ω-转氨酶的筛选和异源表达用于制备S-甲氧基异丙胺

根据转氨酶家族进化分类和底物特异性,构建一个包含36个ω-转氨酶的酶库;将酶库中的基因克隆进大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)中进行异源重组表达,考察酶蛋白表达水平并测定相应的酶活以及对映体选择性。通过筛选,获得最佳的ω-转氨酶为来源于巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium的ω-转氨酶BmeTA,其重组表达粗酶活为2.0 U/mL,纯酶比活为9.5 U/mg蛋白;酶学性质表征发现其最适温度为35℃,最适pH为8.0。在此基础上进一步优化其催化反应工艺条件,在20 g/L加酶量、0.5 mmol/L辅酶添加量以及1.4的氨基供体/氨基受体比例条件下,反应18 h获得450 mmol/L的S-甲氧基异丙胺,原料转化率达到90%,为实现生物催化制备S-甲氧基异丙胺的工业化奠定基础。

S-泮托拉唑钠的合成工艺改进

用2-甲基-3、4-二甲氧基吡啶为原料,经氯化亚砜氯化后得2-氯甲基-3、4-二甲氧基吡啶盐酸盐,再和5-二氟甲氧基-2-硫基-1H-苯并咪唑进行缩合反应,再经不对称氧化得S-泮托拉唑,再经氢氧化钠成盐后得S-泮托拉唑钠。

S-(-)-泮托拉唑钠的合成研究

目的改进S-(-)-泮托拉唑钠的合成方法。方法使用5-二氟甲氧基-[[(3,4-二甲氧基-2-吡啶基)甲基]硫基]-1 H-苯并咪唑与过氧化羟基异丙苯反应制得S-(-)-泮托拉唑,再与氢氧化钠反应合成产品S-(-)-泮托拉唑钠。结果与结论通过该法得到了目标产物S-(-)-泮托拉唑钠,且该法操作简单。

帕金森病患者免疫球蛋白、Th9亚群水平变化及其与IGF-1、S-100B蛋白的相关性

目的:研究帕金森病(PD)患者免疫球蛋白(IgG、IgA和IgM)、辅助性T细胞亚群Th9水平变化及其与胰岛素生长因子-1(IGF-1)、S-100B蛋白的相关性。方法:选取2020年12月至2022年12月期间在河北省中医院确诊的108例PD患者,将其作为研究组,并根据患者病变程度分为轻度组(35例)、中度组(44例)和重度组(29例);另选108例健康成人作为对照组。对比研究组和对照组免疫球蛋白和Th9亚群水平,以及轻度组、中度组及重度组免疫球蛋白、Th9亚群、IGF-1和S-100B蛋白水平,采用Pearson相关性分析免疫球蛋白、Th9亚群和IGF-1、S-100B蛋白的相关性。采用Spearman相关性分析PD患者疾病程度和所有差异指标间的相关性。结果:研究组IgM水平较对照组低,且重度组低于中度组,中度组低于轻度组(P<0.05);研究组IgG、IgA、IL-9和Th9亚群水平较对照组高,且重度组高于中度组,中度组高于轻度组(P<0.05)。重度组IGF-1水平低于中度组,中度组低于轻度组;重度组S-100B蛋白水平高于中度组,中度组高于轻度组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,PD患者IgM水平与IGF-1水平呈正相关,与S-100B蛋白水平呈负相关;IgG、IgA、IL-9和Th9亚群水平均与IGF-1水平呈负相关,与S-100B蛋白水平呈正相关(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,PD患者疾病程度与IgM、IGF-1水平呈负相关,与S-100B蛋白、IgG、IgA、IL-9和Th9亚群水平呈正相关(P<0.05)。结论:PD患者IgM水平降低,IgG、IgA、Th9亚群水平升高,且其水平变化与IGF-1、S-100B明显相关,可以用于评估病情的严重程度。

S-烯丙基巯基半胱氨酸促进CD8+T细胞杀伤功能的机制研究

目的探究S-烯丙基巯基半胱氨酸(S-allylmercaptocysteine,SAMC)对CD8^(+)T细胞杀伤鼻咽癌细胞功能的影响及机制。方法将人鼻咽癌细胞HK-1和C666-1与SAMC共培养,分为0、25、50、100μmol/L SAMC组,Western blot检测肿瘤细胞程序性死亡配体-1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)表达。CD8^(+)T细胞分别与HK-1和C666-1细胞以10∶1的比例共培养并加入0、25、50、100μmol/L SAMC,检测CD8^(+)T对HK-1和C666-1的杀伤能力,酶联免疫法(ELISA)检测干扰素(INF-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,构建鼻咽细胞HK-1的小鼠皮下移植瘤模型,分为对照组、CD8^(+)T细胞组、SAMC组、SAMC+CD8^(+)T细胞组,各组小鼠治疗期间测量瘤体积,治疗结束后取小鼠肿瘤组织,Western blot检测肿瘤组织中PD-L1表达,ELISA检测小鼠血清INF-γ和TNF-α浓度。结果相比于0μmol/L SAMC组,25、50、100μmol/L SAMC组HK-1和C666-1细胞PD-L1表达均显著下调(P<0.05),相比于0μmol/L SAMC+CD8^(+)T细胞组,25、50、100μmol/L SAMC+CD8^(+)T细胞组HK-1和C666-1细胞培养上清中INF-γ和TNF-α浓度均能显著增加,HK-1和C666-1细胞裂解率显著增加(P<0.01)。相比于对照组,CD8^(+)T细胞组和SAMC+CD8^(+)T细胞组小鼠瘤体积和瘤重显著下降(P<0.05),小鼠血清INF-γ和TNF-α浓度显著增加,相比于CD8^(+)T细胞组,SAMC+CD8^(+)T细胞组小鼠瘤体积和瘤重显著下降(P<0.05),小鼠血清INF-γ和TNF-α浓度显著增加(P<0.05),肿瘤组织PD-L1表达显著下调(P<0.01)。结论SAMC可通过抑制人鼻咽癌细胞PD-L1表达而促进CD8^(+)T细胞的杀伤功能。

血清S-100B蛋白、可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1、胶质纤维酸性蛋白检测在新生儿缺血缺氧性脑病病情严重程度中的诊断价值

目的:探讨血清S-100B蛋白、可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)与新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)病情严重程度的关系。方法:选择80例HIE患儿作为观察组,另选择90例健康新生儿作为对照组,收集所有患儿一般资料,并检测两组患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平,分析HIE患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP与病情严重程度的相关性及预后不良的影响因素。结果:对照组血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平低于观察组(均P<0.05)。重度组血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平高于中度组、轻度组和对照组(均P<0.05)。Pearson相关分析显示,疾病严重程度与HIE患儿血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平呈正相关(均P<0.001)。随访预后良好患儿59例,预后不良21例,经多因素Logistic回归分析显示,产程异常、病情重度、S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP为影响HIE患儿预后的危险因素(均P<0.05)。结论:HIE患儿病情严重程度和预后与血清S-100B蛋白、sLOX-1、GFAP水平有关,监测其水平变化有利于临床早期完善干预方案改善预后。

国产泮托拉唑钠与进口奥美拉唑钠预防ICU应激性溃疡的疗效对比及成本-效果分析

目的:寻求一种经济、有效的预防重症监护(ICU )应激性溃疡方案。方法:将符合应激性溃疡高危人群标准的63例ICU患者分为2组,分别静脉滴注国产泮托拉唑钠80mg(1次/天)或进口奥美拉唑钠40mg(2次/天) ,治疗7天,观察上消化道出血的发生率并做成本-效果分析。结果:2组有效率分别为91. 18 %、89. 66 % ,无显著性差异(P>0. 05) ;2组成本分别为1059. 73元、2304. 26元;2组成本-效果比分别为11 .62、25 .70。疗程总费用泮托拉唑钠组比奥美拉唑钠组少支出1244. 53元。敏感度分析2组成本-效果比分别为10 .51、23 .22。结论:泮托拉唑钠是预防ICU应激性溃疡的经济、有效的药物。

奥美拉唑和泮托拉唑钠治疗幽门螺杆菌阳性消化性溃疡的成本-效果分析

目的对奥美拉唑肠溶片和泮托拉唑钠肠溶片治疗幽门螺杆菌阳性消化性溃疡进行药物经济学比较分析,为临床用药提供参考。方法采用回顾性研究法,收集82例幽门螺杆菌阳性消化性溃疡患者并分成两个治疗组,即奥美拉唑组和泮托拉唑钠组,采用统计学研究和成本-效果分析方法进行药物经济学比较。结果奥美拉唑肠溶片和泮托拉唑钠肠溶片对消化性溃疡的总有效率分别为90.00%和88.10%,幽门螺杆菌清除率分别为87.50%和88.10%,治疗成本分别为1 246.33元和1 233.33元,成本-效果比分别为13.85和14.00。结论两组在治疗效果上无明显差异,与奥美拉唑肠溶片相比,泮托拉唑钠肠溶片治疗幽门螺杆菌阳性消化性溃疡略具成本-效果优势。

国产与进口注射用泮托拉唑钠治疗消化性溃疡与上消化道出血的成本-效果分析

消化性溃疡合并上消化道出血是常见的内科急症,药物治疗仍是目前采用的首选方法,其中抑酸治疗为主要措施。H2受体阻滞剂虽可抑制胃酸分泌,但受体的耐受性影响了其长期疗效。质子泵抑制剂为目前作用最强的抑酸药物,已成为治疗消化性溃疡与上消化道出血的首选药物。泮托拉唑钠为第3代质子泵抑制剂,该药于1994年首先在瑞士上市,生产商为德国安达制药有限公司,中国后来进行了仿制。

进口和国产泮托拉唑钠治疗消化性溃疡并出血的成本-效果分析

目的比较国产泮托拉唑钠与进口泮托拉唑钠的治疗消化性溃疡并上消化道出血的成本与效果。方法将116例消化性溃疡并出血患者随机分成A、B两组,A组给予国产注射用泮托拉唑钠40mg静脉滴注,每日2次;B组给予进口注射用泮托拉唑钠40mg静脉滴注,每日2次;疗程均为5d,观察两组的疗效,并进行成本效果分析。结果A、B两组的止血总有效率分别为96.55%和98.28%,差异无显著性(P>0.05);A、B两组的成本分别为421.00元和1464.00元,成本效果比分别为4.36和14.90。结论国产注射用泮托拉唑钠是治疗消化性溃疡并上消化道出血的较佳方案。

S-(-)-尼古丁-己二酸盐的制备、特性及其应用研究

S-(-)-尼古丁的获取主要是通过从烟叶等植物中提取,获取途径受限,本研究以2′-羟基尼古丁为原料通过还原、化学拆分制备S-(-)-尼古丁;选用己二酸与S-(-)-尼古丁通过超声法制备S-(-)-尼古丁-己二酸盐,优化了合成工艺。产物利用ESI-MS、^(1)H NMR、HPLC进行表征;采用HPLC进行抗氧化性分析;利用热重分析仪进行热稳定性分析。结果表明在反应的最佳工艺条件下S-(-)-尼古丁总产率达55.1%,比旋光度为-141.5°,光学纯度为99.23%;S-(-)-尼古丁-己二酸盐的产率达94.4%,纯度为99.36%;S-(-)-尼古丁-己二酸盐的抗氧化性和热稳定性均优于S-(-)-尼古丁。本研究提供了一条切实可行的S-(-)-尼古丁及其己二酸盐的合成路线;S-(-)-尼古丁-己二酸盐有效避免了S-(-)-尼古丁易氧化、受热不稳定等不足,具有良好的应用前景。

大蒜辣素在大鼠体内转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸的鉴别

目的鉴别大鼠给药后大蒜辣素体内转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸,探讨血浆和皮肤组织中S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸的变化情况。方法取SD大鼠,雌雄各半,体重(200±20)g,随机分为8组,分别为空白组及给药后不同时间组,每组每个时间点采用6只大鼠,涂抹大蒜软膏于大鼠背部,分别于0、5、10、15、20、25、30、60 min依次取血液和皮肤组织,UPLC-MS/MS鉴定血液和皮肤组织中大蒜辣素的转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸及变化情况。结果大蒜辣素与半胱氨酸反应产生S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸,30 min即可反应90%以上。血浆中转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸在4 h内稳定。UPLC-MS/MS鉴定并确定了皮肤组织和血浆样品大蒜辣素与内源性半胱氨酸的反应产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸,给予大蒜软膏30 min内血浆和皮肤中S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸的浓度逐步增大,60 min时含量降低。结论大蒜辣素可与血浆和组织中的内源性半胱氨酸快速反应,本研究将为大蒜辣素的后续研究提供重要依据。

S-美托洛尔及其关键中间体的合成研究进展

综述了S-美托洛尔的化学全合成工艺。S-美托洛尔的合成需要先拆分外消旋环氧氯丙烷,再与关键中间体4-(2-甲氧基乙基)苯酚对接,以苯乙醇、对氯苯酚、苯酚、对羟基苯乙酮、对羟基苯乙酸甲酯、对硝基甲苯等为原料都可以合成4-(2-甲氧基乙基)苯酚。以苯乙醇为原料合成该中间体的工业化案例最多、成本最低,但硝化反应危险性大;产生的副产金属盐导致三废处理压力较大。使用对氯苯酚工艺和苯酚工艺的企业较少。对羟基苯乙酮、对羟基苯乙酸甲酯等工艺目前尚处于研究阶段,也有一定的发展前景。

HPLC-MS/MS法手性拆分泮托拉唑钠对映体及大鼠血浆中药代动力学研究

利用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)建立了大鼠血浆样本中泮托拉唑钠手性对映体的拆分方法,并进行药代动力学研究。样品采用乙腈蛋白沉淀法提取,ChiralpakIE色谱柱(4.6mm×250mm×5μm)分离,以0.1%甲酸水溶液和乙腈溶液为流动相等度洗脱,流速0.9mL/min,内标法定量。结果表明,泮托拉唑钠手性对映体可实现基线分离,方法的线性范围为5.0~5000.0μg/L。该方法的回收率、基质效应、精密度、准确度、稳定性、稀释可靠性、残留均符合方法学验证要求,可用于大鼠血浆中药代动力学研究。

反相高效液相色谱法测定食品复配营养强化剂中6S-5-甲基四氢叶酸钙含量的研究

分析和探讨反相高效液相色谱法在食品复配营养强化剂中6S-5-甲基四氢叶酸钙含量测定中的应用。利用反相高效液相色谱法对食品复配营养强化剂中6S-5-甲基四氢叶酸钙含量及回收率进行检测,分析其精密度和准确度。经过氨水溶液的提取,样品通过C18反相色谱柱进行分离。使用磷酸氢二钾(0.2%)-甲醇为流动相,以恒定比例进行洗脱。通过在280nm的波长下进行检测,并通过外标法进行定量分析。结果表明:食品复配营养强化剂中6S-5-甲基四氢叶酸钙的添加量为3000~5000μg/g时,加标回收率为96.65%~98.65%。本方法操作简便、准确、回收率高,重复性好,验证了方法的合理性,为食品复配营养强化剂中6S-5-甲基四氢叶酸钙含量测定提供科学参考。

高效液相色谱-串联质谱法检测泮托拉唑钠原料药中的水合肼

建立了泮托拉唑钠原料药中的基因毒性杂质水合肼的高效液相色谱-串联质谱(LC-MSMS)检测方法。采用反相色谱,以水-乙腈(含0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速0.5 mL/min,以ESI正离子多反应监测(MRM)模式进行质谱检测。结果显示,水合肼的检测限和定量限可达到0.23、0.47 ng/mL,其在0.47~9.37 ng/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),准确度试验中低、中、高浓度回收率均在81.6%~90.9%之间。在3批次泮托拉唑钠原料药中均未检出水合肼。

艾司奥美拉唑钠与泮托拉唑钠治疗急性消化道出血的效果及成本-效益分析

目的:研究注射用艾司奥美拉唑钠(阿斯利康)和泮托拉唑钠(潘妥洛克)治疗急性上消化道出血(AUGB)临床效果并进行成本-效益分析(CEA)。方法:回顾性分析214例AUGB患者临床资料,根据所用药物分为A组(n=128,采用阿斯利康治疗)和B组(n=86,采用潘妥洛克治疗),比较两组治疗效果和成本(C)-效益(E)。结果:治疗后,两组临床有效率分别为87.50%和91.86%(P>0.05);A组显效成本(C_1)和总有效成本(C_2)均明显低于B组(P<0.05);A组C1/E1(显效成本效果比,C_1/E_1)明显高于B组(P<0.05),两组C_2/E_2(总有效成本效果比,C_2/E_2)无明显差异(P>0.05);敏感度分析表明研究结果具有一定稳定性。结论:阿斯利康和潘妥洛克治疗AUGB均具有良好临床效果,二者总体成本-效益无明显差异,但后者在显效方面即成本-效益方面更具优势。

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中左旋泮托拉唑钠的浓度及其毒代动力学研究

目的建立液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中左旋泮托拉唑钠的浓度并研究其毒代动力学。方法大鼠血浆样本以乙腈沉淀蛋白后,经Chiralcel OJ-RH色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为乙腈∶水=28∶72,流速为0.6 m L·min^(-1),柱温为35℃;采用Agilent 6430三重四极杆串联质谱仪,离子化方式:电喷雾-正离子(API-ES),监测方式:多反应监测,左旋泮托拉唑监测离子对384.0/199.8,非那西丁监测离子对180.0/110.0,用作内标。结果本法专属性良好;左旋泮托拉唑钠在50~30 000 ng·m L^(-1)范围内线性关系符合要求;准确度均在85%~115%,精密度在15%内。SD大鼠连续4周静脉注射给予注射用左旋泮托拉唑钠低、中、高3个剂量,左旋泮托拉唑钠动力学参数AUC_(0~4) h增长与剂量增长均呈正相关。首次和4周给药后测定无明显差异。结论本法经过方法学验证,适用于大鼠血浆中左旋泮托拉唑钠浓度的测定,可用于左旋泮托拉唑钠大鼠体内毒代动力学研究。

含有1H-1,2,4-三唑咪唑[2,1-b]-1,3,4-噻二唑、S-三唑[3,4-b]-1,3,4-噻二唑衍生物的合成及生物活性

合成了 1 8个含有 1 H-1 ,2 ,4-三唑的咪唑 [2 ,1 -b]-1 ,3 ,4-噻二唑以及 S-三唑 [3 ,4-b]-1 ,3 ,4-噻二唑的稠杂环衍生物 ,经元素分析及谱学表征 ,探讨 2 ,5 ,6-三取代咪唑 [2 ,1 -b]-1 ,3 ,4-噻二唑的可能生成机制 .对大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌等初步抑菌试验证明 。

S-腺苷甲硫氨酸代谢途径相关基因在小麦水分胁迫中的表达

以小麦品种‘晋麦47’为材料,利用半定量RT-PCR方法,对S-腺苷甲硫氨酸代谢途径中的S-腺苷甲硫氨酸合成酶（SAMS）基因、S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶（SAMDC）基因和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（-γECS）基因在正常供水、PEG-6000模拟水分胁迫和复水过程中小麦叶片的表达模式进行了分析。结果表明,3个基因在正常生长情况下有一定量的表达,SAMS和SAMDC基因在水分胁迫早期（PEG-6000胁迫6、12、244、8 h）上调表达,水分胁迫后期（PEG-6000胁迫75 h）表达量下降;复水后3~6 h上调表达,复水9 h后表达量下调至对照水平。-γECS基因在水分胁迫阶段呈上调表达,复水后表达量下调至对照水平。可见,小麦SAMS、SAMDC和-γECS基因的表达都受水分胁迫诱导,同时,SAMS与SAMDC基因还参与水分胁迫后的复水调节,说明S-腺苷甲硫氨酸代谢途径在小麦抗旱节水中具有重要作用。