S-亚硝基-N-乙酰基-D,L-青霉胺二肽分子中S—NO键断裂能的测定

利用滴定量热技术并结合适当的热力学循环测定了乙腈溶液中7个S-亚硝基-N-乙酰基-D，L-青霉胺二肽化合物中S—NO键的异裂能和均裂能，其能量范围分别为234．5～246．2kJ／mol和101．6～122．1kJ/mol. 结果表明，所研究的亚硝基硫醇化合物更容易通过S—NO键的均裂释放NO自由基（NO）．通过热力学循环对7个亚硝基硫醇化合物自由基负离子中S—NO键的异裂能和均裂能进行估算，能量范围分别为19．2～35．5kJ／mol和～4．2～22．6kJ／mol，表明这些自由基负离子在室温下不稳定，容易通过S—NO键的异裂释放出NO^-．

S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的影响

目的观察S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺(SNAP)对RAW 264.7诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨NO在动脉粥样硬化(炎症)过程中的作用。方法以RAW 264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组、SNAP组,采用不同浓度(30、100、300、400、500μmol/L)的SNAP对巨噬细胞进行干预24 h,应用RT-PCR法检测RAW 264.7巨噬细胞iNOS mRNA的表达,采用Western blotting技术检测iNOS蛋白的表达。结果与空白对照组比较,不同浓度SNAP(30、100、300、400、500μmol/L)组iNOS mRNA的表达比空白对照组均明显降低(P﹤0.05),不同浓度SNAP(30、100、300μmol/L)组iNOS蛋白表达明显低于空白对照组(P﹤0.05)。结论 NO可以抑制巨噬细胞自身iNOS mRNA基因转录,降低iNOS的合成而发挥负反馈作用。

S-亚硝基-N-乙酰半胱氨酸对绿脓菌素感染所致靶器官损伤以及氧化应激的调节作用

目的:研究S-亚硝基-N-乙酰半胱氨酸对绿脓菌素感染所致靶器官损伤以及氧化应激的调节作用。方法:将成年雄性SD大鼠随机分为对照组、NaCl组以及SNAC组,NaCl组和SNAC组均进行气管内绿脓菌素接种,SNAC组给予S-亚硝基-N-乙酰半胱氨酸腹腔注射治疗。比较3组大鼠血清中炎症介质含量以及肺脏组织中凋亡细胞数目、NO含量、氧化反应产物含量、内质网应激标志分子表达量。结果:NaCl组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量以及肺脏组织中凋亡细胞的数目均明显高于对照组,SNAC组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量以及肺脏组织中凋亡细胞的数目均低于NaCl组;NaCl组大鼠肺脏组织中NO的含量均低于对照组,SNAC组大鼠肺脏组织中NO的含量高于NaCl组;NaCl组大鼠肺脏组织中MDA、AOPP、8-OhdG、GRP78的含量均高于对照组,SNAC组大鼠肺脏组织中MDA、AOPP、8-OhdG、GRP78的含量均低于NaCl组。结论:S-亚硝基-N-乙酰半胱氨酸能保护绿脓菌素感染所致肺脏损伤,缓解炎症反应、抑制细胞凋亡、减轻氧化应激反应。

亚硝基乙酰青霉胺抑制人血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的探讨亚硝基乙酰青霉胺对人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用。方法将不同浓度的亚硝基乙酰青霉胺300、500、800、1000μmol/L作用于体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC),采用氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入的方法检测细胞的增殖。结果在500、800、1000μmol/L的亚硝基乙酰青霉胺作用下,VSMC的3H-TdR掺入量cpm分别为1096.33±85.60、852.00±57.80、693.00±49.60,均与对照组的1270.00±96.50有显著性差异(P<0.01),并表现为剂量依赖性(P<0.01)。结论亚硝基乙酰青霉胺能够抑制人VSMC的增殖,可能有防治经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的作用。

亚硝基乙酰青霉胺对腺样囊性癌细胞VEGF表达双向调控作用

目的:观察亚硝基乙酰青霉胺(SNAP)对腺样囊性癌细胞中VEGF表达水平的调控作用。方法:将31.25μmol/L、62.25μmol/L、125μmol/L、250μmol/L、500μmol/L不同浓度的SNAP作用于ACC-M和ACC-2细胞,或用浓度为100ng/m L的LPS预刺激12h后,用500μmol/L的SNAP分别刺激ACCs细胞0、1、2、4小时。采用CCK-8活细胞计数试剂盒对ACCs细胞进行毒性分析,半定量RT-PCR检测各组细胞中VEGF表达水平。结果:(1)在0μmol/L^500μmol/L浓度的SNAP作用下,细胞活力均保持在88%;用500μmol/L的SNAP分别作用不同时间ACC-M和ACC-2细胞活力,其活力均保持在86%。(2)当SNAP的刺激浓度在31.25μmol/L时能显著上调VEGF的表达,而500μmol/L的SNAP则显著下调ACCs细胞中VEGF的mRNA水平(P<0.01),仅为基础mRNA水平的0.23倍和0.17倍。结论:在涎腺腺样囊性癌细胞中亚硝基乙酰青霉胺对血管内皮生长因子的表达存在着双向调控作用。

以2-甲氧基-4-(2′-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为底物测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性

目的评价以2-甲氧基-4-(2′-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MNP-NAG)为底物的全液体试剂两点终点法测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性。方法尿样中NAG作用于底物MNP-NAG水解产生游离MNP,其生成速率与酶活性在一定范围内成正比。结果该法显色最大吸收波长为505nm,试剂1和试剂2最适pH值分别为4.6和10.2,最适底物浓度为16mmol/L,线性范围达198U/L,批内变异系数(CV)和批间CV分别为2.2%和3.8%。166例健康体检者尿样NAG活性参考范围为:(6.21±4.53)U/gCr(x-±1.96s)。结论MNP-NAG底物法测定尿NAG灵敏度高,操作简便,结果可靠,适合临床应用。

S-乙酰基-NHS-MAG_3在反义显像研究中的应用及进展

随着反义显像研究的深入,一种新的双功能螯合剂巯基乙酰三甘氨酰-N-羟基丁二酰亚胺酯(S-乙酰基-NHS-MAG3)受到广泛重视。利用反义寡核苷酸的NHS-MAG3进行S-乙酰基-NHS-MAG3放射性核素标记,得到的标记产物具有较高的标记率、比活度和放化纯度,且体内外稳定性好,与血清蛋白的非特异性结合低;S-乙酰基-NHS-MAG3不会影响反义寡核苷酸的杂交特异性,并能增加标记的反义寡核苷酸在细胞内的积聚,因此,S-乙酰基-NHS-MAG3在反义显像研究中具有重要的应用价值。

S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺对RAW264.7巨噬细胞亚型分化的影响

目的:探讨S-亚硝基-N-乙酰-DL-青霉胺(SNAP)对巨噬细胞亚型分化的影响及其机制。方法:以RAW264.7巨噬细胞为研究对象,分为空白对照组、SNAP组、SNAP+PBA(4-苯基丁酸)组,采用不同浓度(30、100、300、400、500μmol/L)的SNAP或300μmol/L SNAP+20 mmol/L PBA对巨噬细胞进行干预24 h,应用RT-PCR法检测RAW264.7巨噬细胞亚型分化标志物M1(iNOS,CD86)、M2(Arg-I,MR)及CHOP mRNA的表达,应用Western blot技术检测iNOS及ERS通路中相关蛋白CHOP、P-PERK的表达。结果:与空白对照组比较,SNAP组iNOS、CD86、CHOPmRNA的表达均明显降低(P<0.05),Arg-ImRNA表达明显升高(P<0.05),而MR mRNA表达升高,但差异无统计学意义(P>0.05);与300μmol/L SNAP组比较,300μmol/L+PBA组iNOS、CHOP mRNA均无明显变化(P>0.05),CD86 mRNA升高,Arg-I、MR mRNA均明显降低(P<0.05)。SNAP组CHOP、iNOS、p-PERK蛋白表达均明显低于对照组(P<0.05),300μmol/LSNAP+20 mmol/LPBA组与300μmol/LSNAP组比较iNOS蛋白、p-PERK、CHOP蛋白表达升高(P<0.05)。结论:NO可能通过内质网应激机制抑制巨噬细胞向M1亚型分化。

TMPSHSO_4催化N_2O_5/有机溶剂硝化2,6-二乙酰氨基吡啶-1-氧化物

以2,6-二乙酰氨基吡啶-1-氧化物(DAPO)为原料,在N,N,N-三甲基-N-丙磺酸基-硫酸氢铵(TMPSHSO4)催化条件下,采用N2O5/有机溶剂硝化2,6-二乙酰氨基吡啶制得2,6-二氨基-3,5-二硝基吡啶-1-氧化物(ANPyO)。考察了在TMPSHSO4催化条件下反应溶剂、温度和时间对ANPyO产率的影响,结果表明最佳反应条件为:反应溶剂为CH3NO2,反应温度为60℃,反应时间为5h,ANPyO产率为92.5%。用1H NMR,IR和MS对ANPyO的结构进行了表征。

Oral administration of S-nitroso-N-acetylcysteine prevents the onset of non alcoholic fatty liver disease in rats

瞄准：在一个动物模型在不含酒精的脂肝疾病(NAFLD ) 的预防每氧化和口头的 SNAC 管理的效果在类脂化合物的抑制评估 S-nitroso-N-acetylcysteine (SNAC ) 的潜力。方法：NAFLD 被胆碱缺乏的饮食为 4 wk 在 Wistar 雄的老鼠导致。对待 SNAC 的动物(n=6 )(1.4 mg/kg 每 SNAC 的天，口头上地) 与 2 个控制组相比：(n=6 ) 收到了 PBS 答案，其它(n=6 ) 收到了 NAC 答案(7 mg/kg 每天) 。组织学的变量半关于宏和 microvacuolar 脂肪被测定变化，它的带的分发，坏死的 foci，门和 perivenular 纤维变性，并且煽动性与带的分发渗入。从肝 homogenates 的样品的 LOOH 被 HPLC 确定。在门静脉的血浆的硝酸盐层次被化合光估计。水的低密度的脂蛋白(LDL ) 暂停(200 microg protein/mL ) 在 37 度摄氏为 15 h 在 SNAC (300 micromol/L ) 的缺席和存在与 CuCl (2 )(300 micromol/L ) 被孵化。LDL 氧化的程度被 fluorimetry 估计。亚油酸(LA )(18.8 micromol/L ) 氧化被大豆 lipoxygenase (SLO )(0.056 micromol/L ) 当面在 37 度摄氏导致并且 N-acetylcysteine (NAC ) 和 SNAC (56 和 560 micromol/L ) 的缺席并且在 234 点监视了 nm。结果：在控制组的动物在仙子门区域开发了中等的宏和微小囊的丰满的变化。对待 SNAC 的动物与丰满的变化的缺席显示了仅仅分离的组织学的改变并且没得肝脂肪变性。在对待 SNAC 的组的 NAFLD 的缺席断然在肝匀浆在 LOOH 的集中与减少被相关，与控制组相比(0.7+/-0.2 nmol/mg 对 3.2+/-0.4 nmol/mg 蛋白质，分别地 P【0.05 ) ，当 aminotransferases 的浆液层次是未改变的时。在每氧化阻止类脂化合物的 SNAC 的能力作为模型底层用 LA 和 LDL 在在试管内实验被证实。结论：SNAC 的口服在用胆碱缺乏的饮食喂的 Wistar 老鼠阻止 NAFLD 的发作。这效果与 SNAC 的能力被相关每氧化在试管内和在试管内堵住类脂化合物的繁殖。

一氧化氮对猪细小病毒体外增殖的影响研究

本文研究了来源于不同前体物的一氧化氮(Nitro oxide, NO)对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)体外增殖的影响。结果表明,NO前体物S 硝基 N 乙酰青霉胺(SNAP)、L 精氨酸(L Arg)均能够有效地诱导 PK 15 细胞产生NO,进而显著地抑制PPV在PK 15 细胞上的复制,其效果与前体物的浓度呈正相关,在浓度为 100μmol/L和200μmol/L时,SNAP产生NO的能力与抑制病毒复制的作用要强于 L Arg。在病毒感染前 6 h和 3 h添加SNAP或L Arg对病毒复制的抑制作用比在病毒感染后3 h 和 6 h添加的作用强,表明 NO的抗病毒作用主要发生在病毒感染的初始阶段。此外,添加具有抑制 L Arg产生 NO作用的 N 硝基 L 精氨酸(L NNA)能抵消 L Arg体外抗病毒的作用。

一步法合成硝唑尼特

以乙酰水杨酸和2-氨基-5-硝基噻唑为原料,选用P2O5为脱水剂,经酰胺化反应一步合成了硝唑尼特〔2-乙酸基-N-(5-硝基-2-噻唑基)苯甲酰胺〕。研究了乙酰水杨酸、2-氨基-5-硝基噻唑、P2O5的用量,反应温度,酰胺化反应时间对收率的影响。较佳的合成工艺条件为:n(乙酰水杨酸)∶n(2-氨基-5-硝基噻唑)∶n(P2O5)=1.2∶1.0∶2.5,以DMF为溶剂,在90℃反应2.0 h,收率可达75%以上。

一氧化氮对体外培养的角质形成细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 :探讨一氧化氮 (NO)对体外培养的角质形成细胞 (KC)血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。 方法 :以NO供者S 亚硝酰 N 乙酰青霉胺 (SNAP)作用于体外培养的KC ,用免疫组化方法检测培养的KCVEGF的表达 ,用双抗体夹心ELISA法定量检测培养的KC上清液中VEGF的含量。 结果 :免疫组化染色表明NO可促进体外培养的KC产生VEGF ,上清液检测结果亦表明NO可明显增加KCVEGF的分泌 ,并呈剂量依赖性。 结论

NO介导的小鼠胸腺细胞中线粒体的变化在细胞凋亡过程中的作用

目的：研究一氧化氮（NO）介导的胸腺细胞凋亡中线粒体膜电位（△ψm）和心磷脂（CL）含量变化的特点.方法：以S-亚硝基-N-乙酰青霉胺（SNAP）作为NO的供体诱导胸腺细胞凋亡,以地塞米松（DEX）作为阳性对照药物;设空白对照组、SNAP组和DEX组3个实验组;经膜联蛋白Ⅴ（annexinⅤ mAb）和碘化丙啶（PI）染色后,用流式细胞术（FCM）检测细胞磷脂酰丝氨酸（PS）外翻;用3,3＇-二已基噁羰花青碘化物[DiOC6（3）]和PE-anti-annexin Ⅴ mAb检测凋亡中△ψm变化;用壬基吖啶橙（NAO）和PE-anti-annexin Ⅴ mAb检测凋亡中线粒体CL变化.结果：SNAP作用后6 h,胸腺细胞出现典型的细胞凋亡特征,多数annexin Ⅴ阳性的细胞出现皱缩.DEX组△ψm降低且未凋亡的细胞比例显著高于空白对照组（P＜0.01）;而SNAP组该群细胞所占比例与空白对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.各组中约40%～50%的DiOC6（3）阴性细胞同正常细胞的大小.SNAP组CL含量降低的凋亡细胞所占比例显著高于对照组（P＜0.01）,未见CL含量降低且未凋亡的细胞群.空白对照组和SNAP组中分别有（48.32±3.96）%、（43.64±4.90）%的细胞CL含量降低但大小同正常细胞.结论：NO介导的小鼠胸腺细胞的凋亡过程,依次为磷脂酰丝氨酸外翻、线粒体去极化、CL氧化及细胞皱缩.同DEX模型组相比较,NO介导的小鼠胸腺细胞线粒体的变化为凋亡过程中较晚期的变化.

SNAP对大鼠生长激素腺瘤GH3细胞增殖、生长激素分泌的影响及机制探讨

目的观察一氧化氮(NO)释放剂S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP)对大鼠生长激素(GH)腺瘤GH3细胞增殖、GH分泌的影响,并探讨其机制。方法将细胞分为A、B、C、D组,A组常规培养,B、C、D组分别加ghrelin、SNAP、SNAP+ghrelin培养。分别于培养第0、1、2、3、4、5、6天,用MTT法检测细胞吸光度值观察细胞增殖情况;培养2 h后,用ELISA法检测GH3细胞培养液中的GH,Western blot法检测GH3细胞中的磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)。结果 A组培养第2、3、4、5、6天时细胞吸光度值分别为0.381±0.006、1.664±0.005、3.411±0.005、5.221±0.005、10.055±0.005,B组分别为1.062±0.005、3.115±0.005、4.512±0.005、6.656±0.005、11.060±0.005,C组分别为0.161±0.006、0.413±0.005、0.931±0.005、1.861±0.005、5.612±0.005,D组分别为0.219±0.004、0.865±0.005、1.712±0.005、3.059±0.005、6.561±0.005;B组与A组、C组与A组、D组与B组比较,P均<0.01。培养2 h时,A、B、C、D组GH3细胞培养液的吸光度值分别为0.080±0.002、0.165±0.011、0.041±0.003、0.106±0.005,pERK表达量分别为0.301 8±0.004 5、0.682 5±0.003 8、0.192 3±0.008 6、0.298 5±0.006 7,B组与A组、C组与A组、D组与B组比较,P均<0.01。结论 SNAP可抑制ghrelin诱导的GH3细胞增殖及GH分泌,可能与其阻断ghrelin激活的ERK信号通路有关。

高分辨液质联用技术推定泊马度胺胶囊有关物质

目的:采用高分辨液质联用技术快速分析和推定泊马度胺胶囊中的降解产物。方法:采用Agilent ZORBAX SB-CN色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 mm),以质谱兼容性0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),检测波长为240 nm,对泊马度胺胶囊经酸、碱、高温、氧化及光照破坏产生的有关物质进行分离。通过电喷雾正离子化四极杆-飞行时间质谱(Q-TOF/MS)测定各有关物质的精确分子质量及分子式,再根据二级质谱(MS/MS)碎裂信息推定未知降解产物结构;喷雾电压3.5 k V,雾化器流量11 L·min^(-1),去溶剂气温度350℃,离子源气压310 k Pa,驱簇电压120 V,MS扫描范围m/z 100~1 000,MS/MS扫描范围m/z 50~800,MS/MS碰撞能量10~20 e V。结果:建立的HPLC分析方法下各有关物质与主成分分离良好,在强制降解供试品溶液中共检测到14个主要有关物质,经液质初步分析推定了它们的结构分别为泊马度胺的水解产物(有关物质1、2、3、7和8),3-氨基-1,2-苯二甲酸(有关物质4),2-硝基-6-[[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]羰基]-苯甲酸(有关物质5),2-亚硝基-6-[[(2,6-二氧代-3-哌啶基)氨基]羰基]-苯甲酸(有关物质6),N′-[2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代-4-异二氢吲哚]-乙酰肼(有关物质9),泊马度胺羟基化产物(有关物质10和12),3-硝基-N-(2,6-二氧-3-哌啶基)苯邻二甲酰亚胺(有关物质11),3-甲基氨基-N-(2,6-二氧-3-哌啶基)苯邻二甲酰亚胺(有关物质13),泊马度胺的羟基化二聚体产物(有关物质14)。结论:新建立的液质联用方法适用于泊马度胺胶囊中有关物质的检查,为泊马度胺制剂质量控制和工艺优化提供重要参考。