β_2受体阻滞剂诱导胰腺癌细胞G1/S期阻滞的实验研究

目的研究β_2受体阻滞剂ICI118,551诱导胰腺癌细胞G1/S期阻滞及其相关机制。方法应用β_2受体阻滞剂ICI118,551和β_1受体阻滞剂美托洛尔干预胰腺癌细胞,通过流式细胞仪检测细胞周期、Western blot技术检测β_2受体阻滞剂对细胞周期调节蛋白Cyclin D1和Cyclin E表达的影响,EMSA技术检测核转录因子NF-κB的活性,构建裸鼠肾包膜下移植瘤模型检测肿瘤增殖情况。结果 ICI118,551可显著诱导胰腺癌细胞G1/S期阻滞,并显著优于美托洛尔组(P<0.05);ICI118,551干预组抑制Cyclin D1和Cyclin E的表达,并可抑制NF-κB的活性;裸鼠肾包膜下移植瘤实验显示ICI118,551可显著抑制胰腺癌细胞的增殖。结论β_2受体阻滞剂ICI118,551可有效诱导胰腺癌细胞G1/S期阻滞,抑制胰腺癌细胞的增殖。

G6976转变8-氯-腺苷引起的G_2/M期阻滞为S期阻滞并促进K562细胞凋亡

8-氯-腺苷可抑制多种人类肿瘤细胞生长.8-氯-腺苷可引起细胞有丝分裂异常、G2/M期阻滞和晚期凋亡.为探索增强8-氯-腺苷的抗肿瘤作用,本研究以人慢性髓性白血病细胞株K562为靶细胞,联合使用Chk1抑制剂G6976与8-氯-腺苷,观察G6976处理后肿瘤细胞对8-氯-腺苷的增敏效果,探索其作用机制.流式细胞分析发现,G6976可消除8-氯-腺苷引起的K562细胞G2/M期阻滞,使转换为S期阻滞.蛋白质印迹及免疫共沉淀实验显示,G6976可灭活Chk1,激活Chk2,使Chk1-Cdc25C-CDK1级联反应转换为Chk2-Cdc25A-CDK2级联反应,从而引起细胞周期阻滞发生改变.蛋白质印迹实验证明,G6976可明显增强8-氯-腺苷作用引起的凋亡相关分子procasepase-3和PARP的激活;流式细胞分析显示,G6976促进8-氯腺苷引起的细胞凋亡.研究结果提示,G6976增强了靶细胞对8-氯-腺苷的敏感性,通过转换8-氯-腺苷引起的G2/M期阻滞为S期阻滞,促进细胞凋亡.

p53,miR-365在紫外线诱导小鼠胚胎成纤维细胞S期阻滞中作用

目的探讨中波紫外线(UV-B)应激下p53调控细胞周期阻滞过程中miR-365的作用。方法用50 J/m2的UV-B分别照射p53正常表达的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和p53低表达的MEF,分别在照前和照后不同时间点用流式细胞术检测细胞周期分布情况;用逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹(Western blot)分别检测p53在mRNA和蛋白表达水平的改变;用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-365的表达情况。结果 50 J/m2的UV-B照射后18 h,p53正常表达的MEF出现S期阻滞,并在照后24 h出现明显的凋亡峰,而在p53低表达的MEF中未观察到此变化;2种细胞其p53的mRNA表达水平在照后未见明显改变;p53正常表达的MEF的p53蛋白在照后1 h开始升高,至12 h达到峰值,24 h开始下降;而在p53低表达的MEF中p53蛋白未见明显改变;UV-B照射后p53正常表达的MEF中miR-365在照后4 h升高(P<0.05),并持续到照后8 h,照后12 h恢复到照前水平;而在p53低表达的MEF中miR-365无明显变化。结论UV-B照射可能通过转录后调控作用提高细胞p53蛋白水平进而发挥其诱导细胞S期阻滞的作用;miR-365参与了p53蛋白诱导S期阻滞的过程。

白花地胆草单体EM-12诱导2774-C10细胞G1/S期阻滞及细胞凋亡的分子机制研究

目的：研究白花地胆草（Elephantopus mollis H.B.K.）的乙醇提取物EM-12抗肿瘤作用分子机制。方法：MTT检测EM-12对卵巢癌细胞活性影响;克隆形成抑制实验检测EM-12对卵巢癌细胞增殖能力的影响;GO功能分析（gene ontology analysis）分析EM-12对卵巢癌2774-C10细胞的影响;PI单染检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blotting检测细胞凋亡、周期相关蛋白。结果：MTT实验结果表明,EM-12可以显著抑制卵巢癌细胞的活性;RNASeq及GO功能分析表明EM-12诱导2774-C10发生G1/S期阻滞;克隆形成抑制实验结果表明,EM-12可以显著抑制卵巢癌细胞的增殖;流式细胞术结果表明,随着药物浓度的增加,凋亡率逐渐增加,并且G1期细胞比例逐渐增加,S期细胞比例减少,发生G1/S期阻滞。Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加cyclin E2、cyclin D1、CDK2、CDK6蛋白水平下降,并伴随caspase-8、caspase-3活化及多聚ADP核糖聚合酶PARP酶切失活。结论：EM-12诱导卵巢癌细胞发生G1/S期阻滞,且通过死亡受体通路诱导细胞凋亡。

猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)诱导NCI-H446等小细胞肺癌细胞在FIGNL1沉默时出现S期阻滞

【目的】研究支原体对体外培养细胞基因功能的影响。【方法】利用si RNA抑制DNA双链损伤修复关键基因——FIGNL1在无支原体感染、感染猪鼻支原体及清除支原体污染后的人小细胞肺癌细胞株NCI-H446与NCI-H1688中的表达后,采用定量PCR、流式细胞术等方法检测支原体感染对宿主细胞目标基因表达、细胞周期等影响。【结果】虽然猪鼻支原体感染对si RNA沉默FIGNL1表达无显著影响,无支原体感染及清除支原体污染的H1688和H446细胞FIGNL1表达沉默后,与仅加转染试剂的空白组(mock)相比较,靶标FIGNL1基因的实验组(T1)和阴性对照组(nc)的S期细胞比例均未发生显著变化。但猪鼻支原体感染的H1688和H446细胞相对于空白组,实验组与阴性对照组的S期细胞比例,H1688细胞提高了约1.38倍和0.51倍,H446细胞提高了约1.27倍和0.55倍。【结论】推测由于支原体会对宿主细胞DNA造成损伤,而FIGNL1是DNA双链断裂损伤修复的重要基因,从而导致沉默猪鼻支原体感染的H1688和H446细胞FIGNL1表达时,细胞会出现S期阻滞。鉴于支原体感染对细胞有广泛、显著的影响,在基因功能、肿瘤等细胞生物学研究中,应予以高度重视。

共济失调毛细血管扩张突变基因对氢醌诱导人外周血淋巴细胞DNA损伤及S期阻滞的影响

目的 探讨共济失调毛细血管扩张突变基因(ataxia telangiectasia-mutated gene, ATM)对氢醌(hydroquinone, HQ)诱导人外周血淋巴细胞(JHP)DNA损伤及细胞周期S期阻滞的影响。方法 以不同浓度的HQ(0、1、5、10μmol/L)处理JHP 12 h后,采用流式细胞术检测细胞周期分布情况,活细胞成像技术检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)释放水平,Western blot法检测DNA损伤标志蛋白γ-H2AX、抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO1以及细胞周期相关蛋白CyclinA、CDK2、CyclinE的表达;利用ATM化学抑制剂KU-60019预处理JHP 1 h,以10μmol/L HQ处理12 h后观察上述指标的变化。结果(1)与0μmol/L HQ组相比,随着HQ浓度的增加,ROS释放水平逐渐升高,ATM、γ-H2AX及抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO1表达水平呈剂量依赖性增加,CDK2蛋白表达呈剂量依赖性降低(P<0.05);10μmol/L HQ组S期细胞比例显著增加,CyclinA表达水平显著降低,与0μmol/L HQ组相比差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与HQ组相比,HQ+KU-60019组ROS的释放水平显著升高,S期阻滞减轻(P<0.05);HQ+KU-60019组γ-H2AX、Nrf2、HO-1、NQO1和CDK2蛋白的表达均显著升高(P<0.05)。结论 HQ可诱导JHP的ROS释放,促进ATM蛋白、DNA损伤标志蛋白γ-H2AX以及抗氧化相关蛋白表达升高,诱导细胞发生S期阻滞;ATM表达抑制后,ROS释放增多,γ-H2AX以及抗氧化相关蛋白表达进一步升高,S期阻滞减轻。

亚砷酸钠对SH-SY5Y细胞周期的影响及MPST过表达的干预

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_2)对神经细胞周期的影响及MPST过表达在其中的作用。方法以空白组(正常SH-SY5Y细胞,BC)、空载对照组(NC)、过表达组(过表达MPST,OP)细胞分别经NaAsO_2处理后,采用CCK-8法、结晶紫染色法、流式细胞术和Western blot法,分别检测细胞活力、细胞贴壁力、细胞周期及p53、CDC25A、CyclinA、CDK2等蛋白表达水平。结果经NaAsO_2处理48 h后,NC组细胞存活率、细胞贴壁率明显降低,而过表达MPST细胞上述变化明显得到改善(P<0.01)。同时,NaAsO_2明显上调BC、NC组细胞S期比例和p53蛋白表达,而下调CDC25A、CyclinA及CDK2蛋白(P<0.01);然而,过表达MPST则明显拮抗上述效应(P<0.05,P<0.01)。结论 NaAsO_2通过诱导SH-SY5Y细胞S期阻滞,抑制细胞生长,而过表达MPST可拮抗NaAsO_2诱导的毒性效应。

PIASy在结直肠癌中的异常表达及其对结直肠癌细胞凋亡和周期的影响

目的:探讨PIASy(protein inhibitor of activated STAT4)在人结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中的表达情况及其对人结直肠癌细胞SW480凋亡及细胞周期的影响。方法:选取25例CRC组织及其对应癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量PCR方法检测PIASy在CRC及正常癌旁组织中的相对表达水平;运用细胞转染技术使PIASy在SW480中过表达;通过流式细胞技术检测并对比转染前后细胞凋亡及细胞周期的变化情况。结果:在25例CRC及其相对应的癌旁正常组织中,PIASy阳性的癌旁组织为9例(阳性率36%),PIASy阳性的肿瘤组织为2例(阳性率8%),2组差异具有统计学意义(P=0.041);且癌旁组织中PIASy的相对表达量明显高于对应的肿瘤组织(CRC04:P=0.016;CRC18:P=0.001);PIASy过表达的SW480细胞凋亡水平明显升高(早期凋亡:P=0.000;晚期凋亡:P=0.014),且出现S期细胞的比例明显升高(P=0.000)。结论:PIASy在CRC中存在缺失表达或低表达;外源性PIASy的过表达可诱导SW480细胞发生凋亡,并促使细胞周期出现S期阻滞。PIASy可能在CRC的发生发展中扮演着较为重要的作用。

口腔癌过表达蛋白1在结肠癌中的表达及其对细胞增殖、周期、凋亡的影响

目的研究口腔癌过表达蛋白1(oral cancer overexpressed protein 1,ORAOV1)在人结肠癌组织中的表达变化并探讨其对结肠癌细胞增殖能力、细胞周期及早期凋亡的影响。方法收集人结肠癌及癌旁组织标本,分别以qRT-PCR及Western blot检测ORAOV1在mRNA及蛋白水平的表达变化情况;采用RNAi技术获得ORAOV1低表达的Lo Vo及SW480细胞株,并使用Western blot对干扰结果进行鉴定;采用CCK-8检测干扰ORAOV1表达后两种结肠癌细胞增殖能力的变化;并采用流式细胞术检测干扰ORAOV1表达对结肠癌细胞周期及早期凋亡的影响。结果 qRT-PCR及Western blot结果分别显示结肠癌组织中的ORAOV1 mRNA及蛋白水平高于癌旁组织(P<0.05);Western blot检测证实Lo Vo及SW480细胞中ORAOV1干扰成功;在这两种结肠癌细胞株中,CCK-8检测结果显示,干扰ORAOV1可抑制细胞增殖能力;流式细胞术结果显示,干扰ORAOV1可使处于S期比例增加(P<0.05)、早期凋亡比例增加(P<0.05)。结论结肠癌组织中的ORAOV1表达增加,干扰ORAOV1可降低结肠癌细胞的增殖能力,可能与S期阻滞及细胞早期凋亡增加有关。

呋喃唑酮对Hep G2肝癌细胞增殖和细胞周期的影响论著

背景与目的：探讨呋喃唑酮（furazolidoze，FZD）对体外培养的人肝癌细胞（HepG2）的毒性机制。材料与方法：分别以不同浓度FZD（0．00、0．78、1．56、3．12、6．25、12．50、25．00、50．00μg／m1）作用HepG2细胞24h，采用噻唑蓝（MTT）比色法测定FZD对细胞增殖的影响；流式细胞术（FCM）检测细胞周期的分布；RT-PCR半定量检测S期关卡相关基因的变化。结果：随着FZD浓度的增加，HepG2细胞的存活率逐渐降低，当浓度超过6．25μg／ml时，细胞存活率下降显著（P〈0．05）；细胞生长曲线显示各染毒浓度组细胞生长速度明显减慢；细胞周期动力学显示FZD在0～3．12μg／ml范围内s期细胞比例明显增加，G-期细胞比例下降；RT-PCR结果显示FZD作用后p2J呈高表达，cyclinE,cyclinA和Cdk2表达量则不同程度下调。结论：FZD对体外培养的HepG2细胞有一定的细胞毒性且诱导s期阻滞，其增殖抑制作用可能是通过激活s期损伤关卡实现的。

氢醌染毒对红白血病细胞株K562细胞周期的影响及其机制

目的探讨氢醌(HQ)对红白血病细胞株K562细胞周期的影响及其作用机制。方法取生长至对数期时K562细胞,设空白对照组及HQ染毒低剂量组、中剂量组、高剂量组,分别以HQ终浓度为0、15、30、60μmol/L处理,各实验组间隔处理72 h后,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹法检测CDC25A、CDK2、Cyclin E、Cycli-n A、p53、p21、PCNA等细胞周期相关蛋白表达。结果空白对照组及HQ染毒低剂量组、中剂量组、高剂量组G0/G1期细胞所占比例分别为55. 90%±2. 71%、40. 16%±3. 34%、29. 97%±1. 23%、32. 84%±0. 93%,S期细胞比例分别为43. 42%±2. 61%、57. 01%±3. 50%、66. 87%±1. 77%、66. 66%±0. 31%,G2/M期细胞比例分别为0. 73%±0. 78%、3. 27%±2. 05%、4. 40%±5. 07%、0. 18%±1. 54%,与空白对照组比较,各染毒剂量组G0/G1细胞比例下降,S期细胞比例增加(P <0. 05),G2/M期细胞差异无统计学意义(P> 0. 05)。与空白对照组比较,CDC25A蛋白表达在HQ染毒各剂量组降低(P <0. 05),HQ染毒各剂量组间高剂量组<中剂量组<低剂量组(P <0. 05)。与空白对照组比较,Cyclin E、PCNA蛋白表达在HQ染毒低剂量组差异无统计学意义,在中、高剂量组表达量降低(P <0. 05),HQ染毒各剂量组间高剂量组<中剂量组<低剂量组(P <0. 05)。与空白对照组比较,p53蛋白在HQ染毒低、中剂量组表达量增高(P <0. 05),在高剂量组表达差异无统计学意义,HQ染毒各剂量组间高剂量组<中剂量组<低剂量组(P <0. 05)。CDK2、Cyclin A和p21蛋白在空白对照组与HQ染毒各剂量组间的表达差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 HQ致K562细胞周期发生S期阻滞,可能与其下调CDC25A、Cyclin E、PCNA蛋白表达有关。

4-羟基水杨酰苯胺对T淋巴细胞白血病肿瘤增殖与凋亡的影响

目的:研究4-羟基水杨酰苯胺(4-hydroxysalicylaniline,HDS)对T淋巴细胞白血病细胞Jurkat和Hut-78的抑制效果及其机制。方法:体外实验中,梯度浓度的HDS处理Jurkat和Hut-78细胞后,以CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖状况;用细胞流式术检测细胞周期变化,通过Western blot检测周期相关蛋白的表达水平;用细胞流式术检测细胞凋亡水平,通过Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平;以γ-H2AX免疫荧光染色检测DNA损伤状况,并通过Western blot检测DNA损伤相关蛋白的表达水平。体内实验中,通过皮下注射Jurkat细胞构建小鼠肿瘤模型,处理组腹腔注射HDS,对照组给予等量溶剂,记录小鼠体重与肿瘤体积变化,13 d后,取肿瘤组织,通过HE染色观察组织形态,并通过Ki67和γ-H2AX的免疫组织化学染色,分析药物对肿瘤组织增殖与DNA损伤的影响。结果:在体内和体外,证明了HDS可通过诱导Jurkat和Hut-78细胞S期细胞周期阻滞与凋亡,并且通过CHK1/CHK2信号通路的磷酸化激活,加重DNA损伤,抑制T淋巴细胞白血病肿瘤,但HDS对小鼠无明显毒性。结论:HDS可作为潜在的抗T淋巴细胞白血病药物,可抑制细胞周期,诱导细胞凋亡,并通过CHK1/CHK2信号通路影响DNA损伤修复过程。

补骨脂酚诱导人乳腺癌MCF-7细胞S期周期阻滞及机制研究

目的研究补骨脂酚对人乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用及其机制。方法采用噻唑蓝法(MTT法)考察补骨脂酚对MCF-7细胞生长的影响;采用流式细胞术检测补骨脂酚处理后细胞周期分布情况及活性氧(ROS)的产生;利用荧光显微镜观察补骨脂酚对MCF-7细胞核的影响;采用蛋白免疫印迹法检测补骨脂酚作用下MCF-7细胞凋亡、周期相关蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族蛋白的表达;引入ROS清除剂及MAPK家族蛋白抑制剂考察其在补骨脂酚作用下对MCF-7细胞生长抑制率和细胞周期相关蛋白表达的影响。结果补骨脂酚可以呈时间、剂量依赖性抑制MCF-7细胞生长,其抑制作用明显强于阳性药5-氟尿嘧啶。补骨脂酚可诱导MCF-7细胞产生ROS,同时上调p-p53及p21蛋白表达水平,下调细胞周期相关蛋白CDK2和CyclinA2表达水平,进而引起细胞发生S期阻滞。而上述影响可被ROS清除剂Tiron逆转,表明ROS参与补骨脂酚诱导的S期阻滞。加入p38MAPK抑制剂SB203580后,细胞产生的ROS水平降低,表明ROS的产生依赖于p38MAPK途径。结论补骨脂酚抑制MCF-7细胞增殖的作用与其引起细胞发生S期阻滞有关,ROS参与S期阻滞过程。

喹烯酮诱导HepG2细胞DNA复制相关基因表达水平的变化

目的:喹烯酮能诱导HepG2细胞S期阻滞,引起DNA和染色体损伤。本研究旨在对喹烯酮致HepG2细胞S期阻滞机制进行筛选和分析。方法:本研究对喹烯酮染毒后HepG2细胞和未染毒HepG2细胞进行了Agilent全基因组的表达谱芯片检测,应用Genespring软件对差异表达的基因进行相关通路分析,并使用荧光定量PCR技术对部分DNA复制相关表达差异基因进行验证。结果:在芯片点样的41000个寡聚核苷酸片段中,喹烯酮染毒HepG2后,差异表达基因共1750个,其中表达上调的基因共446个,表达下调的基因共1304个。差异表达基因通路分析结果表明,与细胞周期、MAPK通路、DNA复制及DNA修复等通路相关的基因表达差异显著。经荧光定量PCR验证,DNA复制相关基因表达变化趋势与芯片检测结果相一致。结论:DNA复制相关基因的下降导致S期DNA复制的不完全性以及DNA损伤后引起的DNA修复,使得HepG2细胞在喹烯酮染毒后引起S期阻滞。基因表达谱芯片检测分析的结果为喹烯酮致HepG2细胞S期阻滞机制的深入研究奠定了基础。

苯并(a)芘对HELF细胞S期细胞周期相关蛋白的作用

目的观察由于苯并(a)芘(Ba P)作用阻滞于S期的人胚肺成纤维细胞(HELF)的细胞周期蛋白和关卡蛋白表达水平的改变,探讨Ba P影响细胞周期的作用机制。方法 5μmol/L Ba P处理4 h,于处理后24 h收获细胞,利用流式细胞术对Ba P作用后的G0/G1期和S期细胞进行分选,Western blot方法分析相关蛋白表达水平的变化。结果Ba P作用HELF后,在总细胞群中和分选获得的S期细胞中均发现Chk1磷酸化水平升高,Cdc25A的表达水平降低;只在分选获得的S期细胞中,发现Cyclin E表达水平降低,CDK2和p53的表达水平升高。结论 Ba P通过启动Chk1-Cdc25A和p53两条信号转导通路共同作用于Cyclin E/CDK2,从而引发HELF细胞发生S期阻滞。

Chk1/2反义寡核苷酸对顺铂诱导的A549细胞生物学行为的影响

目的观察顺铂作用下A549细胞的细胞周期变化规律和Chk1、Chk2(Chk1/2)反义寡核苷酸(AsODN)对顺铂(DDP)诱导的A549细胞生物学行为的影响。方法流式细胞术SubG1法检测DDP作用下A549细胞周期和凋亡的动力学变化;蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测转染Chk1/2AsODN后Chk1/2蛋白的表达;流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC法和SubG1法检测转染Chk1/2AsODN后DDP作用下的细胞周期和凋亡变化。结果10μmol/LDDP作用12h后A549细胞出现明显的S期阻滞,Chk1/2AsODN对A549细胞中Chk1/2蛋白表达有明显抑制作用,转染Chk1/2AsODN可显著增加DDP诱导下A549细胞的凋亡率约200%～300%,而联合转染Chk1/2AsODN与单转染相比,凋亡无明显增加(P>0.05)。转染Chk1/2AsODN引起化疗增敏的机制是通过解除S期阻滞这种肿瘤细胞的自我保护机制实现的。结论Chk1/2可作为肺癌化疗药物增敏治疗的有效靶点,灭活Chk1/2基因可以显著增强肿瘤细胞化疗的敏感性。

tRNA体外抑制L929细胞生长的作用观察

目的:探讨tRNA对不同哺乳动物细胞生长的影响。方法:L929细胞、NIH3T3细胞、MCF-7细胞和PC12细胞接种96孔板,37℃,5%CO2细胞培养箱中培养4h后,直接加入酵母tRNA,继续培养一定时间后采用MTT法检测细胞生长情况;将200μg/ml酵母tRNA加入至L929细胞中,在不同时间点观察细胞形态并收集细胞进行细胞流式分析。结果:tRNA对L929细胞有特异的抑制作用,并且表现出一定的剂量依赖性;tRNA处理后L929细胞与正常细胞相比,形态明显变大,而且突起增长;流式细胞仪分析进一步发现tRNA使细胞阻滞于S期。结论:tRNA的这种细胞生长的抑制效应可能是通过其一些小的降解片段发挥的,提示tRNA或者其降解片段可能具有调控L929细胞增殖的重要作用。

ICI118,551诱导胰腺癌细胞凋亡及其机制的实验研究

目的研究ICI118,551通过调控细胞信号通路抑制抗凋亡分子的表达所产生的促凋亡效应及其机制.方法应用β2受体阻滞剂ICI118,551和β1受体阻滞剂美托洛尔干预胰腺癌细胞,通过电镜检测细胞凋亡、Hoechst 33324荧光染色检测细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞凋亡、Western blot等技术检测β2受体阻滞剂对ERK和Akt磷酸化改变,调节细胞凋亡和细胞周期下游相关分子caspase-3、caspase-9、Bcl-2及Bax的表达.结果 ICI118,551可显著诱导胰腺癌细胞凋亡,细胞凋亡率显著大于美托洛尔组(P<0.05);ICI118,551干预组抑制Akt和ERK的磷酸化,并激活Bax、caspase-3和caspase-9活性片段的表达,同时抑制Bcl-2的表达.结论β2受体阻滞剂可以阻断相关细胞通路而进一步抑制下游相关促侵袭和抗凋亡分子的表达,并产生促凋亡效应.

MicroRNA-10a通过靶向作用E2F3抑制肝癌细胞的增殖

目的：探讨微小RNA-10a（microRNA-10a,miR-10a）对肝癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法：收集广西医科大学附属肿瘤医院肿瘤科2001年10月至2005年7月144例肝癌患者手术切除的肝癌组织和癌旁组织（距癌灶组织边缘2~5 cm）标本,Real-time PCR法分析144例肝癌组织及癌旁组织中miR-10a的表达量。在肝癌细胞（QGY-7701、Huh7、PCL/PRF/5）中转染miR-10a模拟物,Real-time PCR法检测转染后细胞miR-10a的表达水平;CCK-8法检测过表达miR-10a的肝癌细胞的增殖水平,流式细胞术检测过表达miR-10a的肝癌细胞的凋亡和细胞周期;生物信息学预测并以Western blotting检测过表达miR-10a的肝癌细胞中转录因子E2F3的表达量。结果：与癌旁组织相比,肝癌组织中的miR-10a显著低表达[（-9.89±1.68）vs（-7.84±1.97）,P=0.000]。转染miR-10a模拟物后肝癌细胞系中miR-10a的表达量是转染对照小RNA组或空白组细胞的16倍左右。过表达miR-10a可显著抑制7种肝癌细胞（QGY-7701、QGY-7703、Huh7、PCL/PRF/5、HepG2、BeL-7402、SMMC-7721）的增殖（均P〈0.05）,并引起肝癌细胞细胞周期G1/S期阻滞,但并不能诱导肝癌细胞发生凋亡。生物信息学预测显示E2F3是miR-10a可能的靶分子,Western blotting检测显示过表达miR-10a可明显抑制肝癌细胞中E2F3的表达[（0.50±0.12）vs（0.79±0.21）,P〈0.05]。结论：人肝癌组织中低表达miR-10a,转染miR-10a模拟物后多种肝癌细胞的增殖均受到明显抑制,其机制可能与miR-10a靶向作用转录因子E2F3并阻滞肝癌细胞细胞周期于G1/S期有关。

丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的信号通路及对AQP3基因表达影响的研究

目的:探讨丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡过程的分子机理及其对水通道蛋白AQP3基因表达的影响。方法:MTT法检测不同浓度的丁酸钠对结肠癌HT-29细胞生长的影响;RT-PCR检测不同浓度的丁酸钠对细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4、p16和AQP3的基因表达水平,同时使用流式细胞仪检测细胞周期。结果:加入浓度超过2.5mmol/L的丁酸钠后,结肠癌HT-29细胞生长受到抑制,Cyclin D1、CDK4和AQP3的表达水平下降,p16的表达水平上调,细胞阻滞于G1/S期。结论:浓度超过2.5mmol/L的丁酸钠可以诱导结肠癌HT-29细胞凋亡,使其细胞周期阻滞于G1/S期,且这种诱导作用是剂量依赖型的,其分子通路可能是通过p16-Cyclin D1/CDK4这条信号途径,在此过程中,伴随着AQP3的基因表达水平降低。