特异AT序列结合蛋白2、基质金属蛋白酶-10在结直肠癌组织中的表达及其与病理分期、生存期的相关性

目的:分析特异AT序列结合蛋白2(SATB2)、基质金属蛋白酶-10(MMP-10)在结直肠癌组织中的表达及其与病理分期、生存期的相关性。方法:选取53例胃癌患者为研究对象,手术获取肿瘤组织和癌旁组织标本,采用免疫组化法检测SATB2、MMP-10在标本中的表达水平,并其表达与病理特征、生存期的相关性。结果:结直肠癌组织中SATB2阳性表达率为60.38%低于癌旁组织的79.25%、MMP-10的阳性表达率为54.72%高于癌旁组织的18.87%(P<0.05);SATB2、MMP-10在不同肿瘤大小、不同肿瘤分化程度、淋巴结转移有无、不同TNM分期中的阳性表达率存在统计学差异(均P<0.05);经多因素Logistic回归分析显示,肿瘤大小、肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期均为SATB2、MMP-10表达的影响因素(均P<0.05);SATB2阳性表达患者累积生存率高于SATB2阴性表达患者,MMP-10阳性表达患者累积生存率低于MMP-10阴性表达患者(均P<0.05)。结论:结直肠癌组织中的SATB2阳性表达率低、MMP-10阳性表达率较高,且上述因子表达与患者病理特征存在明显关联,同时SATB2阴性表达、MMP-10阳性表达代表患者预后较差。

肺癌患者GASP-1、LCN2和TPX2的表达水平及其与TNM分期和预后的相关性分析

目的探究肺癌患者血清G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GASP-1)、脂质运载蛋白-2(LCN2)、Xklp2靶蛋白(TPX2)表达水平及其与TNM分期和预后的相关性。方法选取2019年4月至2022年5月在南部战区总医院接受诊疗的92例肺癌患者作为观察组,同期选取92例健康体检者作为对照组。采集所有研究对象的外周静脉血样,检测血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平。将观察组按预后情况分为预后良好组和预后不佳组,比较2组患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平。分析肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平与TNM分期和预后的相关性。结果观察组血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平高于对照组(P<0.05);观察组TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期的肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平高于TNM分期为Ⅰ、Ⅱ期的肺癌患者(P<0.05),TNM分期为Ⅳ期的患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平均高于TNM分期为Ⅲ期的患者(P<0.05)。预后良好组血清GASP-1、LCN2、TPX2水平均低于预后不佳组(P<0.05);观察组治疗前血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平均与TNM分期呈正相关(P<0.05),治疗后血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平均与预后呈负相关(P<0.05)。结论血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平与肺癌患者的TNM分期相关,在对症治疗后检测上述血清指标,可在一定程度上反映患者预后情况,为临床提供参考。

间充质干细胞外泌体调节哺乳动物雷帕霉素靶点/p70核糖体蛋白S6激酶/盘卷肌球蛋白样Bcl-2-相互作用蛋白通路改善糖尿病肾病大鼠肾损伤的机制研究

目的探讨间充质干细胞外泌体(MSC-EVs)通过调节哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(S6K1)/盘卷肌球蛋白样Bcl-2-相互作用蛋白(Beclin 1)通路改善糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤的机制。方法采用高脂饮食联合腹腔链脲佐菌素(STZ)注射的方法建立SD大鼠DN模型,随机分为模型组、MSC-EVs组、MSC-EVs+MHY1485(mTOR激活剂)组,每组12只。另取12只SD大鼠以正常饲料喂养6周后,腹腔注射同等剂量柠檬酸钠溶液作为对照。以MSC-EVs和MHY1485分组处理后,检测大鼠血糖及肾功能指标[血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、尿微量白蛋白(UmALB)]水平。采用苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠肾组织病理形态;采用免疫组化检测各组大鼠肾组织mTOR/S6K1/Beclin 1通路相关蛋白表达;采用蛋白免疫印迹法检测各组大鼠肾组织mTOR/S6K1/Beclin 1通路及自噬相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肾组织形态发生损伤,血糖、BUN、Scr、UmALB、p-mTOR及p-S6K1相对阳性表达、p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1显著升高(P<0.05),微管相关蛋白1A/1B轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1蛋白表达、Beclin 1相对阳性表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,MSC-EVs组大鼠肾组织形态损伤减轻,血糖、BUN、Scr、UmALB、p-mTOR及p-S6K1相对阳性表达、p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1显著降低(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1蛋白表达、Beclin 1相对阳性表达显著升高(P<0.05);与MSC-EVs组相比,MSC-EVs+MHY1485组大鼠肾组织形态损伤加重,血糖、BUN、Scr、UmALB、p-mTOR及p-S6K1相对阳性表达、p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1显著升高(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1蛋白表达、Beclin 1相对阳性表达显著降低(P<0.05)。结论MSC-EVs可增强自噬,降低DN大鼠血糖、SCr、BUN和尿蛋白水平,减轻肾组织损伤,其机制可能与抑制mTOR/S6K1/Beclin 1通路激活有关。

中药千金子二萜醇对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白2的影响

目的探讨中药千金子二萜醇对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白(Skp)2表达的影响。方法建立肾癌786-0细胞移植瘤裸鼠模型,分为对照组和实验组,每组8只。对照组移植瘤裸鼠灌胃等体积的生理盐水,实验组移植瘤裸鼠灌胃20 mg/kg千金子二萜醇溶液,21 d后处死裸鼠,取出瘤体,然后采用免疫组化(SP)法检测Skp2的表达。结果两组Skp2在裸鼠的瘤体中表达率差异显著(P=0.04)。结论中药千金子二萜醇对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白2的表达有一定的抑制作用。

血清白细胞介素-33、β2-微球蛋白水平与多发性骨髓瘤患者DS分期的相关性

目的:探讨血清白细胞介素-33(IL-33)、β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)水平与多发性骨髓瘤(MM)患者Durie-Salmon(DS)分期的相关性。方法:选取2019年3月-2021年1月福建医科大学附属第一医院收治的100例MM患者,根据DS分期标准将患者分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期,设计患者基线资料调查表,记录患者的相关基线资料及实验室检查结果,检测所有患者血清IL-33、β_(2)-MG水平,分析血清IL-33、β_(2)-MG水平与MM患者DS分期的相关性。结果:100例MM患者中,DS分期Ⅰ期32例,Ⅱ期39例,Ⅲ期29例。Ⅲ期患者血清CRP、β_(2)-MG水平均明显高于Ⅰ和Ⅱ期,且Ⅱ期患者血清CRP、β_(2)-MG水平均明显高于Ⅰ期(P<0.05);Ⅲ期患者血清IL-33水平明显低于Ⅰ期、Ⅱ期,且Ⅱ期患者血清IL-33水平明显低于Ⅰ期(P<0.05);组间其他资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Kendall′s tau-b相关性分析结果显示,血清CRP、β_(2)-MG水平与MM患者DS分期呈正相关(r=0.534,r=0.776);血清IL-33水平与MM患者DS分期呈负相关(r=-0.759)。有序Logistic回归分析及森林图结果显示,血清IL-33水平过低、β_(2)-MG水平过高是MM患者高DS分期的影响因子(P<0.05)。结论:MM患者DS分期与血清IL-33、β_(2)-MG水平密切相关,即血清IL-33水平过低、β_(2)-MG水平过高的MM患者DS分期较高。

Jun活化结构域结合蛋白-1和S期激酶相关蛋白-2在病理性瘢痕组织中的表达及意义

目的研究Jun活化结构域结合蛋白-1（Jun activation domain binding protein-1,JAB-1）和S期激酶相关蛋白-2（S-phase kinase-associated protein-2,SKP-2）在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕组织中的表达及其与肿瘤抑制因子P27^kip1之间的相互关系,探讨它们在病理性瘢痕形成中的作用及机制。方法应用免疫组织化学链霉亲和素-过氧化物酶（SP）染色法结合计算机病理图像分析,检测瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤组织中的JAB-1、SKP-2及肿瘤抑制因子P27^kip1蛋白的表达水平,并进行统计学分析。结果瘢痕疙瘩、增生性瘢痕中JAB-1和SKP-2的表达均较正常皮肤高,而P27^kip1的表达则较正常皮肤低;瘢痕疙瘩与增生性瘢痕之间的各表达指标间比较无明显差异。病理性瘢痕组织中JAB-1和SKP-2的表达均与P27^kip1蛋白表达呈负相关性（分别为r=-0.630,P〈0.01和r=-0.538,P〈0.01）。结论JAB-1和SKP-2在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕组织中的表达异常增高,促使细胞周期负性调控因子P27^kip1蛋白的降解,从而影响创伤的愈合过程,在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕形成中起重要作用。

过表达人细胞S期激酶相关蛋白2(Skp2)促进MCF-7乳腺癌细胞生长及S期细胞增加

目的构建带FLAG标签的细胞S期激酶相关蛋白2(Skp2)基因真核表达载体pc DNA3-FLAG-Skp2并检测其对MCF-7乳腺癌细胞生长及细胞周期的影响。方法采用反转录PCR从MDA-MB-231乳腺癌细胞中扩增Skp2基因,构建重组真核表达载体pc DNA3-FLAG-Skp2。酶切及测序鉴定重组质粒正确后,脂质体介导转染至MCF-7乳腺癌细胞中。采用Western blot法检测FLAG-Skp2的表达,Alamar blue比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞周期。结果 PCR扩增片段与预期片段大小相符,测序结果与Gen Bank结果一致。Western blot结果显示质粒转染48 h后,细胞成功表达融合蛋白FLAG-Skp2。过表达Skp2的MCF-7乳腺癌细胞较对照组生长速度明显加快,S期细胞显著增多。结论成功构建人Skp2真核表达载体pc DNA3-FLAG-Skp2。过表达Skp2的MCF-7细胞生长加快,S期细胞增多。

1,25-二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖与S期激酶相关蛋白及抑癌基因p27表达的影响

目的 观察1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖及S期激酶相关蛋白（Skp2）基因、抑癌基因p27表达的影响,探讨其抗癌机制.方法 应用免疫组织化学方法检测人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达维生素D受体（VDR） 选用人子宫内膜癌HEC-1-A细胞进行体外培养,用CCK-8法测定不同浓度1,25-二羟维生素D3作用细胞后不同时间后细胞生长抑制率,流式细胞仪进行细胞周期分析,采用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）及蛋白质印迹法检测Skp2/p27基因表达的变化.结果 人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达VDR,且定位于细胞核内 1×（10-8～10-6）mol/L浓度的1,25-二羟维生素D3作用于HEC-1-A细胞1～5 d范围内各不同浓度处理组细胞生长增殖均受到明显抑制,并且随着作用浓度增加,细胞增殖能力逐渐下降 1,25-二羟维生素D3能增加G0/G1期细胞比例,降低S、G2/M期细胞比例,从而降低细胞增殖指数（P＜0.01） 在mRNA、蛋白质水平上,能降低Skp2表达,而p27mRNA减少,p27蛋白表达明显增加.结论 1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞有抑制作用,可能是通过转录水平下调Skp2基因表达,同时由于Skp2的减少增加p27蛋白稳定性,减少其降解,从而产生抑癌作用.

S期激酶相关蛋白2、CD147及穿膜蛋白1在骨肉瘤中的表达及与疾病恶性程度及与疾病恶性程度、预后的关系

目的 分析S期激酶相关蛋白2(SKP2)、CD147及穿膜蛋白1(DLK1)在骨肉瘤中的表达及与疾病恶性程度和预后的关系。方法 检测103例骨肉瘤患者骨肉瘤组织与癌旁组织中SKP2、CD147及DLK1的表达情况,并分析SKP2、CD147及DLK1表达与骨肉瘤患者临床特征和预后的关系。结果 骨肉瘤组织中SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随着骨肉瘤患者临床分期逐渐增高,SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均逐渐升高。血管扩张型骨肉瘤患者SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均高于软骨母细胞型和骨母细胞型患者,软骨母细胞型骨肉瘤患者SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均高于骨母细胞型患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。预后良好与预后不良骨肉瘤患者肿瘤转移、肿瘤分型及SKP2、CD147、DLK1表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多元Logistic回归分析结果显示,SKP2、CD147、DLK1阳性表达及肿瘤转移均是骨肉瘤患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.01)。结论 SKP2、CD147、DLK1在骨肉瘤中呈高表达,且对疾病恶性程度、预后有较大的评估价值,可进一步研究证实。

S期激酶相关蛋白2在胃癌患者中的表达及其与疾病进展的关系探讨

目的:探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)在胃癌患者中的表达情况,分析其与胃癌疾病进展的相关性。方法:选取2020年2月—2021年10月宜兴市人民医院收治的70例胃癌患者为胃癌组,选取同期20名正常体检者为正常组。采用免疫组化染色方式对两组的Skp2 mRNA的表达量进行检测,对比两组患者组织中的Skp2蛋白阳性表达率及两组的Skp2 mRNA表达量。结果:①胃癌组的Skp2 mRNA的表达量显著高于正常组(P<0.05),且处于进展期的胃癌患者,其Skp2 mRNA的表达量多于早期胃癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);②胃癌组的Skp2阳性表达率高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);③经分析显示,在是否发生淋巴结转移,不同组织学分化程度,不同肿瘤TNM分期、不同肿瘤浸润程度的胃癌组织中的Skp2阳性表达率相比具有显著的差异(P<0.05)。结论:S期激酶相关蛋白2在胃癌患者中具有较高的表达量,并且在胃癌转化过程中具有重要的参与作用。

miR-508-5P慢病毒过表达载体的构建及对S期激酶相关蛋白2靶向调控作用

目的构建miR-508-5p慢病毒过表达载体,探讨其对SKP2基因的靶向调控作用。方法基于化学法合成miR-508-5p茎环结构RNA,将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定,将阳性重组体转染至HEK293T细胞;同时构建与miR-508-5p互补靶基因SKP2的3'非翻译区(3'UTR),将其克隆入线性化的pMIR-Report载体中。通过相对荧光素酶活性、Western blot法及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法验证miR-508-5p与SKP2 3'UTR的靶向调控关系。结果经PCR、酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-508-5p及pMIR-Report-SKP2-3'UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制SKP2的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05);抑制miR-508-5p的表达,则明显上调SKP2的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05)。结论成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实通过靶向作用于SKP2-3'UTR的特异序列直接抑制SKP2基因的表达。

肝细胞癌患者肝癌组织S期激酶相关蛋白2、p27表达与临床病理特征的关系

目的探讨S期激酶相关蛋白(Skp)2、p27两种蛋白在肝细胞癌发生、发展及转移过程中的作用及相关性,为深入研究肝细胞癌发生发展机制及靶向治疗提供理论基础。方法应用EnVision法检测80例肝细胞癌Skp2、p27表达情况,并比较与不同临床病理特征间关系。结果肝细胞癌Skp2和p27阳性表达率明显高于正常对照组(P<0.05)。肝细胞癌Skp2和p27阳性表达与组织学分级、临床分期、肿瘤大小、肝内转移密切相关。肝细胞癌Skp2阳性表达与淋巴结转移和甲胎蛋白密切相关。肝细胞癌Skp2表达与p27表达呈明显负相关。结论 Skp2蛋白与肝细胞癌发生发展有关,并可能是反映肿瘤细胞增殖标志物和新的肿瘤基因治疗靶点。肝细胞癌中p27阳性表达与肿瘤发生、发展相关。

AR、SKP2、SOX10、PD-L1及TIL表达在三阴性乳腺癌中的意义

目的:探索雄激素受体(androgen receptor,AR)、S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,SKP2)、性别决定区Y相关的HMG盒含因子10(sry-related HMG box-containing factor 10,SOX10)、程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)及肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)表达与临床病理特征和预后的关系。方法:根据苏木精-伊红染色(hematoxylineosin, HE)染色切片评判109例TNBC瘤巢内TIL的比例,采用Leica Bond-Max全自动免疫组化仪检测TNBC组织中AR、SKP2、SOX10、PD-L1的表达。分析以上各生物指标与临床病理特征间的关系,并采用kaplan-Meier、Log-rank进行生存分析。结果:95例患者获得随访,中位随访时间为48个月,中位无病生存时间(disease-free survival, DFS)为42个月,中位总生存时间(overall survival, OS)48个月。在TNBC中,AR阳性表达与淋巴结转移阴性(P=0.009)、肿瘤最大径<2 cm(P=0.008)相关,TIL高表达与低级别TNBC相关(P=0.007),SKP2阳性表达与神经/脉管侵犯阳性(P=0.011)、高级别TNBC相关(P=0.002),SOX10阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.022)、高级别TNBC(P=0.005)相关,PD-L1阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.020)、神经/脉管侵犯阳性(P=0.006)、高级别TNBC(P=0.042)相关。生存分析显示,SKP2、SOX10阳性表达与更差的DFS(P=0.007、P<0.001)和OS(P=0.013、P<0.001)相关,TIL高表达与更好的DFS(P=0.016)及OS(P=0.004)相关。在生物表志物的联合表达中,AR+/SKP2-、AR+/SOX10-与更好的DFS(P=0.004、P<0.001)及OS(P=0.007、P=0.001)相关,SOX10+/低TIL、PD-L1+/低TIL与更差的DFS(P<0.001、P=0.008)及OS(P=0.001、P=0.002)相关,AR-/低TIL者具有更差的OS(P=0.014)。SKP2(HR=4.143,95%CI为1.578~10.875)、SOX10(HR=7.578,95%CI为2.067~27.782)的阳性表达是影响TNBC患者DFS的独立预后因子,SKP2(HR=3.758,95%CI为1.400~10.084)、SOX10(HR=5.131,95%CI为1.316~20.000)及TIL(HR=0.375,95%CI为0.154~0.917)的阳性表达是TNBC患者OS的独立预后因子(P均<0.05)。结论:在TNBC中,AR阳性、TIL高表达与具有更好预后的临床病理特征相关,SKP2、SOX10和PD-L1与具侵袭性的临床病理特征相关。SKP2、SOX10及TIL表达与TNBC预后相关,提示这些生物指标可能成为TNBC新的预后因子,同时它们也有可能成为潜在的治疗靶点。

细胞周期突变体相关蛋白激酶2、P-糖蛋白和谷胱甘肽巯基转移酶-π在宫颈癌中的表达及临床意义

目的检测宫颈癌中细胞周期突变体(NIMA)相关蛋白激酶(Nek2)与耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、胱甘肽巯基转移酶-π(GST-π)的表达及其与临床病理特征的相关性。方法应用免疫组织化学法检测144例宫颈癌组织和32例慢性宫颈炎非癌组织中Nek2、P-gp、GST-π的表达。结果 1Nek2、P-gp和GST-π在宫颈癌及宫颈炎组织中的阳性表达率分别为(51.4%vs 31.2%)、(55.6%vs 12.5%)和(73.6%vs 53.1%),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。2Nek2表达与宫颈癌组织学分级、临床分期相关(P<0.05),与年龄、组织学类型、浸润深度、细胞角蛋白(CK)、CK14、癌胚抗原(CEA)、抗癌基因P16、生存时间无关(P>0.05)。P-gp、GST-π在宫颈癌的阳性表达与以上临床病理特征无相关性(P>0.05)。3宫颈癌中Nek2与P-gp、GST-π表达呈正相关(r=0.193和0.207,P<0.05)。结论 Nek2可能介导宫颈癌中P-gp、GST-π的表达。Nek2、P-gp及GST-π蛋白在宫颈癌发生、发展及耐药机制中发挥重要作用。联合检测对宫颈癌治疗方案的合理制定及化疗反应性的评估可能具有积极的临床指导意义。

PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞中S期激酶相关蛋白2表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂LY294002对体外培养的人晶状体上皮细胞(LECs)增生和细胞周期S期激酶相关蛋白2(Skp2)表达的影响。方法 MTT比色法检测25μmol/L的LY294002处理人LECs细胞株SRA01/04后12h和24h细胞的增生情况;流式细胞仪检测LY294002作用24h后细胞周期的分布情况;Westernblot和real-timePCR法分别测定LY294002处理24h后细胞中Skp2及其mRNA的表达情况。结果 25μmol/L的LY294002作用于SRA01/04细胞0～24h,SRA01/04细胞的增生受抑制,且作用24h时对SRA01/04细胞的抑制作用最明显。LY294002组中处于G1期和S期的细胞占总细胞数的百分率分别为(66.15±2.63)%和(27.34±6.58)%,对照组为(56.73±1.35)%和(37.32±5.54)%,LY294002组细胞Skp2及其mRNA的表达量明显减少。结论 PI3K抑制剂LY294002可抑制人LECs的增生,使部分细胞停滞于细胞周期的G1期,LY294002抑制人LECs的增生可能与Skp2的表达下调有关。

S期激酶相关蛋白Skp2调控雄激素受体表达及活性在去势抵抗型前列腺癌进展中的作用

目的:检测不同前列腺癌(PCa)细胞系及组织中S期激酶相关蛋白(Skp2)的表达水平,探讨其表达改变对雄激素受体(AR)信号通路及去势抵抗型前列腺癌(CRPC)发生可能的影响。方法:通过Western印迹法检测不同PCa细胞系中Skp2、AR表达;利用RNA干扰技术,转染shRNA敲低CRPC细胞系C4-2或22RV1中Skp2表达,通过Western印迹法检测雄激素处理后细胞中AR、P27表达,通过双荧光素酶报告基因法检测雄激素处理后细胞中雄激素反应元件(ARE)报告基因ARR3-Luc活性;利用免疫组化染色法检测未行内分泌治疗的患者PCa和CRPC组织标本中Skp2、AR表达,分析两者表达差异及相关性。结果:CRPC细胞系C4-2及22RV1较雄激素依赖性细胞系LNCa P中Skp2表达水平显著升高;C4-2细胞中雄激素处理可诱导Skp2表达,而shRNA敲除Skp2不仅可显著上调其下游经典靶分子P27蛋白的表达,还显著降低AR蛋白表达水平。相一致地,C4-2及22RV1细胞系中雄激素处理可增强ARR3-Luc活性,而敲除Skp2可显著抑制雄激素处理前或后的ARR3-Luc活性(P<0.05)。此外,CRPC组织较未行内分泌治疗患者PCa组织中Skp2、AR染色显著增强(P<0.05),两者表达具有正相关性(r=0.658 1,P<0.05)。结论:CRPC中Skp2可增强AR蛋白表达及转录活性,有望成为重要的分子治疗靶点。

CXC趋化因子受体4通过S期激酶相关蛋白2调控乳腺癌细胞周期的机制

目的:探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)通过PI3K/Akt和ERK信号通路调控S期激酶相关蛋白2(Skp2)的表达,进而影响乳腺癌细胞周期的机制。方法:利用干扰及过表达技术下调或上调CXCR4的表达后,通过实时定量PCR和蛋白质印迹法检测CXCR4与Skp2调控的关联性;蛋白质印迹法检测CXCR4干扰及过表达后对信号蛋白及Skp2下游相关基因表达的影响;通过碘化丙啶(PI)染色法检测CXCR4、PI3K/Akt通路抑制剂LY294002及ERK通路抑制剂U0126对乳腺癌细胞周期的影响。结果:干扰CXCR4后,Skp2表达下调;过表达CXCR4后,Skp2表达上调。CXCR4可通过对信号蛋白的调控影响Skp2及Skp2下游相关基因的表达。干扰CXCR4后,G_0/G_1期细胞比例增加,S期细胞比例相应减少,CXCR4与LY294002及U0126联合作用对细胞周期的阻断更加明显。结论:CXCR4能够通过对信号蛋白PI3K/Akt及ERK的调控,影响Skp2及Skp2下游相关基因的表达,阻断CXCR4/Akt/Skp2或CXCR4/ERK/Skp2信号通路后可有效诱导细胞周期阻滞,从而抑制乳腺癌细胞的增殖。

食管癌组织中S期激酶相关蛋白2mRNA的表达意义

目的探讨S期激酶相关蛋白2mRNA在食管癌及其癌旁组织中的表达及其与食管癌临床病理特征的关系.方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测S期激酶相关蛋白2mRNA在45例手术切除的食管癌组织及癌旁组织中的表达.结果S期激酶相关蛋白2mRNA表达率在食管癌中为66.6%(30/45),而癌旁组织中为24.4%(11/45),差异有显著性(P<0.05).S期激酶相关蛋白2mRNA阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、及有无淋巴结转移无关,与肿瘤分化程度及TNM分期有关(P<0.05).结论S期激酶相关蛋白2的高水平表达促进了食管癌的发生发展.并将可能为食管癌的早期诊断和治疗提供新的手段.

S期激酶相关蛋白2在胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)在胶质瘤中的表达情况及其功能意义。方法收集海军总医院神经外科2001年6月-2006年6月手术切除的原发胶质瘤标本60例,根据WHO胶质瘤分类法(2000年),其中星形细胞瘤(WHOⅡ级)、间变性星形细胞瘤(WHOⅢ级)、胶质母细胞瘤(WHOⅣ级)各20例,另取4例正常脑组织作为对照。采用Western blotting及免疫组化法检测正常脑组织及不同恶性程度胶质瘤组织中Skp2的表达情况。结果 Western blotting结果显示,正常脑组织中Skp2表达明显低于胶质瘤组织,且随着胶质瘤恶性程度的增高,Skp2蛋白表达逐渐增强。免疫组化染色显示,正常脑组织及胶质瘤组织中均有Skp2阳性表达,其中正常脑组织和WHOⅡ级胶质瘤中Skp2呈弱阳性,多位于胞质,WHOⅢ级和Ⅳ级胶质瘤中Skp2表达呈强阳性,阳性染色颗粒集中于细胞核。胶质瘤组织中的血管内皮细胞也有Skp2阳性染色,且在血管周围有Skp2阳性染色的肿瘤细胞聚集。统计学分析显示,Skp2在高度恶性胶质瘤组织(WHOⅢ级、Ⅳ级)中的表达明显高于正常脑组织和低度恶性的胶质瘤组织(WHOⅡ级),差异有统计学意义(P<0.01)。结论随着胶质瘤的恶性进展,Skp2表达逐渐增强,且由细胞质转移至细胞核;在胶质瘤组织新生血管内皮细胞及血管周围肿瘤细胞中均有Skp2阳性表达。Skp2的表达变化可能与胶质瘤的恶性进展、新生血管的形成及肿瘤细胞的转移密切相关。

S期激酶相关蛋白2在幽门螺杆菌L型致胃癌中的作用

目的:研究S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)在幽门螺杆菌L型(Helicobacter pylori L-form,Hp-L型)感染致胃癌中所起的作用。方法:将胃癌BGC-823细胞与Hp-L型以不同比例共培养,在倒置显微镜下观察细胞形态学变化,并应用原位杂交和免疫组化分别检测Skp2 mRNA和蛋白在胃癌BGC-823细胞中的表达情况。同时收集慢性萎缩性胃炎(CAG)、胃肠腺化生(GIM)、胃不典型增生(GED)、胃癌(GCa)标本各40例,以40例轻度慢性浅表性胃炎(CSG)作为对照。应用革兰染色和免疫组化检测Hp-L型在上述组织中的感染情况;并进一步检测Hp-L型阳性组织中Skp2 mRNA和蛋白的表达情况。结果:Hp-L型作用BGC-823细胞后,倒置显微镜观察到细胞分裂增多,出现明显的生长加速现象;原位杂交和免疫组化检测发现BGC-823细胞中Skp2 mRNA和蛋白表达阳性率随细菌浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增加(P<0.05)。Hp-L型阳性组织中的Skp2mRNA和蛋白的表达阳性率按CAG、GIM、GED、GCa的顺序逐渐增加,但仅GCa组与CSG组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Skp2在Hp-L型感染的胃癌前病变及胃癌中均明显升高,提示其在胃癌的发生及发展中起着重要作用。