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猪丁型冠状病毒截短S蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立与应用
1
作者
秦秋英
张政
+6 位作者
黄夏玲
洪大林
隆美金
陈樱
韦祖樟
黄伟坚
欧阳康
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期48-55,共8页
为建立快速、高效检测猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)的血清学方法,构建了pET-32a-S-S1b重组质粒,通过原核表达获得重组S1b蛋白,以此为包被抗原建立了检测血清中PDCoV IgA抗体的间接ELISA方法,对该检测方法的反应条件...
为建立快速、高效检测猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)的血清学方法,构建了pET-32a-S-S1b重组质粒,通过原核表达获得重组S1b蛋白,以此为包被抗原建立了检测血清中PDCoV IgA抗体的间接ELISA方法,对该检测方法的反应条件进行优化,验证了其特异性、敏感性和重复性等。结果显示:重组S1b蛋白呈包涵体表达,大小为34.7 ku,反应原性良好;建立的间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:250 ng/孔抗原4℃过夜包被,10 g/L BSA 37℃封闭2 h,待检血清1∶200稀释37℃孵育45 min,二抗1∶10000稀释37℃孵育1 h,显色时间为10 min。测定24份阴性血清,确定临界值为0.388。检测阳性血清敏感度为1∶1600;批间和批内重复试验的变异系数均小于10%;本方法特异性高,与猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、非洲猪瘟病毒、猪圆环病毒和猪肠病毒标准血清无交叉反应。选取30份血清,与Western-blot检测结果比较,该间接ELISA的符合率为96.66%。应用该方法对486份临床血清样品进行检测,阳性率为32.72%。本研究中建立的方法为PDCoV的防控提供了技术支持。
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关键词
猪丁型冠状病毒
s蛋白s1b
间接ELI
s
A
临床检测
原文传递
题名
猪丁型冠状病毒截短S蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立与应用
1
作者
秦秋英
张政
黄夏玲
洪大林
隆美金
陈樱
韦祖樟
黄伟坚
欧阳康
机构
广西大学动物科学技术学院广西高校动物疫病预防与控制重点实验室
广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心
广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期48-55,共8页
基金
广西重点研发计划项目(桂科AB23026082)
大学生创新创业项目(202210593121)
+1 种基金
广西自然科学基金项目(2021GXNSFAA196067)
广西大学巴马产教融合研究院专项(巴人科20220015)。
文摘
为建立快速、高效检测猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)的血清学方法,构建了pET-32a-S-S1b重组质粒,通过原核表达获得重组S1b蛋白,以此为包被抗原建立了检测血清中PDCoV IgA抗体的间接ELISA方法,对该检测方法的反应条件进行优化,验证了其特异性、敏感性和重复性等。结果显示:重组S1b蛋白呈包涵体表达,大小为34.7 ku,反应原性良好;建立的间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:250 ng/孔抗原4℃过夜包被,10 g/L BSA 37℃封闭2 h,待检血清1∶200稀释37℃孵育45 min,二抗1∶10000稀释37℃孵育1 h,显色时间为10 min。测定24份阴性血清,确定临界值为0.388。检测阳性血清敏感度为1∶1600;批间和批内重复试验的变异系数均小于10%;本方法特异性高,与猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、非洲猪瘟病毒、猪圆环病毒和猪肠病毒标准血清无交叉反应。选取30份血清,与Western-blot检测结果比较,该间接ELISA的符合率为96.66%。应用该方法对486份临床血清样品进行检测,阳性率为32.72%。本研究中建立的方法为PDCoV的防控提供了技术支持。
关键词
猪丁型冠状病毒
s蛋白s1b
间接ELI
s
A
临床检测
Keywords
porcine deltacoronaviru
s
s
protein
s
1
b
indirect ELI
s
A
clinical te
s
ting
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪丁型冠状病毒截短S蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立与应用
秦秋英
张政
黄夏玲
洪大林
隆美金
陈樱
韦祖樟
黄伟坚
欧阳康
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
原文传递
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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