S-亚硝基-N-乙酰基-D,L-青霉胺二肽分子中S—NO键断裂能的测定

利用滴定量热技术并结合适当的热力学循环测定了乙腈溶液中7个S-亚硝基-N-乙酰基-D，L-青霉胺二肽化合物中S—NO键的异裂能和均裂能，其能量范围分别为234．5～246．2kJ／mol和101．6～122．1kJ/mol. 结果表明，所研究的亚硝基硫醇化合物更容易通过S—NO键的均裂释放NO自由基（NO）．通过热力学循环对7个亚硝基硫醇化合物自由基负离子中S—NO键的异裂能和均裂能进行估算，能量范围分别为19．2～35．5kJ／mol和～4．2～22．6kJ／mol，表明这些自由基负离子在室温下不稳定，容易通过S—NO键的异裂释放出NO^-．

S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的影响

目的观察S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺(SNAP)对RAW 264.7诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨NO在动脉粥样硬化(炎症)过程中的作用。方法以RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组、SNAP组,采用不同浓度(30、100、300、400、500μmol/L)的SNAP对巨噬细胞进行干预24 h,应用RT-PCR法检测RAW 264.7巨噬细胞iNOS mRNA的表达,采用Western blotting技术检测iNOS蛋白的表达。结果与空白对照组比较,不同浓度SNAP(30、100、300、400、500μmol/L)组iNOS mRNA的表达比空白对照组均明显降低(P﹤0.05),不同浓度SNAP(30、100、300μmol/L)组iNOS蛋白表达明显低于空白对照组(P﹤0.05)。结论 NO可以抑制巨噬细胞自身iNOS mRNA基因转录,降低iNOS的合成而发挥负反馈作用。

S-亚硝基-N-乙酰半胱氨酸对绿脓菌素感染所致靶器官损伤以及氧化应激的调节作用

目的:研究S-亚硝基-N-乙酰半胱氨酸对绿脓菌素感染所致靶器官损伤以及氧化应激的调节作用。方法:将成年雄性SD大鼠随机分为对照组、NaCl组以及SNAC组,NaCl组和SNAC组均进行气管内绿脓菌素接种,SNAC组给予S-亚硝基-N-乙酰半胱氨酸腹腔注射治疗。比较3组大鼠血清中炎症介质含量以及肺脏组织中凋亡细胞数目、NO含量、氧化反应产物含量、内质网应激标志分子表达量。结果:NaCl组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量以及肺脏组织中凋亡细胞的数目均明显高于对照组,SNAC组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量以及肺脏组织中凋亡细胞的数目均低于NaCl组;NaCl组大鼠肺脏组织中NO的含量均低于对照组,SNAC组大鼠肺脏组织中NO的含量高于NaCl组;NaCl组大鼠肺脏组织中MDA、AOPP、8-OhdG、GRP78的含量均高于对照组,SNAC组大鼠肺脏组织中MDA、AOPP、8-OhdG、GRP78的含量均低于NaCl组。结论:S-亚硝基-N-乙酰半胱氨酸能保护绿脓菌素感染所致肺脏损伤,缓解炎症反应、抑制细胞凋亡、减轻氧化应激反应。

S-乙酰基-NHS-MAG_3在反义显像研究中的应用及进展

随着反义显像研究的深入,一种新的双功能螯合剂巯基乙酰三甘氨酰-N-羟基丁二酰亚胺酯(S-乙酰基-NHS-MAG3)受到广泛重视。利用反义寡核苷酸的NHS-MAG3进行S-乙酰基-NHS-MAG3放射性核素标记,得到的标记产物具有较高的标记率、比活度和放化纯度,且体内外稳定性好,与血清蛋白的非特异性结合低;S-乙酰基-NHS-MAG3不会影响反义寡核苷酸的杂交特异性,并能增加标记的反义寡核苷酸在细胞内的积聚,因此,S-乙酰基-NHS-MAG3在反义显像研究中具有重要的应用价值。

S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺对RAW264.7巨噬细胞亚型分化的影响

目的:探讨S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺(SNAP)对巨噬细胞亚型分化的影响及其机制。方法:以RAW264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组、SNAP组、SNAP+PBA(4-苯基丁酸)组,采用不同浓度(30、100、300、400、500μmol/L)的SNAP或300μmol/L SNAP+20 mmol/L PBA对巨噬细胞进行干预24 h,应用RT-PCR法检测RAW264.7巨噬细胞亚型分化标志物M1(iNOS,CD86)、M2(Arg-I,MR)及CHOP mRNA的表达,应用Western blot技术检测iNOS及ERS通路中相关蛋白CHOP、P-PERK的表达。结果:与空白对照组比较,SNAP组iNOS、CD86、CHOPmRNA的表达均明显降低(P<0.05),Arg-ImRNA表达明显升高(P<0.05),而MR mRNA表达升高,但差异无统计学意义(P>0.05);与300μmol/L SNAP组比较,300μmol/L+PBA组iNOS、CHOP mRNA均无明显变化(P>0.05),CD86 mRNA升高,Arg-I、MR mRNA均明显降低(P<0.05)。SNAP组CHOP、iNOS、p-PERK蛋白表达均明显低于对照组(P<0.05),300μmol/LSNAP+20 mmol/LPBA组与300μmol/LSNAP组比较iNOS蛋白、p-PERK、CHOP蛋白表达升高(P<0.05)。结论:NO可能通过内质网应激机制抑制巨噬细胞向M1亚型分化。

NO介导的小鼠胸腺细胞中线粒体的变化在细胞凋亡过程中的作用

目的：研究一氧化氮（NO）介导的胸腺细胞凋亡中线粒体膜电位（△ψm）和心磷脂（CL）含量变化的特点.方法：以S-亚硝基-N-乙酰青霉胺（SNAP）作为NO的供体诱导胸腺细胞凋亡,以地塞米松（DEX）作为阳性对照药物;设空白对照组、SNAP组和DEX组3个实验组;经膜联蛋白Ⅴ（annexinⅤ mAb）和碘化丙啶（PI）染色后,用流式细胞术（FCM）检测细胞磷脂酰丝氨酸（PS）外翻;用3,3＇-二已基噁羰花青碘化物[DiOC6（3）]和PE-anti-annexin Ⅴ mAb检测凋亡中△ψm变化;用壬基吖啶橙（NAO）和PE-anti-annexin Ⅴ mAb检测凋亡中线粒体CL变化.结果：SNAP作用后6 h,胸腺细胞出现典型的细胞凋亡特征,多数annexin Ⅴ阳性的细胞出现皱缩.DEX组△ψm降低且未凋亡的细胞比例显著高于空白对照组（P＜0.01）;而SNAP组该群细胞所占比例与空白对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.各组中约40%～50%的DiOC6（3）阴性细胞同正常细胞的大小.SNAP组CL含量降低的凋亡细胞所占比例显著高于对照组（P＜0.01）,未见CL含量降低且未凋亡的细胞群.空白对照组和SNAP组中分别有（48.32±3.96）%、（43.64±4.90）%的细胞CL含量降低但大小同正常细胞.结论：NO介导的小鼠胸腺细胞的凋亡过程,依次为磷脂酰丝氨酸外翻、线粒体去极化、CL氧化及细胞皱缩.同DEX模型组相比较,NO介导的小鼠胸腺细胞线粒体的变化为凋亡过程中较晚期的变化.

SNAP对大鼠生长激素腺瘤GH3细胞增殖、生长激素分泌的影响及机制探讨

目的观察一氧化氮(NO)释放剂S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP)对大鼠生长激素(GH)腺瘤GH3细胞增殖、GH分泌的影响,并探讨其机制。方法将细胞分为A、B、C、D组,A组常规培养,B、C、D组分别加ghrelin、SNAP、SNAP+ghrelin培养。分别于培养第0、1、2、3、4、5、6天,用MTT法检测细胞吸光度值观察细胞增殖情况;培养2 h后,用ELISA法检测GH3细胞培养液中的GH,Western blot法检测GH3细胞中的磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)。结果 A组培养第2、3、4、5、6天时细胞吸光度值分别为0.381±0.006、1.664±0.005、3.411±0.005、5.221±0.005、10.055±0.005,B组分别为1.062±0.005、3.115±0.005、4.512±0.005、6.656±0.005、11.060±0.005,C组分别为0.161±0.006、0.413±0.005、0.931±0.005、1.861±0.005、5.612±0.005,D组分别为0.219±0.004、0.865±0.005、1.712±0.005、3.059±0.005、6.561±0.005;B组与A组、C组与A组、D组与B组比较,P均<0.01。培养2 h时,A、B、C、D组GH3细胞培养液的吸光度值分别为0.080±0.002、0.165±0.011、0.041±0.003、0.106±0.005,pERK表达量分别为0.301 8±0.004 5、0.682 5±0.003 8、0.192 3±0.008 6、0.298 5±0.006 7,B组与A组、C组与A组、D组与B组比较,P均<0.01。结论 SNAP可抑制ghrelin诱导的GH3细胞增殖及GH分泌,可能与其阻断ghrelin激活的ERK信号通路有关。