中药千金子二萜醇对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白2的影响

目的探讨中药千金子二萜醇对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白(Skp)2表达的影响。方法建立肾癌786-0细胞移植瘤裸鼠模型,分为对照组和实验组,每组8只。对照组移植瘤裸鼠灌胃等体积的生理盐水,实验组移植瘤裸鼠灌胃20 mg/kg千金子二萜醇溶液,21 d后处死裸鼠,取出瘤体,然后采用免疫组化(SP)法检测Skp2的表达。结果两组Skp2在裸鼠的瘤体中表达率差异显著(P=0.04)。结论中药千金子二萜醇对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白2的表达有一定的抑制作用。

过表达人细胞S期激酶相关蛋白2(Skp2)促进MCF-7乳腺癌细胞生长及S期细胞增加

目的构建带FLAG标签的细胞S期激酶相关蛋白2(Skp2)基因真核表达载体pc DNA3-FLAG-Skp2并检测其对MCF-7乳腺癌细胞生长及细胞周期的影响。方法采用反转录PCR从MDA-MB-231乳腺癌细胞中扩增Skp2基因,构建重组真核表达载体pc DNA3-FLAG-Skp2。酶切及测序鉴定重组质粒正确后,脂质体介导转染至MCF-7乳腺癌细胞中。采用Western blot法检测FLAG-Skp2的表达,Alamar blue比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞周期。结果 PCR扩增片段与预期片段大小相符,测序结果与Gen Bank结果一致。Western blot结果显示质粒转染48 h后,细胞成功表达融合蛋白FLAG-Skp2。过表达Skp2的MCF-7乳腺癌细胞较对照组生长速度明显加快,S期细胞显著增多。结论成功构建人Skp2真核表达载体pc DNA3-FLAG-Skp2。过表达Skp2的MCF-7细胞生长加快,S期细胞增多。

S期激酶相关蛋白2、CD147及穿膜蛋白1在骨肉瘤中的表达及与疾病恶性程度及与疾病恶性程度、预后的关系

目的 分析S期激酶相关蛋白2(SKP2)、CD147及穿膜蛋白1(DLK1)在骨肉瘤中的表达及与疾病恶性程度和预后的关系。方法 检测103例骨肉瘤患者骨肉瘤组织与癌旁组织中SKP2、CD147及DLK1的表达情况,并分析SKP2、CD147及DLK1表达与骨肉瘤患者临床特征和预后的关系。结果 骨肉瘤组织中SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随着骨肉瘤患者临床分期逐渐增高,SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均逐渐升高。血管扩张型骨肉瘤患者SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均高于软骨母细胞型和骨母细胞型患者,软骨母细胞型骨肉瘤患者SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均高于骨母细胞型患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。预后良好与预后不良骨肉瘤患者肿瘤转移、肿瘤分型及SKP2、CD147、DLK1表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多元Logistic回归分析结果显示,SKP2、CD147、DLK1阳性表达及肿瘤转移均是骨肉瘤患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.01)。结论 SKP2、CD147、DLK1在骨肉瘤中呈高表达,且对疾病恶性程度、预后有较大的评估价值,可进一步研究证实。

S期激酶相关蛋白2在胃癌患者中的表达及其与疾病进展的关系探讨

目的:探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)在胃癌患者中的表达情况,分析其与胃癌疾病进展的相关性。方法:选取2020年2月—2021年10月宜兴市人民医院收治的70例胃癌患者为胃癌组,选取同期20名正常体检者为正常组。采用免疫组化染色方式对两组的Skp2 mRNA的表达量进行检测,对比两组患者组织中的Skp2蛋白阳性表达率及两组的Skp2 mRNA表达量。结果:①胃癌组的Skp2 mRNA的表达量显著高于正常组(P<0.05),且处于进展期的胃癌患者,其Skp2 mRNA的表达量多于早期胃癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);②胃癌组的Skp2阳性表达率高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);③经分析显示,在是否发生淋巴结转移,不同组织学分化程度,不同肿瘤TNM分期、不同肿瘤浸润程度的胃癌组织中的Skp2阳性表达率相比具有显著的差异(P<0.05)。结论:S期激酶相关蛋白2在胃癌患者中具有较高的表达量,并且在胃癌转化过程中具有重要的参与作用。

AR、SKP2、SOX10、PD-L1及TIL表达在三阴性乳腺癌中的意义

目的:探索雄激素受体(androgen receptor,AR)、S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,SKP2)、性别决定区Y相关的HMG盒含因子10(sry-related HMG box-containing factor 10,SOX10)、程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)及肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)表达与临床病理特征和预后的关系。方法:根据苏木精-伊红染色(hematoxylineosin, HE)染色切片评判109例TNBC瘤巢内TIL的比例,采用Leica Bond-Max全自动免疫组化仪检测TNBC组织中AR、SKP2、SOX10、PD-L1的表达。分析以上各生物指标与临床病理特征间的关系,并采用kaplan-Meier、Log-rank进行生存分析。结果:95例患者获得随访,中位随访时间为48个月,中位无病生存时间(disease-free survival, DFS)为42个月,中位总生存时间(overall survival, OS)48个月。在TNBC中,AR阳性表达与淋巴结转移阴性(P=0.009)、肿瘤最大径<2 cm(P=0.008)相关,TIL高表达与低级别TNBC相关(P=0.007),SKP2阳性表达与神经/脉管侵犯阳性(P=0.011)、高级别TNBC相关(P=0.002),SOX10阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.022)、高级别TNBC(P=0.005)相关,PD-L1阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.020)、神经/脉管侵犯阳性(P=0.006)、高级别TNBC(P=0.042)相关。生存分析显示,SKP2、SOX10阳性表达与更差的DFS(P=0.007、P<0.001)和OS(P=0.013、P<0.001)相关,TIL高表达与更好的DFS(P=0.016)及OS(P=0.004)相关。在生物表志物的联合表达中,AR+/SKP2-、AR+/SOX10-与更好的DFS(P=0.004、P<0.001)及OS(P=0.007、P=0.001)相关,SOX10+/低TIL、PD-L1+/低TIL与更差的DFS(P<0.001、P=0.008)及OS(P=0.001、P=0.002)相关,AR-/低TIL者具有更差的OS(P=0.014)。SKP2(HR=4.143,95%CI为1.578~10.875)、SOX10(HR=7.578,95%CI为2.067~27.782)的阳性表达是影响TNBC患者DFS的独立预后因子,SKP2(HR=3.758,95%CI为1.400~10.084)、SOX10(HR=5.131,95%CI为1.316~20.000)及TIL(HR=0.375,95%CI为0.154~0.917)的阳性表达是TNBC患者OS的独立预后因子(P均<0.05)。结论:在TNBC中,AR阳性、TIL高表达与具有更好预后的临床病理特征相关,SKP2、SOX10和PD-L1与具侵袭性的临床病理特征相关。SKP2、SOX10及TIL表达与TNBC预后相关,提示这些生物指标可能成为TNBC新的预后因子,同时它们也有可能成为潜在的治疗靶点。

skp2及p27Kip1蛋白与晚期胃癌患者临床预后的关系

目的探讨细胞S期激酶相关蛋白(skp)2及p27Kip1蛋白与晚期胃癌患者临床预后的关系。方法选取2013年5月至2015年1月开滦点医院林西医院收治130例晚期胃癌患者,免疫组化法检测skp2和p27Kip1蛋白表达水平,采用单因素和多因素Cox回归模型,探讨skp2和p27Kip1蛋白表达与晚期胃癌临床预后的关系。结果晚期胃癌组织skp2和p27Kip1阳性表达在不同卡氏功能状态(KPS)评分、肿瘤直径、手术、腹腔淋巴结转移、肝转移、临床分期及组织学分化患者中差异存在统计学意义(P<0.05),而性别、年龄、化疗、放疗及腹水等指标差异未见统计学意义(P>0.05)。年龄、KPS评分、肿瘤直径、手术、化疗、放疗、腹腔淋巴结转移、肝转移、腹水、临床分期、组织学分级、skp2蛋白表达和p27Kip1蛋白表达水平是晚期胃癌患者5年存活的影响因素。Cox回归分析结果显示,KPS评分(≤60分)、组织学分级(低分化)、腹腔淋巴结转移、skp2蛋白阳性表达和p27Kip1蛋白阴性表达是晚期胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论晚期胃癌组织中skp2蛋白阳性表达和p27Kip1蛋白阴性表达是晚期胃癌临床预后差的独立危险因素,可作为晚期胃癌治疗方案、预后评估等方面的有效指标。

肝细胞癌患者肝癌组织S期激酶相关蛋白2、p27表达与临床病理特征的关系

目的探讨S期激酶相关蛋白(Skp)2、p27两种蛋白在肝细胞癌发生、发展及转移过程中的作用及相关性,为深入研究肝细胞癌发生发展机制及靶向治疗提供理论基础。方法应用EnVision法检测80例肝细胞癌Skp2、p27表达情况,并比较与不同临床病理特征间关系。结果肝细胞癌Skp2和p27阳性表达率明显高于正常对照组(P<0.05)。肝细胞癌Skp2和p27阳性表达与组织学分级、临床分期、肿瘤大小、肝内转移密切相关。肝细胞癌Skp2阳性表达与淋巴结转移和甲胎蛋白密切相关。肝细胞癌Skp2表达与p27表达呈明显负相关。结论 Skp2蛋白与肝细胞癌发生发展有关,并可能是反映肿瘤细胞增殖标志物和新的肿瘤基因治疗靶点。肝细胞癌中p27阳性表达与肿瘤发生、发展相关。

S期激酶相关蛋白2(SKP2)泛素化修饰OGG1对中波紫外线诱导的晶状体上皮细胞氧化损伤作用

目的探索E3泛素连接酶S期激酶相关蛋白2(SKP2)介导的碱基切除修复蛋白8-氧代鸟嘌呤-DNA糖基化酶(OGG1)在年龄相关性白内障(ARC)发生过程中的泛素化降解机制。方法采用免疫沉淀实验检测OGG1的泛素化修饰及其与SKP2的结合能力。采用中波紫外线(UVB)照射人晶状体上皮细胞株SRA01/04构建细胞氧化损伤模型。蛋白免疫印迹实验检测细胞氧化损伤模型和过表达模型细胞中SKP2的蛋白表达。通过转染SKP2质粒,增加SKP2的表达并观察细胞中OGG1蛋白的表达变化。结果OGG1蛋白存在泛素化修饰。UbiBrowser软件预测能与OGG1结合的潜在E3泛素连接酶,并通过免疫沉淀实验证明SKP2与OGG1之间存在相互作用。在氧化损伤环境下,SRA01/04细胞中SKP2蛋白表达出现先下降后逐渐升高的趋势,其中UVB照射10 min时SKP2表达下降最为显著。对照组、转染空载质粒组和转染SKP2过表达质粒组SRA01/04细胞中SKP2蛋白的相对表达量分别为1.040±0.007、0.920±0.008和1.330±0.020,与转染空载质粒组相比,转染SKP2过表达质粒组细胞中SKP2蛋白的表达显著上调(P<0.05)。空白对照组、UVB组、UVB+转染空载质粒组和UVB+转染SKP2过表达质粒组细胞中OGG1蛋白的相对表达量分别为1.05±0.01、5.05±0.16、5.20±0.07和3.83±0.10;与UVB+转染空载质粒组相比,UVB+转染SKP2过表达质粒组SRA01/04细胞中OGG1蛋白相对表达水平明显降低,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论E3泛素连接酶SKP2能够促进OGG1发生泛素化降解,导致晶状体上皮细胞内部损伤性DNA的累积,从而导致ARC的发生发展。

PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞中S期激酶相关蛋白2表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂LY294002对体外培养的人晶状体上皮细胞(LECs)增生和细胞周期S期激酶相关蛋白2(Skp2)表达的影响。方法 MTT比色法检测25μmol/L的LY294002处理人LECs细胞株SRA01/04后12h和24h细胞的增生情况;流式细胞仪检测LY294002作用24h后细胞周期的分布情况;Westernblot和real-timePCR法分别测定LY294002处理24h后细胞中Skp2及其mRNA的表达情况。结果 25μmol/L的LY294002作用于SRA01/04细胞0～24h,SRA01/04细胞的增生受抑制,且作用24h时对SRA01/04细胞的抑制作用最明显。LY294002组中处于G1期和S期的细胞占总细胞数的百分率分别为(66.15±2.63)%和(27.34±6.58)%,对照组为(56.73±1.35)%和(37.32±5.54)%,LY294002组细胞Skp2及其mRNA的表达量明显减少。结论 PI3K抑制剂LY294002可抑制人LECs的增生,使部分细胞停滞于细胞周期的G1期,LY294002抑制人LECs的增生可能与Skp2的表达下调有关。

S期激酶相关蛋白2在胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)在胶质瘤中的表达情况及其功能意义。方法收集海军总医院神经外科2001年6月-2006年6月手术切除的原发胶质瘤标本60例,根据WHO胶质瘤分类法(2000年),其中星形细胞瘤(WHOⅡ级)、间变性星形细胞瘤(WHOⅢ级)、胶质母细胞瘤(WHOⅣ级)各20例,另取4例正常脑组织作为对照。采用Western blotting及免疫组化法检测正常脑组织及不同恶性程度胶质瘤组织中Skp2的表达情况。结果 Western blotting结果显示,正常脑组织中Skp2表达明显低于胶质瘤组织,且随着胶质瘤恶性程度的增高,Skp2蛋白表达逐渐增强。免疫组化染色显示,正常脑组织及胶质瘤组织中均有Skp2阳性表达,其中正常脑组织和WHOⅡ级胶质瘤中Skp2呈弱阳性,多位于胞质,WHOⅢ级和Ⅳ级胶质瘤中Skp2表达呈强阳性,阳性染色颗粒集中于细胞核。胶质瘤组织中的血管内皮细胞也有Skp2阳性染色,且在血管周围有Skp2阳性染色的肿瘤细胞聚集。统计学分析显示,Skp2在高度恶性胶质瘤组织(WHOⅢ级、Ⅳ级)中的表达明显高于正常脑组织和低度恶性的胶质瘤组织(WHOⅡ级),差异有统计学意义(P<0.01)。结论随着胶质瘤的恶性进展,Skp2表达逐渐增强,且由细胞质转移至细胞核;在胶质瘤组织新生血管内皮细胞及血管周围肿瘤细胞中均有Skp2阳性表达。Skp2的表达变化可能与胶质瘤的恶性进展、新生血管的形成及肿瘤细胞的转移密切相关。

S期激酶相关蛋白2在幽门螺杆菌L型致胃癌中的作用

目的:研究S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)在幽门螺杆菌L型(Helicobacter pylori L-form,Hp-L型)感染致胃癌中所起的作用。方法:将胃癌BGC-823细胞与Hp-L型以不同比例共培养,在倒置显微镜下观察细胞形态学变化,并应用原位杂交和免疫组化分别检测Skp2 mRNA和蛋白在胃癌BGC-823细胞中的表达情况。同时收集慢性萎缩性胃炎(CAG)、胃肠腺化生(GIM)、胃不典型增生(GED)、胃癌(GCa)标本各40例,以40例轻度慢性浅表性胃炎(CSG)作为对照。应用革兰染色和免疫组化检测Hp-L型在上述组织中的感染情况;并进一步检测Hp-L型阳性组织中Skp2 mRNA和蛋白的表达情况。结果:Hp-L型作用BGC-823细胞后,倒置显微镜观察到细胞分裂增多,出现明显的生长加速现象;原位杂交和免疫组化检测发现BGC-823细胞中Skp2 mRNA和蛋白表达阳性率随细菌浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增加(P<0.05)。Hp-L型阳性组织中的Skp2mRNA和蛋白的表达阳性率按CAG、GIM、GED、GCa的顺序逐渐增加,但仅GCa组与CSG组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Skp2在Hp-L型感染的胃癌前病变及胃癌中均明显升高,提示其在胃癌的发生及发展中起着重要作用。

沉默S期激酶相关蛋白2对Eca109细胞增殖的影响

目的研究Ad-skp2-si RNA对Eca109细胞增殖的影响。方法采用荧光显微镜、流式细胞仪和Western bloting检测转染效率;采用CCK8法检测Ad-skp2-si RNA转染Eca109细胞后对奥沙利铂耐药的影响;采用细胞划痕实验和侵袭实验检测Ad-skp2-si RNA对Eca109细胞迁移能力的影响;采用Western blotting检测Ad-skp2-si RNA作用Eca109细胞后对相关蛋白表达的影响。结果 Ad-skp2-si RNA能够抑制Eca109细胞的生长和迁移,呈时间-剂量依赖性,Ad-skp2-si RNA能够影响相关蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论沉默Skp2有助于抑制细胞增殖。

大鼠系膜细胞增殖时S期激酶相关蛋白2表达的变化及机制

目的:探讨系膜细胞增殖时细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物p27kip1的降解限速蛋白——S期激酶相关蛋白2(Skp2)表达的变化及其机制。方法:原代培养的大鼠系膜细胞同步后分为无血清组、20%胎牛血清(FCS)刺激组。MTT法检测细胞增殖;实时定量PCR和Western Blot检测p27kip1和Skp2的mRNA、蛋白表达。结果:p27kip1在静止期系膜细胞高丰度表达,20%FCS刺激诱导细胞增殖后p27kip1蛋白表达显著下调;实时定量PCR研究结果显示p27kip1的mRNA表达水平差异无统计学差异,p27kip1蛋白和mRNA表达不一致。蛋白酶体抑制剂MG-132可显著改善系膜细胞增殖时p27kip1蛋白水平的下降。Skp2表达在静止期系膜细胞几乎检测不出,20%FCS刺激诱导细胞增殖后Skp2表达量显著上调。结论:系膜细胞Skp2表达显著上调导致p27kip1降解增加,可能是p27kip1蛋白水平下降、系膜细胞增殖的重要原因,为进一步阐明疾病状态下系膜细胞增殖的机制提供了新的研究靶点。

S期激酶相关蛋白2在非小细胞肺癌中的表达意义及其与PTEN和p27表达的关系

目的探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达意义及其与张力蛋白同源的10号染色体丢失的磷酸酶基因(PTEN)与p27之间的关系。方法利用免疫组织化学方法检测45例NSCLC组织和15例癌旁组织中Skp2、PTEN和p27蛋白的表达情况。结果 Skp2蛋白在NSCLC中表达的阳性率显著高于癌旁组织(P<0.01);Skp2的表达与是否吸烟、肺癌的组织学类型、分化程度、TNM分期和是否淋巴结转移相关(均P<0.05),但与患者的年龄和性别无关(P>0.05);PTEN和p27在NSCLC中的表达较癌旁组织降低(均P<0.05);在NSCLC中,Skp2与PTEN的表达呈显著负相关(r=-0.456,P<0.01);Skp2与p27的表达呈负相关(r=-0.331,P<0.05);PTEN与p27的表达呈显著正相关(r=0.493,P<0.01)。结论 Skp2在NSCLC中表达的升高,与NSCLC的发生、侵袭和转移有关,而PTEN和p27在NSCLC中表达的降低,提示PTEN的缺失可能导致Skp2的表达升高,促进p27的泛素化降解,使p27的表达降低,失去对细胞周期的调控,从而促进NSCLC的发生及恶性增殖。

S期激酶相关蛋白2及细胞周期抑制蛋白p27在老年甲状腺癌患者癌组织中的表达及临床意义

目的研究S期激酶相关蛋白(Skp)2和细胞周期抑制蛋白p27在甲状腺癌癌组织中的表达及临床意义。方法首次就诊的老年甲状腺癌患者85例、甲状腺腺瘤老年患者40例和结节性甲状腺肿老年患者40例,采用免疫组织化学法检测甲状腺癌、甲状腺腺瘤和甲状腺肿组织中Skp2和p27蛋白的表达情况。结果 (1)甲状腺癌组织Skp2蛋白阳性表达率显著高于甲状腺腺瘤组织和甲状腺肿组织(P<0.001),甲状腺腺瘤组织和甲状腺肿组织Skp2蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);(2)甲状腺癌组织p27蛋白阳性表达率显著低于甲状腺腺瘤组织和甲状腺肿组织(P<0.001),甲状腺腺瘤组织和甲状腺肿组织p27蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);(3)Skp2蛋白的表达与肿瘤分期、周围组织侵犯情况及淋巴结转移有关(P<0.05或P<0.01),而与性别和肿瘤大小无关(P>0.05);(4)p27蛋白的表达与肿瘤分期、周围组织侵犯情况及淋巴结转移有关(P<0.05或P<0.01),而与性别和肿瘤大小无关(P>0.05);(5)甲状腺癌组织中Skp2与p27蛋白表达评分呈负相关(r=-0.657,P=0.016)。结论 Skp2和p27蛋白分别在甲状腺癌组织的表达呈负相关,两者参与了甲状腺癌的发生和发展。

miR-508-5P慢病毒过表达载体的构建及对S期激酶相关蛋白2靶向调控作用

目的构建miR-508-5p慢病毒过表达载体,探讨其对SKP2基因的靶向调控作用。方法基于化学法合成miR-508-5p茎环结构RNA,将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定,将阳性重组体转染至HEK293T细胞;同时构建与miR-508-5p互补靶基因SKP2的3'非翻译区(3'UTR),将其克隆入线性化的pMIR-Report载体中。通过相对荧光素酶活性、Western blot法及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法验证miR-508-5p与SKP2 3'UTR的靶向调控关系。结果经PCR、酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-508-5p及pMIR-Report-SKP2-3'UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制SKP2的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05);抑制miR-508-5p的表达,则明显上调SKP2的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05)。结论成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实通过靶向作用于SKP2-3'UTR的特异序列直接抑制SKP2基因的表达。

乳腺癌细胞中过表达S期激酶相关蛋白2对曲格列酮敏感性的影响

目的本文主要研究过表达S期激酶相关蛋白2(Skp2)能否影响曲格列酮(TRG)对乳腺癌细胞的敏感性,致力于发展一种新的药物来提高患者的生存率,最终达到治愈的目的。方法荧光报告基因方法观察过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ型转录活性的变化;流式细胞和CCK-8法研究Skp2过表达影响TRG对乳腺癌细胞生长和凋亡的改变。结果 Skp2过表达能抑制PPARγ的活性,耐受TRG对乳腺癌细胞生长和凋亡的影响。结论 Skp2过表达的乳腺癌细胞能耐受TRG的敏感性,因此通过下调Skp2可能会增强TRG对乳腺癌细胞的生长抑制。

不同程度系膜细胞增殖性肾炎S期激酶相关蛋白2表达变化的研究

目的:探讨不同程度系膜细胞增殖性肾炎S期激酶相关蛋白2(Skp2)表达的变化。方法:选取经肾穿刺活检证实为系膜细胞增殖性肾炎的病理切片,根据系膜细胞增殖的程度分为轻度、中度、重度3组,每组6例,进行PAS染色、BrdU免疫荧光染色和Skp2的免疫组化染色。结果:(1)BrdU间接免疫荧光结果显示在轻度系膜增殖性肾炎,偶见BrdU染色阳性细胞(0～1个/肾小球);在中度系膜增殖性肾炎,BrdU染色阳性细胞为(9.8±1.1)个/肾小球;重度增殖性肾炎为(16.3±2.8)个/肾小球,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Skp2免疫组化结果显示在肾小球,Skp2主要在系膜细胞的细胞核表达,呈棕黄色颗粒;随着系膜增殖程度的加重,肾小球内Skp2阳性细胞百分数显著增加[轻度(2.22±0.75)%vs中度(7.16±2.38)%vs重度(15.89±4.56)%],各组间差异有统计学意义(P<0.05)。(3)Pearson相关分析结果显示BrdU染色阳性率和肾小球内Skp2阳性细胞百分数高度相关(R=0.81)。结论:在人类系膜增殖性肾炎,随着系膜细胞增殖程度的加重,肾小球内Skp2阳性细胞数的比例显著增加,处于S期的系膜细胞也显著增加,为进一步阐明疾病状态下系膜细胞增殖的机制提供了新的研究靶点。

人类S期激酶相关蛋白2表达质粒的构建

目的:克隆人类S期激酶相关蛋白2(Skp2)基因,构建其表达质粒,为今后进一步研究Skp2的生物学功能提供基础。方法:采用RT-PCR技术扩增人类Skp2 eDNA全长序列,运用DNA重组技术将其重组于pcDNA3.1/myc- His A质粒,构建Skp2表达质粒。结果:通过酶切电泳分析及DNA测序分析证实,实验成功构建了Skp2表达质粒。结论:Skp2表达质粒pcDNA3.1/mye-His A-Skp2构建成功,为进一步研究Skp2的生物学功能及其在肿瘤发生、发展、诊断和预后中的作用奠定了基础。