棉花S-腺苷蛋氨酸脱羧酶基因(GhSAMDC2/3/4)的克隆及其诱导表达分析

利用电子克隆结合RT-PCR技术克隆获得陆地棉(Gossypium hirsutum L.)S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,SAMDC)基因家族3个基因,分别命名为Gh SAMDC2、Gh SAMDC3和GhSAMDC4。序列分析显示,该基因c DNA包含的upstream ORF(u ORF)和main ORF(m ORF)为植物SAMDC基因特征ORF,其中m ORF长度分别为1068 bp、1110 bp和1032 bp,分别编码355、369和343个氨基酸。聚类分析表明,Gh SAMDC2/3蛋白与可可树(Theobroma cacao)SAMDC聚为一类,且Gh SAMDC2与GhSAMDC3蛋白亲缘关系最近;Gh SAMDC4与拟南芥At SAMDC4聚为一类。实时荧光定量PCR分析表明,Gh SAMDC2在茎中表达相对较高,随着纤维发育其表达量不断增加,在纤维发育后期其表达量达到最高;Gh SAMDC2/3/4在不同的胁迫条件下表现出不同的表达模式,Gh SAMDC2受低温和干旱胁迫诱导最强烈,Gh SAMDC3响应盐胁迫显著,Gh SAMDC4受ABA诱导强烈。上述结果为进一步研究棉花SAMDC基因功能奠定了一定基础。

苦瓜果实S-腺苷蛋氨酸脱羧酶基因McSAMDC的克隆、表达及亚细胞定位

根据已构建苦瓜果实均一化文库中获得的1个与SAMDC基因相关的EST序列,采用3′RACE技术,克隆获得1个苦瓜SAMDC基因的cDNA全长序列,命名为McSAMDC(GenBank登录号为KC632099)。生物信息分析结果表明,该cDNA全长1 900 bp,5′UTR和3′UTR分别长501、325 bp。该cDNA序列存在3个开放读码框(微型tORF、上游读码框uORF和主读码框mORF),其中mORF长1 077 bp,编码358个氨基酸,预测分子量为39.31 ku,含有酶原剪切位点结构域和蛋白快速降解有关的PEST二个保守结构域。二级结构分析显示,McSAMDC含有无规卷曲(45.53%)、α-螺旋(29.33%)、伸展链(19.83%)、β-转角(5.31%)。序列分析结果表明,McSAMDC与拟南芥(CAA69073.1)、琴叶拟南芥(XP 002882231.1)和雪里红(AAS45435.1)的氨基酸序列相似性分别达到69%、68%和68%。亚细胞定位结果表明,McSAMDC定位在细胞质中。荧光定量结果表明,McSAMDC在果实膨大期表达量最高,并随之迅速下降,并从成熟初期至完全成熟期该基因表达量逐渐增大。

甘蔗S-腺苷蛋氨酸脱羧酶基因Sc-SAMDC的克隆和表达分析

【目的】克隆甘蔗(Saccharum officinarum)S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,SAMDC)基因,并进行序列特征、原核表达和不同逆境胁迫下表达特性分析。【方法】通过对甘蔗茎全长cDNA文库测序和分析,获得SAMDC基因cDNA全长,命名为Sc-SAMDC,并进行序列分析。随后将编码S-腺苷蛋氨酸脱羧酶的cDNA片段克隆到原核表达载体pET29a(+)中,构建融合表达质粒,转化至Esherichia coli BL21(DE3)中进行表达。最后利用定量PCR技术分析甘蔗幼苗中该基因在不同外源胁迫下的表达特性。【结果】序列分析显示,甘蔗Sc-SAMDC基因(GenBank Accession number:GQ246459)cDNA全长1968bp,存在3个读码框(袖珍读码框tORF、上游读码框uORF和主读码框mORF),mORF长1200bp,编码399个氨基酸的SAMDC酶原,预测分子量为43.6kD,该酶原含有两个高度保守的功能结构域(酶原剪切位点和PEST结构域)。原核表达产物经SDS-PAGE表明,Sc-SAMDC以融合蛋白形式表达,相对分子量约为50kD。定量PCR分析表明,Sc-SAMDC基因在聚乙二醇(PEG)、NaCl、水杨酸(SA)和H2O2外源胁迫下表达特性不同,受PEG和NaCl的诱导,受SA和H2O2的抑制。【结论】本研究成功地克隆了Sc-SAMDC基因并在原核生物中进行了表达研究,分析了该基因的表达特性,为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。

番茄S-腺苷蛋氨酸脱羧酶基因SlSAMDC1的克隆与序列分析

以蔓陀罗S-腺苷蛋氨酸脱羧酶全长cDNA序列为信息探针,筛选NCBI番茄EST数据库,依据同源EST信息,经人工拼接、RT-PCR及RACE技术验证,获得了1个新的SAMDC基因家族成员,命名为SlSAMDC1(GenBank登录号:EF550528),并利用染色体步移技术克隆了879bp的上游调控区域。SlSAMDC1cDNA序列全长1847bp,5′-UTR和3′-UTR分别长523和241bp;存在3个ORF(微型uORF、小型uORF和主ORF),主ORF编码360个氨基酸的SAMDC酶原;SlSAMDC1基因组序列全长3648bp,有3个内含子,均位于5′-UTR,所有内含子的剪切位点均符合真核生物"GT-AG"规则。SlSAMDC1基因与其它植物来源SAMDC基因同源性较高,与人、大肠杆菌以及酵母的同源性较低。表达谱分析发现,SlSAM-DC1基因在番茄根、茎、叶、花蕾、果实等器官中均表达,果实中的表达量相对较高。生物信息学分析表明,SlSMDC1基因的上游调控序列存在多个顺式作用元件,如W-box、TATA-box、CAAT-box等。

甘蔗S-腺苷蛋氨酸脱羧酶基因Sc-SAMDC3的克隆和表达分析

【目的】同源克隆干旱胁迫诱导下甘蔗(Saccharum officinarum)S-腺苷蛋氨酸脱羧酶3(S-adenosylmethionine Decarboxylase 3,SAMDC3)基因主编码区(mORF),并进行生物学信息及其表达特性分析为该基因遗传转化研究奠定基础。【方法】以甘蔗Sc-SAMDC3基因序列为模板设计引物,克隆Sc-SAMDC3基因mORF并使用相关软件进行序列分析。采用实时荧光定量PCR分析Sc-SAMDC3基因在PEG-6000胁迫下的表达特性。【结果】Sc-SAMDC3基因主编码区长度为1188 bp编码395个氨基酸。氨基酸序列分析结果显示,甘蔗SAMDC3有β折叠16个、α螺旋6个、卷曲3个,盘曲或折叠形成三级结构,酶活性中心残基位点分别位于第77、92、243、256位氨基酸残基,标志片段的酶原加工位点和PEST结构域与高粱、玉米高度保守。在25%PEG-6000胁迫2-24 h期间,Sc-SAMDC3基因的表达随胁迫诱导时间的延长而呈上调表达;至24 h时,其表达量为对照的8.26倍。【结论】克隆获得的Sc-SAMDC3基因表达受PEG-6000胁迫强烈诱导,可能参与甘蔗对干旱逆境胁迫响应的代谢调控。

人S-腺苷蛋氨酸脱羧酶α亚基的克隆、表达与纯化

目的:构建人S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(SAMDC)的α亚基的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化表达的重组蛋白。方法:从大肠癌细胞中提取总RNA,RT-PCR方法扩增人SAMDCα亚基的cDNA片段801 bp,经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx-4-SAMDC-α。将重组表达质粒转化入E.coliJM109(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定表达蛋白,并通过6×His.Tag,利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白。结果:酶切鉴定和DNA测序显示,人SAMDCα亚基的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx-4且方向正确,SDS-PAGE电泳显示表达出32kD的外源蛋白。Western blot检测结果显示,表达出的蛋白为6×His.Tag的融合蛋白,且Ni-NTA亲和层析法纯化了该重组蛋白。结论:成功构建、表达且纯化了重组SAMDC-α亚基,为制备抗SAMDC抗体、研究SAMDC基因与结直肠肿瘤的关系提供了必要的工具。

高产S-腺苷蛋氨酸合成酶基因工程菌的构建

应用PCR技术,以大肠杆菌BL21(DE3)染色体DNA为模板,扩增得到S-腺苷蛋氨酸(SAM)合成酶基因。将所得基因连接至表达载体pET-22b(+),利用T7强启动子进行转录,然后转化进E.coli BL21(DE3)表达菌株,构建出了具有高效表达SAM合成酶基因的基因工程菌。重组菌所表达的酶活为115 U/g(以细胞干重计)。

S-腺苷蛋氨酸对原发性肝癌术后肝损伤的治疗作用及机制研究

目的:研究S-腺苷蛋氨酸对原发性肝癌术后肝损伤的治疗作用及机制。方法:选取2021年1月至2022年1月期间于湖北中医药大学附属红安县中医医院行TACE手术的原发性肝癌患者60例作为研究对象。将其随机分为观察组和对照组,每组各30例患者。在TACE手术后,对照组予以常规保肝治疗。在此基础上,观察组予以S-腺苷蛋氨酸保肝治疗。对比两组治疗前后肝功能指标总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷氨酸氨基转移酶(AST)的水平及两组中不同肝功能分级患者的占比。结果:1)治疗7 d、14 d后,两组患者血清ALT、AST、TBIL的水平均低于治疗前,P<0.05。治疗7 d后,两组患者血清ALT、AST、TBIL的水平相比,P>0.05。治疗14 d后,观察组患者血清ALT、AST、TBIL的水平均低于对照组患者,P<0.05。2)治疗后,两组中肝功能Child-Pugh分级A级患者的占比相比,观察组高于对照组,P<0.05;两组中肝功能Child-Pugh分级B级患者的占比相比,观察组低于对照组,P<0.05;两组中肝功能Child-Pugh分级C级患者的占比相比,P>0.05。结论:原发性肝癌TACE术后应用S-腺苷蛋氨酸,可治疗术后肝功能损伤,快速修复肝功能。

UPLC-MS/MS法同时检测丁二磺酸腺苷蛋氨酸肠溶片中3种1,4-丁二磺酸酯类基因毒性杂质

建立丁二磺酸腺苷蛋氨酸肠溶片中3种1,4-丁二磺酸酯类基因毒性杂质(1,4-丁二磺酸二甲酯、1,4-丁二磺酸二乙酯和1,4-丁二磺酸二异丙酯)的超高效液相色谱-三重四级杆质谱(UPLC-MS/MS)检测方法。采用Agilent Poroshell 120 PFP色谱柱(3.0 mm×150.0 mm,2.7μm),以0.01 mol/L甲酸铵(A)-甲醇(B)为流动相,流速为0.4 mL/min,进行梯度洗脱。采用质谱检测器,在电离模式ESI+、多反应监测(MRM)模式下采集数据。结果显示,1,4-丁二磺酸二甲酯、1,4-丁二磺酸二乙酯和1,4-丁二磺酸二异丙酯分别在0.999 6~19.992 0 ng/mL、0.997 2~19.944 0 ng/mL、0.996 8~19.936 0 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数r均为1.000 0,定量限浓度分别为0.999 6 ng/mL、0.997 2 ng/mL、0.996 8 ng/mL,检测限浓度分别为0.299 9 ng/mL、0.299 2 ng/mL、0.299 0 ng/mL,样品加标回收率均为80%~120%。该方法可以快速、简便、灵敏、准确地测定丁二磺酸腺苷蛋氨酸肠溶片中1,4-丁二磺酸二甲酯、1,4-丁二磺酸二乙酯和1,4-丁二磺酸二异丙酯的含量,为丁二磺酸腺苷蛋氨酸肠溶片的质量控制提供参考依据。

S-腺苷蛋氨酸联合熊去氧胆酸治疗妊娠期肝内胆汁淤积症的临床研究

分析妊娠期应用S-腺苷蛋氨酸联合熊去氧胆酸的治疗胆汁淤积症效果。方法 从2022年1月-2022年12月选取16例患者,划入实验对照两个组别,实验组和对照组人数相同。对照组:应用腺苷蛋氨酸治疗,实验组:在对照组基础上联合熊去氧胆酸,比较疗效。结果 联合治疗效果较高(P<0.05)。结论 对于妊娠期肝内胆汁淤积症患者治疗过程中,应用联合治疗更能够满足患者的需求,提高治疗的效果。

酿酒酵母生物转化蛋氨酸生产S-腺苷-L-蛋氨酸

摇瓶考察筛选酿酒酵母 (zjus1)培养 1d后补加蛋氨酸和葡萄糖生产 S-腺苷 - L -蛋氨酸 (SAM) ,并考察了酵母提取物、补加蛋氨酸浓度、葡萄糖浓度及转化 p H对酵母细胞的生长和 SAM产量的影响 ,15 LB.Braun罐间歇培养及转化过程实验表明 ,溶氧提高利于碳源利用、细胞生长和 SAM产量提高 ,SAM水平可达 80 0 mg/ L ,酵母密度 DCW=15 g/ L ,蛋氨酸转化率约 30 %。

S-腺苷蛋氨酸改善妊娠肝内胆汁淤积症患者妊娠结局的评价

目的 评价S 腺苷蛋氨酸改善妊娠肝内胆汁淤积症患者妊娠结局的作用。方法 计算机检索MED LINE、EMBASE、中国循证医学数据库 /Cochrane中心数据库 (CEBM/CCD)、Cochrane图书馆 (2 0 0 3年 4期 )、中国医院数字图书馆和中国数字化期刊万方数据库 ,手工检索有关S 腺苷蛋氨酸治疗妊娠肝内胆汁淤积症的中英文随机和半随机临床对照试验 ,检索截止时间为 2 0 0 3年 12月。在严格质量评价的基础上 ,利用RevMan 4. 2软件进行Meta分析。结果 共检索到符合纳入标准的文献 8篇 ,包括随机对照试验 2篇 ,半随机对照试验 6篇 ,共有研究对象 4 2 4例。所有纳入研究的方法学质量均不高。Meta分析结果显示 ,S 腺苷蛋氨酸改善妊娠肝内胆汁淤积症患者妊娠结局的作用如下 :①降低剖宫产率 :与安慰剂比较差异无统计学意义 [OR =1 .0 0 ,95 %CI (0. 2 3,4. 33) ,P =1. 0 0 ];与地塞米松组及强力宁比较差异有统计学意义 ,其OR (95 %CI)和P值分别为 0. 4 4 (0. 2 3,0 . 85 ) ,P =0 .0 1;0 .2 8(0 . 10 ,0. 75 ) ,P =0 .0 1)。②延长孕周 :与安慰剂比较差异无统计学意义 [WMD =0. 70 ,95 %CI(=0. 6 9,2 .10 ) ,P=0 . 32 ];而与地塞米松、强力宁、肝益灵相比差异有统计学意义 ,其WMD(95 %CI)值和P值分别为 1. 10

S-腺苷蛋氨酸治疗抑郁症

目的：观察新型天然抗抑郁药Ｓ－腺苷蛋氨酸的抗抑郁作用及其不良反应。方法：采用该药开放性治疗各种抑郁性障碍３１例。采用Ｈａｍｉｌｔｏｎ抑郁量表和临床总体印象评定临床疗效。结果：全部病人（包括脱落病人）的有效率为７２．４％。疗程分析发现该药起效较快，在治疗第四天量表评分业已有显著下降。第二周时已较基线分下降了５２％。因子分析发现，该药对主观焦虑因子效果不佳，对其它各因子均有显著效果。该药不良反应轻微，无一例因药物不良反应导致治疗中断。

S-腺苷蛋氨酸对化疗药物性肝损伤防治疗效的观察

本研究旨在观察S-腺苷蛋氨酸在白血病抗肿瘤药物肝损伤中的防治作用。回顾性分析了2011年1月到2012年4月期间,接受化疗治疗的62例急性白血病患者保肝药物治疗疗效。根据保肝药物不同分为A组27例及B组35例。A组给予多烯磷脂酰胆碱注射液联用S-腺苷蛋氨酸治疗,B组给予多烯磷脂酰胆碱注射液联用复方甘草酸苷治疗。观察2周后肝功能指标变化。B组5例化疗急性肝损伤患者换用了S-腺苷蛋氨酸作为补救治疗。结果表明,A组保肝治疗后ALT、AST水平显著低于治疗前(P<0.05),无1例(0/27)患者出现急性肝损伤。B组14.29%(5/35)的患者出现了急性肝损伤,换用S-腺苷蛋氨酸治疗后肝功能均在中位时间8(5-14)日得到了良好的恢复。结论:S-腺苷蛋氨酸在防治化疗药物性肝损伤方面效果优于复方甘草酸苷。

S-腺苷甲硫氨酸代谢途径相关基因在小麦水分胁迫中的表达

以小麦品种‘晋麦47’为材料,利用半定量RT-PCR方法,对S-腺苷甲硫氨酸代谢途径中的S-腺苷甲硫氨酸合成酶（SAMS）基因、S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶（SAMDC）基因和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（-γECS）基因在正常供水、PEG-6000模拟水分胁迫和复水过程中小麦叶片的表达模式进行了分析。结果表明,3个基因在正常生长情况下有一定量的表达,SAMS和SAMDC基因在水分胁迫早期（PEG-6000胁迫6、12、244、8 h）上调表达,水分胁迫后期（PEG-6000胁迫75 h）表达量下降;复水后3~6 h上调表达,复水9 h后表达量下调至对照水平。-γECS基因在水分胁迫阶段呈上调表达,复水后表达量下调至对照水平。可见,小麦SAMS、SAMDC和-γECS基因的表达都受水分胁迫诱导,同时,SAMS与SAMDC基因还参与水分胁迫后的复水调节,说明S-腺苷甲硫氨酸代谢途径在小麦抗旱节水中具有重要作用。

固定化E.Coli JM109(pBR322-MAT)细胞催化合成S-腺苷蛋氨酸

通过PCR从大肠杆菌(E.Coli-K12)基因组DNA中扩增出甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)基因,构建了能高效表达MAT的重组大肠杆菌E.ColiJM109(pBR322-MAT)。选择海藻酸钙(CA)凝胶包埋固定化重组大肠杆菌,研究发现最佳ρ(CA)为20g/L的水溶液,最适细胞包埋量为0.15 g(湿细胞)/mL(凝胶),连续反应5批次后固定化细胞酶活力为初始最高酶活力的91%。对于固定化细胞催化合成SAM,在最佳条件下底物ATP的转化率超过95%。

补加前体L-蛋氨酸对高密度发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸的影响

将高密度发酵技术成功应用于S-腺苷-L-蛋氨酸的生产。考察了补加前体L-蛋氨酸的量以及补加策略对酿酒酵母G14发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸的影响。实验发现补加前体L-蛋氨酸能明显促进S-腺苷-L-蛋氨酸的积累。同时还发现不同的补加策略对菌体浓度以及S-腺苷-L-蛋氨酸的产量和浓度有不同的影响。确定了补加L-蛋氨酸不应低于0.7g/10g菌体干重。比较了五种不同的补加前体L-蛋氨酸的方式。结果表明在菌体干重达到高密度的情况下(120g/L)补加前体L-蛋氨酸进行转化生产S-腺苷-L-蛋氨酸能达到比较好的效果一次性补加9g L-蛋氨酸,SAM的积累量在补加后的18h达到最高,为4.31g/L;采取流加方式补加L-蛋氨酸,流加速率为2g/h,共流加5h,流加结束28h后SAM达到最高积累量后者达到4.98g/L。两者最终的生物量均可达到130g/L以上。

S-腺苷-L-蛋氨酸防治全胃肠外营养所致肝内胆汁郁积的实验研究

目的研究S腺苷L蛋氨酸(SAMe)对全胃肠外营养(TPN)所致胆汁郁积的防治效果及其对肝细胞凋亡的作用。方法新生兔24只,随机分为正常对照组、TPN对照组、SAMe治疗组,治疗组在TPN同时加用SAMe100mg/(kg·d)。结果SAMe治疗组血清胆汁酸、ALT、AKP、总胆红素、总蛋白和白蛋白与正常对照组相比差异无显著性(P>0.05),直接胆红素仍高于正常对照组(P<0.01),但较TPN对照组有明显下降(P<0.01)。正常对照组肝细胞形态正常;TPN对照组可见明显肝内胆汁郁积表现,并可见肝细胞轻度脂肪变性;SAMe治疗组肝细胞形态基本正常。正常对照组肝细胞凋亡数为0.263%±0.041%;TPN对照组肝细胞凋亡数为1.060%±0.217%;SAMe治疗组肝细胞凋亡数为0.467%±0.182%,较TPN对照组明显降低(P<0.01)。结论SAMe可有效防治TPN所致郁胆,其作用机理可能与抑制肝细胞凋亡有关。

pH对S-腺苷-L-蛋氨酸发酵的影响

研究了不同pH控制方式对S-腺苷-L-蛋氨酸(SAM)发酵过程及产量的影响。通过对发酵过程中不控制pH、控制恒定pH、两阶段控制pH和三阶段控制pH实验,研究了不同条件下对菌体干重、葡萄糖代谢和SAM产量的影响。控制合适的pH有利于菌体生长与SAM的生物合成,菌体生长最适pH为6.0,SAM转化最适pH为6.5,采用三阶段控制pH,使SAM产量比不控制pH提高了133%,比控制pH6.5提高了18.6%,比两阶段控制pH提高了10%。

S-腺苷蛋氨酸对微生物次生代谢产物的调控作用与机制研究进展

S-腺苷蛋氨酸是生物体内一种非常重要的生理活性物质,除主要作为甲基供体和参与众多转硫基、转氨基和转核糖基等重要的生化反应,还能作为信号分子调控微生物的代谢。当细胞内S-腺苷蛋氨酸浓度发生微小变化时,就可以对微生物细胞代谢产物的合成以及细胞分化产生较大的影响。文中就S-腺苷蛋氨酸在生物体内的循环途径、相关基因以及近年来S-腺苷蛋氨酸对微生物次级代谢的调控作用和调控机制进行了综述。