株卷曲乳杆菌S层蛋白有明显差异,对其进行全基因组测序;并从NCBI数据库中下载人阴道源的卷曲乳杆菌全基因组数据,分析并比较西安市来源与数据库来源的卷曲乳杆菌S层蛋白的多样性。结果:S层蛋白注释基因具有菌株内和菌株间的多样性,同一套基因组中有多个S层蛋白注释基因,菌株间的相似性偏差较大,通过系统发育分析发现,中国人阴道卷曲乳杆菌的S层蛋白基因与其他人种的具有系统发育相似性。结论:阴道卷曲乳杆菌S层蛋白具有菌种间和菌株间多样性的特征,不同人种的卷曲乳杆菌具有相似性。

嗜水气单胞菌细胞外膜蛋白及S层蛋白分析

用十二烷酰肌氨酸盐抽提结合超速离心纯化,制备了19株典型嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和1株温和气单胞菌(A.sobria)的主要外膜蛋白(MOMP)。根据SDS-PAGE图谱,将其中的14株菌分为3个MOMP组,Ⅰ组的主要蛋白带为40 kD和43 kD,Ⅱ组的主要蛋白带为40 kD和50 kD,Ⅲ组的主要蛋白带为40 kD、46 kD和50kD。MOMP组和血清型间没有严格的关系。用兔抗嗜水气单胞菌体抗原为第一抗体进行免疫印迹实验,结果显示,所有被试菌株都能产生强阳性反应,其中40 kD的蛋白带为大多数菌株所共有,且具有相似的免疫原性,是构成菌体抗原的重要免疫原。用0.2 mol/L甘氨酸缓冲液(pH 4.0)处理上述菌株培养物,结果仅有嗜水气单胞菌ZY01-g3能够分离到丰富的S层样蛋白,其分子量约为52 kD,而其他菌株未能分离到典型的S层样蛋白,表明S层蛋白的分布有限。

细菌S层研究进展

本文概述了细菌S层的结构、化学组成、抗原性、合成与组装,以及它作为细菌的保护性屏障、分子筛与离子通道及毒力因子的作用。

嗜水气单胞菌S层缺失突变株的构建

将含有转座子Tn5的自杀性质粒pZJ25,用滤膜接合法从大肠杆菌S 17株中转移到有S层的嗜水气单胞菌J-1株。通过卡那霉素抗性筛选出嗜水气单胞菌Tn 5转移接合体。用嗜水气单胞菌TF 7株S蛋白抗体作点印迹免疫酶分析,从转移接合体中检测到一株S蛋白阴性的菌株,命名为TM 6。经检测TM 6的生理生化特性与J-1株基本相同,也能产生HEC毒素和蛋白酶,但超薄切片中未见S层结构。用菌体的酸性甘氨酸抽提物作SDS-PAGE,缺少S蛋白相应条带。用J-1株S蛋白抗血清作免疫转印,亦为阴性结果。表明TM 6是一株S层缺失突变的嗜水气单胞菌。

嗜酸乳杆菌S层蛋白抗IBV感染鸡肠上皮细胞作用初探

为了评价S层蛋白在嗜酸乳杆菌抗病毒作用中参与抗病毒的程度,本试验进行了嗜酸乳杆菌不同成分抗IBV感染IEC作用研究,设计了预防试验、治疗试验、混合感作试验。结果显示,S层蛋白对病毒抑制性最强,菌体其次,脱S层蛋白菌体次之,代谢产物抑制病毒率最低。为了进一步研究S层蛋白与病毒之间的作用关系,用间接ELISA方法检测病毒与S层蛋白的粘附性,评价了牛血清白蛋白有无病毒抑制性,方法同S层蛋白的病毒抑制试验。表明S层蛋白与白蛋白都能粘附IBV,但是只有S蛋白对病毒具有显著的抑制性,白蛋白抑制病毒性质并不明显。

嗜酸乳杆菌S层蛋白抗NDV感染鸡肠上皮细胞作用初探

为了评价S层蛋白在嗜酸乳杆菌抗病毒作用中参与抗病毒的程度,本试验进行了嗜酸乳杆菌不同成分抗NDV感染IEC(Primary intestinal epithelial cells of chick embryo鸡胚肠上皮原代细胞)作用研究,设计3组试验:1预防试验、2治疗试验、3混合感作试验。结果显示,S层蛋白对病毒抑制性最强,菌体其次,脱S层蛋白菌体次之,代谢产物抑制病毒率最低。为了进一步研究S层蛋白与病毒之间的作用关系,用间接ELISA方法检测病毒与S层蛋白的粘附性,评价了牛血清白蛋白有无病毒抑制性,方法同S层蛋白的病毒抑制试验。试验结果显示,S层蛋白与白蛋白都能粘附NDV,但是只有S蛋白对病毒具有显著的抑制性,白蛋白抑制病毒性质并不明显。

重组嗜酸乳杆菌S层蛋白拮抗H_9N_2禽流感病毒对树突状细胞侵袭的研究

[目的]乳酸杆菌S层蛋白可结合树突状细胞特异性细胞间黏附分子3捕获的非整合蛋白(DC-SIGN)受体调节树突状细胞的成熟和分化,禽流感病毒同样可以通过与DC-SIGN的结合促进病毒在人源树突状细胞内的复制。为了探究S层蛋白是否竞争性与DC-SIGN结合,进而拮抗禽流感病毒侵袭树突状细胞,本试验构建表达嗜酸乳杆菌ATCC4356 S层蛋白的重组大肠杆菌,并探究重组S层蛋白抑制H9N2禽流感病毒侵袭树突状细胞的影响。[方法]以嗜酸乳杆菌ATCC4356的基因组为模板扩增S层蛋白基因并携带GST标签,构建重组质粒p GEX-4t-2-S并转化E.coli Rosetta-gami2(DE3),18℃低温诱导重组S层蛋白的表达,提取S层蛋白后经亲和层析进一步纯化;用纯化的重组S层蛋白提前作用于小鼠和鸡骨髓源树突状细胞,随后感染H9N2禽流感病毒,检测S层蛋白对禽流感病毒感染的拮抗作用。[结果]电泳结果显示成功扩增出1 295 bp的带有同源臂的嗜酸乳杆菌ATCC4356 S层蛋白基因;酶切得到2条带,分别为载体骨架4 951 bp,目的基因1 263 bp,表示成功构建p GEX-4t-2-S质粒,并且测序结果正确;电泳结果显示转化子中带有S层蛋白的基因,表明构建的质粒成功转入到DE3中并成功表达;电泳结果显示在相对分子质量70×103处有1条带,灰度分析表明亲和层析纯化后得到了纯度为95%的重组S层蛋白,产量为每1011CFU大肠杆菌11.9 mg;流式细胞检测结果证明S层蛋白能够使入侵小鼠和鸡树突状细胞中的H9N2病毒量减少25%~30%,实时荧光定量PCR结果表明HA、NA、NP和PB1基因的相对表达水平均达20%以上。[结论]重组大肠杆菌Rosetta-gami2(DE3)表达的S层蛋白能够有效地拮抗H9N2亚型禽流感病毒对小鼠和鸡树突状细胞的侵袭,为预防禽流感疫病提供新思路。

嗜酸性乳杆菌MG株S层蛋白的高级结构预测分析及原核表达

以嗜酸性乳杆菌MG株slp基因(表达S层蛋白的基因)为材料,应用Genetyx软件推导出其正确的开放阅读框(ORF),并用CPHmodels,Swiss-Model和Swiss-PdbViewer生物软件预测SLP蛋白质的高级结构;此外,构建slp基因的原核表达载体pGEX-slp,经IPTG诱导后,成功表达出重组S层蛋白(S-layer protein,SLP),并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果表明,使用3种不同的软件预测SLP蛋白质的高级结构,预测结果具有很高的相似性,其中α螺旋占3.33%,线性结构占45%,无规则卷曲占51.67%,平均亲水值为-0.262,亲水氨基酸比例为59.1%;表达载体pGEX-slp在E.coli BL21中经IPTG诱导成功表达出重组SLP蛋白,其GST融合蛋白的大小约为70ku。本研究结果为进一步以SLP为材料的生物制品的制备和应用开发奠定了基础。

炭疽杆菌S层的研究进展

S层是广泛存在于古细菌和真细菌细胞壁最外层的结构独特、功能特殊的成分,对它的研究具有重要的意义。炭疽杆菌是引起人畜炭疽病的病原体,对其S层的研究将为深入认识该菌的生理特性及致病机制等提供坚实的基础。就近年来对炭疽杆菌S层的结构、功能特点及应用前景等方面的研究进展做一简要的综述。

背景噪声频率-贝塞尔变换法研究厦门岛浅层S波速度结构

为获取厦门岛浅层三维速度结构,本文使用福建省地震局于2019年布设的50个流动地震台站组成的密集台阵所记录到的垂向分量波形数据,计算背景噪声互相关,利用频率-贝塞尔变换(F-J)法提取子台阵的瑞利波相速度频散曲线进行反演,获取子台阵下方一维S波速度结构,并通过插值得到厦门岛4 km以内的三维S波速度模型.结果表明,整体上厦门岛S波速度随深度增加呈现递增趋势,在近地表处的横向不均匀性显著.0~1 km深度的S波速度大体上呈现“北高南低”的特征,与岩性分布有较好的对应关系.随着深度的递增,高低速特征分布逐渐呈现为连续性较好,近北东向展布的条带状.结合前人研究结果,本文推测这一现象与厦门岛岩层在不同时期受到挤压和拉张作用形成的褶皱和断裂相关,反映了厦门岛所经历的多次构造变动和岩浆侵入事件.垂向剖面的速度差明显区与研究区断裂带位置具有一定的对应关系.研究结果可为厦门岛的构造演化研究和地质灾害评估提供新的科学依据.

集中式三层B/S架构的企业市场营销信息系统设计

针对传统企业的人工营销信息管理的方式效率低下,操作过程中出错率较高,营销信息更新滞后,信息管理较为混乱的问题,建立企业市场营销信息系统。系统采用集中式三层B/S体系结构进行设计,主要包括用户接口层、功能层和数据库。为使系统具备数据挖掘的能力,对数据的预处理过程、聚类算法提取客户群体的特性以及Apriori关联规则算法挖掘潜在规则进行设计。为验证系统的性能,对其进行聚类和数据挖掘功能测试。试验结果表明该系统可以完成对客户的聚类,并挖掘出客户的购买习惯。

基于ASP.NET的在线音乐网站设计

拥有独立服务器的音乐网站,由于网络广告、版权等问题,增加了用户的开支成本。研究一种免费、方便使用的音乐分享网站显得十分必要。本文基于一种脚本语言(active server page.NET,ASP.NET)技术设计了在线音乐网站。首先分析了所用的关键技术和功能需求,其次完成了数据库的设计,最后实现了注册登录功能、界面设计、播放音乐、后台管理模块、测试模块等设计。经测试,该音乐分享网站设计基本达到了预期的目标。

S层介导嗜水气单胞菌粘附HEp-2细胞

用ＨＥｐ－２细胞作为体外模型，比较嗜水气单胞菌Ｓ层缺失突变株ＴＭ６及其亲本菌株Ｊ－１的粘附力，结果表明Ｊ－１株对ＨＥｐ－２细胞的粘附力明显高于ＴＭ６株。用Ｊ－１株Ｓ层蛋白抗体ＰＲ的Ｆａｂ片段预先与细菌反应，可使Ｊ－１株的粘附菌数下降，且呈剂量依赖关系，但对ＴＭ６株的粘附菌数无影响。用纯化的Ｊ－１株Ｓ层蛋白预先与ＨＥｐ－２细胞作用，亦能抑制Ｊ－１株对ＨＥｐ－２细胞的粘附，对ＴＭ６株也无影响。同时，将ＨＥｐ－２细胞与纯化的Ｊ－１株Ｓ层蛋白混合并孵育，用嗜水气单胞菌ＴＦ７株Ｓ层蛋白抗体ＰＦ１作免疫酶分析，结果表明Ｓ层蛋白可结合在ＨＥｐ－２细胞上。综上可见，Ｓ层是嗜水气单胞菌的一种粘附素。可介导嗜水气单胞菌粘附ＨＥｐ－２细胞。

一种基于S-层蛋白基因检测炭疽芽胞杆菌PCR方法的研究与建立

在国内外的炭疽芽胞杆菌检测方法中,针对炭疽芽胞杆菌基因的检测方法,其特异性以及临床的实用性方面难以令人满意,特别是针对炭疽疫情在临床诊断及鉴别诊断方面还有欠缺。本文针对炭疽芽胞杆菌的S层蛋白建立一种PCR检测方法,并初步应用于我省的疫情临床诊断。结果表明,所建立的PCR方法,能检测到100 pg/μL级,对其他芽胞杆菌无交叉反应,检测特异性和敏感性强。该方法适合于现场疫情的快速诊断。

球形芽胞杆菌S层蛋白基因的克隆及原核表达

目的克隆球形芽胞杆菌S层蛋白的编码基因,实现其原核表达并纯化表达产物。方法提取球形芽胞杆菌菌体基因组DNA,根据GenBank公布的核酸序列设计并合成引物,扩增S层蛋白编码基因sllB,与pMD19-T载体连接;测序验证后,构建原核表达质粒pET28a(+)-sllB并转化BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAG和Westernblot鉴定表达产物,亲和柱层析纯化重组蛋白。结果扩增获得S层蛋白编码基因sllB全长(3 306bp),与参考序列同源性为97.5%。构建的原核表达质粒pET28a(+)-sllB转化BL21(DE3)后,SDS-PAGE显示表达蛋白的分子质量为116ku,与理论值相符。Western blot显示其全蛋白、可溶性蛋白和不溶性蛋白中均被鼠抗Penta-His抗体识别。结论获得了球形芽胞杆菌S层蛋白编码基因sllB,并实现了其原核表达。

纳米压痕技术测量管胞次生壁S_2层的纵向弹性模量和硬度

重点研究和详细介绍了利用纳米压痕技术测试管胞次生壁S2 层纵向弹性模量以及硬度的实验技术 ,并测试了人工林杉木早晚材管胞S2 层的纵向弹性模量和硬度。结果表明 :杉木晚材管胞S2 层的平均纵向硬度为0 390GPa ,弹性模量的平均值为 1 4 84 4GPa ;早材管胞S2 层的硬度和模量则小于晚材 ,平均值分别为 0 30 6GPa和9 82 3GPa。

基于B/S 3层体系结构的软件设计方法研究

运用B/S 3层体系结构开发出符合企业要求的新一代管理系统,成为当前迫切解决的问题。阐明了B/S 3层结构在开发应用程序时的优越性。首先说明使用B/S结构开发软件系统的意义,然后论述基于B/S 3层结构通用的软件设计方法,每1层实现的功能,并阐述其优点。

苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S-层蛋白可以形成伴胞晶体

苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)CTC菌株产生卵圆形伴胞晶体 ,晶体蛋白分子量为 1 0 0kD ;透射电子显微镜观察结果表明该菌株有S 层结构 ,而且在母细胞内可以形成伴胞晶体和S 层的初体结构 ;其蛋白基因导入苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB1 71后 ,扫描电子显微镜观察结果表明转化子能形成晶体 ,而其形状与CTC菌株的相同 ;转化子晶体蛋白的分子量大小也与CTC菌株的相同 ,为 1 0 0kD。以上实验结果结合以前晶体蛋白N 末端测序和基因核苷酸序列 ,表明苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S

基于B/S多层结构的个性化网络教学系统设计

针对现有网络教学系统支持个性化学习的不足,提出了5个方面的个性化策略,并给出了一种个性化的网络教学系统设计。该设计采用基于B/S(Browser/Server)的多层体系结构,其中服务层分为应用服务层和公共服务层。公共服务层的引入提高了系统的可重用性和可扩展性;系统提供个性化信息过滤,具有明显的智能性个性化特点。软件实现采用Struts+Spring+Hibernate技术架构。系统已在近20所中小学校示范应用,效果良好。

基于三层B/S结构的水电站中长期优化调度系统

介绍了一种运用Internet技术和数据库技术,采用数据库、服务器、浏览器3层B/S结构模式的水电站中长期优化调度系统。论述了该系统的开发目标、结构功能、关键技术和标准化设计,提出了本系统设计中遇到的关键问题及其解决途径和方法。采用Web Service技术和ASP.NET开发工具,开发出了先进、实用、可靠、界面友好和移植性强的应用软件,并在多个水电站运行,应用情况令人满意。