S腺苷蛋氨酸对肝癌细胞中GADD45β基因的表达诱导及其机制研究

目的初步明确肝癌细胞中特异性表达缺失的GADD4513基因近端启动子活性调控中心，并探讨S腺苷蛋氨酸对肝癌细胞HepG2中GADD4513表达的影响及可能机制。方法以30-50个碱基的间隔，于体外人工合成GADD45β近端启动子序列（-618～-520），分别插入pGL3 basic荧光素表达质粒的荧光基因上游，以电穿孔法转染HepG2，根据启动子活性强度结合TRANSFAC数据库，分析可能存在的转录调节因子结合位点；实时荧光定量PCR比较S腺苷蛋氨酸作用前后HepG2细胞GADD45β表达，并在此基础上进一步比较S腺苷蛋氨酸对GADD45β启动子活性的诱导作用，探讨其可能作用机制，并为GADD45β近端启动子研究提供功能性证据。结果GADD45β近端启动子中含有3个NF-κB转录调节因子与启动子结合位点（-602／～593、-581／～572、-537／-528）；S腺苷蛋氨酸能明显诱导HepG2中GADD45β的表达，并呈现出剂量-效应的正相关关系，同时其能相应明显诱导NF-κB的启动子活性。结论S腺苷蛋氨酸能明显诱导肝癌细胞中特异性缺失的GADD45β基因表达，增强转录调节因子NF-κB的活性水平是其可能的作用机制，该研究为S腺苷蛋氨酸的肝脏保护作用提供了新的实验依据。

S腺苷蛋氨酸与氯喹联合应用对肝癌细胞急性缺血／缺氧过程中生物学特性的影响

目的研究S腺苷蛋氨酸（SAMe）对急性缺血／缺氧过程中肝癌细胞HepG2生物学特性的作用，并通过应用氯喹（CQ）抑制自噬探讨其可能机制。方法用实时PCR检测自噬特异性基因（Beclin1）表达的变化。吖啶橙染色后，采用荧光显微镜对自噬进行定性观察。CCK8法检测HepG2细胞生存率。Westernblot检测蛋白LC3的变化。用AnnexinV／PI流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果缺血／缺氧可以促进HepG2细胞生长，细胞生存率比空白对照组增加了20％～30％。sAMe可诱导HepG2细胞自噬的表达，自噬在荧光强度和Beclin1基因水平分别比空白对照组增强约3．2倍和3．5倍。SAMe对HepG2细胞具有显著的抑制作用，这种抑制作用在缺血／缺氧环境中更加明显。经SAMe处理后，正常和缺血／缺氧环境的细胞生存率与空白对照组相比分别下降了30％和70％。与空白对照组相比，细胞经SAMe处理后，凋亡比例增加约24％。细胞经SAMe预处理，再进行缺血缺氧后，凋亡比例增加约40％。抑制自噬后，细胞生存率下降15％～30％，细胞凋亡增加7％～16％。结论在SAMe抑制HepG2细胞生长过程中，自噬对细胞有一定的保护作用。

S-腺苷-L-蛋氨酸的分离纯化及其稳定产品的制备

目的 从酵母萃取液中分离纯化S-腺苷-L-蛋氨酸(SAM)并制备其稳定的盐产品。方法 以苦味酸作为选择性沉淀剂,结合有机溶剂结晶方法沉淀SAM盐产品。结果 确定了影响各步得率的关键因素和最适条件。结论 硫酸盐的制备得率(从酵母到成品)可达60％以上,而硫酸、对甲苯磺酸双盐的得率可达50％以上。

S2腺苷蛋氨酸对重度妊娠期肝内胆汁淤积症的疗效

目的探讨S2腺苷蛋氨酸对重度妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的疗效及对围生儿结局的影响。方法将69例重度ICP患者分为治疗组(33例)和对照组(36例)。治疗组用S2腺苷蛋氨酸治疗。比较两组皮肤瘙痒症状、总胆红素(TB)、谷丙转氨酶(ALT)、CG和围生儿结局的差异。结果治疗组TB、ALT、CG,分别由治疗前的(18.45±20.14)μmol/L(、166.40±166.59)U/L、(42.33±23.93)mg/L,下降为治疗后的(11.62±8.86)μmol/L(、47.78±39.47)U/L(、16.13±10.63)mg/L(P<0.05)。治疗组治疗后的ALT、CG值明显降低于对照组(95.50±97.89)U/L,(32.66±28.65)mg/L(P<0.05);治疗组早产率、新生儿窒息率、围生儿病死率低于对照组(P<0.05)。结论 S2腺苷蛋氨酸对ICP疗效可靠,安全性良好。

思美泰在梗阻性黄疸患者中的应用研究

目的观察思美泰对梗阻性黄疸患者术后的保肝减黄作用。方法回顾性分析西安市中心医院2016年1月至2017年3月收治的43例梗阻性黄疸患者,随机分为治疗组(20例)和对照组(23例)。对照组患者术后给予肌酐和维生素C等基础保肝药物治疗,治疗组在上述用药基础上采用思美泰治疗,治疗两组患者的临床效果。结果治疗组治疗总有效率为90.00%,明显高于对照组的43.48%(P<0.05)。治疗5、10、14 d,治疗组TBIL、DBIL、ALT、AST、ALP水平均明显降低,且治疗组均低于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异不显著(P>0.05)。结论思美泰应用于梗阻性黄疸患者治疗中安全有效,可以改善梗阻性黄疸患者的临床症状和体征及肝功能,降低黄疸指数,值得推广应用。

p53对肝癌细胞中GADD45β表达诱导的影响及其调控机制

目的 观察p53对肝癌细胞GADD45β诱导的影响并探讨其机制.方法 转染p53全序列建立Hep3B^＋p53;比较S腺苷蛋氨酸对Hep3B^＋p53的GADD45β表达诱导及其对近端启动子活性影响;比较DNA合成能力和细胞克隆形成能力及其对Caspase基因的影响.结果 Hep3B^＋p53可以稳定表达p53蛋白;p53转染能使S腺苷蛋氨酸对Hep3B^＋p53中GADD45β的表达诱导由0.0089增加至0.0192和0.0371,同时使启动子中3个核因子（NF）-κB活性分别增强1倍、50%和25%,Hep3B^＋p53的DNA合成能力降至80.99%和42.53%,细胞克隆形成能力的抑制率为15.04%和90.42%;Hep3B^＋p53的Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的活性无明显变化.结论 p53在肝癌细胞的GADD45β表达诱导中有重要作用,增强转录调节因子的表达水平是其可能的作用机制.