圈养高山兀鹫肠道微生物分离鉴定与抗生素耐药性分析

高山兀鹫是国家Ⅱ级保护鸟类,被世界自然保护联盟列入濒危物种红色名录。本文对圈养高山兀鹫肠道微生物进行分离与培养、16S rRNA基因扩增与测序、抗生素耐药性分析试验。结果表明:经鉴定,分离出的菌株隶属于2门、8属、9种,分别是弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、太平洋芽孢杆菌(Bacillus pacificus)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、蜂房哈夫尼亚菌(Hafnia alvei)、豪氏变形杆菌(Proteus hauseri)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)、运动肉杆菌(Carnobacterium mobile)、福氏志贺氏菌(Shigella flexneri),这9种菌株对部分抗生素表现出耐药性,其中,运动肉杆菌、粪肠球菌和普通变形杆菌可耐受大多数抗生素,福氏志贺氏菌可耐受的抗生素种类较少。本文研究结果可为高山兀鹫的保护性人工养殖提供参考。

京白梨等品种S基因型鉴定及新基因S_(28)和S_(30)的核苷酸序列分析

根据梨S基因高度保守区C1和C3区,设计1对引物P1和P2,对梨品种的基因组DNA进行S基因特异扩增、克隆、测序,并在GenBank中BLAST比较,确定S基因特异性片段,对京白梨等6个供试自交不亲和品种的S基因型比对结果为:白梨中的‘库尔勒香梨’为S21S28,‘苹果梨’为S17S19;砂梨中的‘台湾蜜梨’为S11S22;西洋梨中的‘葫芦梨’为SaSb;秋子梨中的‘京白’为S16S30,‘早梨18’为S4S28。其中S28和S30为首次登录的新S基因,在GenBank的登录号分别为AY562394(库尔勒香梨)和AY876945(京白)。

‘翠冠’梨2个后代品种S基因型鉴定及杂交亲和性强度观察

以‘西子绿’ב翠冠’梨组合的2个F1代品种‘初夏绿’与‘翠玉’为材料,利用S基因PCR-RFLP(聚合酶链反应-限制性片段长度多态性)检测技术与PCR产物转质粒测序技术鉴定其基因型,并综合应用花粉原位萌发动态的荧光显微观察与田间授粉试验研究其杂交亲和性强度。结果表明:‘初夏绿’与‘翠玉’的S基因型皆为S3S4;‘初夏绿’和‘翠玉’的自交不亲和强度中等,二者相互间授粉不完全亲和,而与‘翠冠’间的相互授粉均表现为完全亲和。

11个延边地区栽培梨品种的S基因型鉴定

鉴定梨品种的S基因型可为合理配置授粉树、杂交亲本选配提供理论依据。为鉴定11个延边地区栽培梨品种的S基因型,利用梨的自交不亲和基因(S-RNase)特异引物FTQQYQ和anti-IIWPNV,对11个梨品种的基因组DNA进行S基因特异扩增,并对扩增片段进行回收、克隆、测序,使用生物信息学软件对各序列进行分析和同源性搜索比对,最终确定各品种的S基因型。结果分别是:苹果梨、东宁五号大梨、延光梨均为S1S17;苹博香为S1S8m;早酥为S1Sd;延边谢花甜为S17S31;尖把梨为S12S30;延边明月梨为S3Se;小香水芽变为SeSx;朝鲜洋梨为SeS3;身不知为S5Sd。

利用酶联免疫反应鉴定梨树S基因型

梨是蔷薇科植物,具有典型的配子体自交不亲和性。获取各品种S基因型是果树生产中一项重要内容。现有S基因型鉴定方法存在一些缺陷。利用通用引物扩增S-RNase高变区,结合单链核苷酸探针杂交、酶联免疫反应,成功鉴定8个品种的7个S基因型。PCR酶联免疫法结果显示爱宕(S2S5),爱甘水(S4S5),二十世纪(S2S4),丰水(S3S5),今村秋(S1S6),新高(S3S9)和幸水(S4S5)7个品种都能与各自对应的S基因型探针杂交结合,颜色反应明显,无明显假阳性反应。秋荣(S4smS5)S4sm-RNase基因在花柱中不表达,只在秋荣花柱中检测到S5-RNase基因信号。与目前已有的方法相比,PCR酶联免疫法操作简单,结果可靠,能够广泛用于梨树S基因型鉴定。

秋子梨等九个品种S基因型的鉴定

根据梨S基因高度保守区设计兼并引物,对各秋子梨品种的基因组进行S基因特异性扩增、连接、转化并测序,GenBank中比较后确定各品种的S基因型。9个供试品种的S基因型分别为:秋子梨中的‘寒香’为S36Sx,‘苹香’为S1S31,‘南果梨’为S34S34,‘金香水’为S1Si,‘延边大香水’为S31S36,‘寒红’为S27S34,‘小香水’为S29S34,‘花盖王’为S31S31S34S34,白梨中的‘锦丰’为S19S34。

高寒草地燕麦根际解植酸磷促生菌鉴定及其优势菌假单胞菌属菌株功能特性

旨为从高寒草地燕麦根际定向筛选解植酸磷微生物资源,筛选促生潜力菌株,分析植酸酶编码基因。采用国际植物研究所磷酸盐生长培养基(NBRIP)分离及筛选菌株,16S rRNA基因鉴定其分类地位,并测定菌株植酸酶活性及促生特性,结合简并PCR和高效热不对称交错PCR(hiTAIL-PCR)扩增植酸酶基因完整序列,并进行生物信息学分析及异源表达。共获得107株菌株,其中51株能在NBRIP培养基上形成清晰溶磷圈,鉴定为2门10科11属,以假单胞菌(Pseudomonas)为优势菌。14株不同种假单胞菌均检测出植酸酶活性,具有溶解有机/无机磷、分泌IAA(3-indoleacetic acid)、固氮及拮抗植物病原菌的促生活性。获得了3株菌株的植酸酶(PHY65、PHY101和PHY131)序列,预测为β-螺旋植酸酶(β-propeller phytases,BPPhy)家族蛋白,其中重组PHY65的比活性为28.2 U/mg。研究结果可为解磷生物菌剂的研发与利用提供优良菌株资源,为植酸酶的生产应用提供理论基础。

豪猪腹泻的细菌性病原分离及16S rRNA的鉴定

为弄清引起豪猪(Hystrix brachyura)腹泻的细菌性病因及其耐药性。通过镜检、鉴别培养、生化试验、药敏试验和16S rRNA鉴定,对豪猪22份腹泻样品进行分析。结果检出致病性大肠杆菌(Escherichia coli)5份,阳性率为22.73%;检出沙门氏菌(Salmonella)12份,阳性率为54.55%;混合感染阳性率为45.45%。沙门氏菌和致病性大肠杆菌混合感染是导致豪猪腹泻的主要原因。混合感染病原菌对阿米卡星、壮观霉素高度敏感,对庆大霉素和环丙沙星中度敏感,对其余药剂不敏感,表明其对多种抗生素产生了耐药性。

紫花苜蓿根瘤微生物组成及16S rDNA鉴定

目的;鉴定环青海湖地区紫花苜蓿根瘤内细菌组成的多样性。方法:试验以环青海湖地区紫花苜蓿根瘤作为供试材料,刚果红YMA培养基通过平板划线法进行细菌培养,进行分子鉴定。结果:共分离出14株菌株,分别属于苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis strain)、假单胞菌(Pseudomonas kilonesis)以及桃色欧文氏菌(Erwinia persicina)。结论:表明环青海湖地区紫花苜蓿根瘤内细菌具有多样性,本研究不仅拓展了紫花苜蓿根瘤内细菌多样性的研究方法,还为寄主植物根际促生菌的研究提供了分析思路。

木榄耐盐内生细菌分离及其16S rDNA鉴定

[目的]从木榄根茎叶中分离筛选鉴定耐盐碱菌株。[方法]以不同盐浓度的LB培养基分离筛选木榄根茎叶中耐盐内生细菌,对其进行生理生化分析和分子鉴定。[结果]从根茎叶中初步分离出耐盐的内生细菌24株,经革兰氏染色、过氧化氢试验、吲哚试验与甲基红试验均为阳性,淀粉水解酶有1株细菌为阴性。提取各菌株的DNA并扩增其16S rDNA序列,以HinfⅠ等4种酶进行酶切,选择不同类型酶切结果的代表菌株测序,BLAST比对分析并利用MEGA软件建立发育树,初步推断出,所分离的内生细菌分别为越南芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、白翎芽孢杆菌和巴氏葡萄球菌。[结论]该研究为培育耐盐农作物提供了行之有效的技术理论基础。

硒砂瓜根际促生菌筛选鉴定及其促生效应研究

研究旨在筛选获得硒砂瓜根际促生菌,为硒砂瓜微生物肥料的开发利用提供土著菌种资源和理论基础。以宁夏地区特有经济作物硒砂瓜根际土壤为材料,采用稀释平板法分离土著细菌,对筛选到的50株菌进行溶磷、产铁载体、产吲哚乙酸(IAA)以及固氮能力评价,结合16S rDNA序列分析对优良促生菌进行鉴定,并选定9株优良促生菌,研究其对硒砂瓜幼苗的促生作用。结果显示,50株菌中有22株解磷菌株的溶磷量在7.12~64.54 mg·L^(-1)之间;有30株具有产铁载体能力的菌株,定量结果表明其中11株为高产铁载体菌株(A/A r<0.5);有18株具有分泌IAA能力的菌株,分泌量在3.70~58.94 mg·L^(-1)之间;有9株菌在阿须贝平板上经5次传代仍能正常生长,初步确定其具有固氮能力。筛选得到的20株优良促生菌分别隶属于芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、肠杆菌属(Enterobacter)、不动杆菌属(Acinetobacter)、变形杆菌属(Proteus),其中6株菌兼具以上4种促生活性,11株菌兼具解磷、产铁载体、分泌IAA促生功能。接种促生菌后,对硒砂瓜幼苗的胚根、胚轴、鲜质量及干质量等指标均有促进作用。

拮抗香蕉枯萎病菌的红树林土壤放线菌筛选与分子鉴定

香蕉枯萎病是目前香蕉产业面临的毁灭性病害,已成为香蕉生产和研究领域最为关注的热点。为发掘香蕉枯萎病的生防菌资源,利用从广西北部湾海域红树林根际土壤中分离得到的129株放线菌,以广西普遍发生且危害严重的香蕉枯萎病菌4号生理小种(FOC4)为供试菌,采用平板对峙法初筛和牛津杯法复筛筛选拮抗菌株,经初筛获得具有明显抑菌效果的放线菌12株。经复筛、反复转接和对峙培养,筛选出拮抗效果好、抑菌活性稳定的菌株8株。通过16S rRNA基因序列分析发现,除BBWM160归属小单胞菌属菌株外,其余7株均属链霉菌属菌株。

大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定

目的建立一套简单易行有效的骨髓间充质干细胞(BMSCs)的培养、纯化、鉴定的方案,初步了解BMSCs的基本性状和功能特点。方法取4周龄雄性SD大鼠,全骨髓贴壁培养BMSCs,对细胞相关的性状进行观察及分析,流式鉴定表面抗原,诱导其成骨、成脂分化,并进行染色鉴定等。结果流式检测结果 CD29、CD90呈阳性反应,CD34、CD45呈阴性反应,成骨诱导分化后茜素红染色呈阳性反应,成脂诱导分化后油红染色呈阳性反应。结论全骨髓培养法是一种相对简单易行的BMSCs分离纯化的方法,可获得纯度高,活性好,性状均一的BMSCs。

一株高氨氮去除能力菌株的分离筛选及鉴定

为研究利用微生物方法解决养殖水体中氨氮污染的问题,从水产养殖环境中分离出31株氨氮去除菌,并从中筛选出具有较强氨氮去除能力的菌株AD-8,对其脱氮能力进行测定。结果表明,在培养基中氨氮浓度高达200mg/L时,AD-8菌株对其去除率均达86%以上,15℃下,48 h AD-8对氨氮的去除率可以达到91.2%;在模拟养殖水体中,AD-8氨氮去除率也可达90%。通过形态学特性、生理生化鉴定及16S rDNA序列分析,菌株AD-8初步鉴定为嗜碱假单胞菌(Pseudomonas alcaliphila)。

鹅源产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验

为了探究鹅源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)的生物学特性,从临床送诊的病死鹅肠道分离出4株疑似产气荚膜梭菌,菌株纯化后分别进行革兰染色、生化鉴定、16 S rDNA序列分析、分子分型和药敏试验。结果显示:4株分离菌为革兰阳性菌,仅在厌氧条件下生长,且出现典型双溶血环菌落,16 S rDNA鉴定为产气荚膜梭菌,分别命名Cp1、Cp2、Cp3和Cp4;经多重PCR鉴定,4株菌仅含α毒素,无其他毒素,故属于A型产气荚膜梭菌;药敏结果显示4株菌对链霉素、庆大霉素、复方新诺明、多黏菌素B等多种抗生素耐药,对阿莫西林、头孢曲松钠、环丙沙星、氟苯尼考等敏感。综上所述,从临床病鹅分离到4株A型Cp,为鹅源Cp的生物特性研究提供了参考材料。

拮抗大肠杆菌的海洋微生物的筛选与鉴定

该研究采用涂布平板法、对峙培养法及琼脂扩散法从北冰洋沉积物样品中分离、筛选出对大肠杆菌(Escherichia coli)具有良好拮抗作用的一株菌株,通过对其菌株形态进行观察、分析其生理生化试验结果以及进行分子生物学技术检测,进行分类鉴定,并进行了抑菌谱研究。结果表明,从北冰洋沉积物样品中共分离纯化出97株菌株,其中21株菌株对大肠杆菌有一定的拮抗作用,且1株菌株拮抗效果最好,编号为105号,平均抑菌圈直径为(19.3±1.0)mm。该菌株被鉴定为萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus),抗菌谱较为广泛,对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌都具有抑制作用。

圈养白额雁约翰逊不动杆菌分离鉴定与药敏分析

不动杆菌通常是一种机会致病菌,近年来有不少水产动物、畜禽以及野生动物感染不动杆菌致病的报道,但野生禽类感染的报道较少。2018年在江西省某动物园患病的白额雁脏器中分离到可疑致病菌株AJ-JX01,经纯化培养、染色镜检、细菌16S rDNA基因片段PCR扩增与测序分析,初步判断为约翰逊不动杆菌。为了解该菌对药物的敏感性,采用扩散纸片法药敏试验发现分离菌株AJ-JX01对丁胺卡那、四环素、阿奇霉素、环丙沙星和氧氟沙星等抗生素敏感,对青霉素、林可霉素和杆菌肽耐药。

3株猪源多动物链球菌的分离与鉴定

对3例不同时间送检的病猪的肝、肾脏、肺脏和皮下水肿液进行细菌分离,纯化后分别对其进行革兰染色、生化试验、16S rDNA基因序列分析进行鉴定,小鼠攻毒试验确定分离菌株毒性,药敏试验分析药物敏感性。结果表明:分离菌株为革兰阳性球菌;可以发酵蔗糖、乳糖、麦芽糖等,不能发酵阿拉伯糖、山梨醇、蜜二糖;16S rDNA鉴定结果为多动物链球菌(Streptococcus pluranimalium)。攻毒试验可致小鼠死亡,表明该菌具有强毒性。药敏结果表明,该分离菌株对诺氟沙星、复方新诺明、妥布霉素、庆大霉素等耐药,对阿莫西林、头孢曲松钠、美洛西林等敏感。

猪粪便中丁酸梭菌的分离与鉴定

试验以从河南省鄢陵县农户肉猪养殖场中采集的新鲜猪粪为样本,经过强化梭菌培养基(RCM)富集和TSN选择性琼脂培养基进行分离筛选和生理生化鉴定,得到2株菌株,分别命名为B1和B3。通过提取菌株DNA,并对16S rDNA序列进行扩增和测序,根据其同源性亲疏建立系统发育树,二者均被鉴定均为丁酸梭菌(Clostridium butyricum)。对2株菌的发酵特性进行测定,分析发酵液中菌浓度、pH值、还原糖、乙酸和丁酸含量随时间的变化。结果表明,B1和B3菌株在葡萄糖利用和乙酸的代谢水平上存在差异。

感染犬耳的杜马奈瑟菌株的分离与鉴定

2019年9月,扬州大学动物医院接诊1只耳部感染的患犬。为了探明病因,本试验取患犬耳道分泌物进行细菌分离,对分离出的1株细菌进行革兰染色、生化试验、16S rDNA基因序列分析、小鼠人工感染试验和药敏试验。结果显示:分离菌株为革兰阴性双球菌,可以发酵葡萄糖、麦芽糖,不能发酵蔗糖,能还原硝酸盐,没有运动能力;经16S rDNA基因序列分析为杜马奈瑟菌(Neisseria dumasiana)。人工感染试验结果显示,分离菌株可引起小鼠炎症反应和死亡,表明其感染能力较强。药敏试验结果显示,分离菌株对头孢曲松钠、美洛西林、头孢噻肟、头孢哌酮等药物敏感,对环丙沙星表现出中介。本试验从犬的耳患病处分离出1株杜马奈瑟菌,可用敏感药物头孢曲松钠内外兼用进行治疗。