口腔白斑患者的免疫球蛋白及其与S-谷胱苷肽转移酶、白细胞介素-2的关系

目的 探讨口腔癌前病变及口腔癌变患者的血清免疫球蛋白 (Ig)、s -谷胱苷肽转移酶 (s -GST)及白细胞介素 - 2 (IL - 2 )值的变化。方法 临床白斑患者 30例、口腔鳞癌患者 30例及正常人群 30例全部进行血清Ig、s -GST、IL - 2检测。结果 口腔癌前病变患者与口腔癌变患者的血清Ig、s -GST及IL - 2值之间无显著差异。结论 血清Ig、s-GST及IL - 2值对检测口腔癌前病变转为早期癌无特殊意义。

细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因的克隆和序列分析

目的对细粒棘球蚴谷胱苷肽S-转移酶基因进行克隆和序列分析。方法从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,根据国外细粒棘球蚴谷胱苷肽S-转移酶基因的已知序列设计一对引物,采用RT-PCR技术扩增,将PCR产物纯化后,将其克隆到pGEM-T载体后进行序列测定以及生物信息学分析。结果用RT-PCR成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因,测序表明该基因开放阅读框为660bp,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为99%。结论成功克隆了细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因序列,为其进一步的研究奠定基础。

P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白和谷胱苷肽S-转移酶在神经母细胞瘤中的表达及意义

目的 探讨P 糖蛋白、多药耐药相关蛋白 (MRP)和谷胱苷肽S 转移酶 (GST π)在小儿神经母细胞瘤 (NB)中的表达及临床意义。方法 应用免疫组织化学SP法检测 70例NB组织中P 糖蛋白、MRP和GST π的表达。结果 P 糖蛋白、MRP和GST π的阳性率分别为 61 4% ( 43 / 70 )、3 8 6%( 2 7/ 70 )和 5 1 4% ( 3 6/ 70 )。P 糖蛋白与MRP、P 糖蛋白与GST π、MRP与GST π及P 糖蛋白、MRP与GST π共表达阳性率分别为 3 2 9% ( 2 3 / 70 )、3 5 7% ( 2 5 / 70 )、2 7 1% ( 19/ 70 )和 2 4 3 % ( 17/ 70 )。P 糖蛋白、GST π与MRP均具有相关性 (r =0 3 87,P =0 0 0 1;r=0 3 0 0 ,P =0 0 12 ) ,P 糖蛋白与GST π无相关性 (r=0 169,P =0 161)。年龄大于 1岁的NBP 糖蛋白和MRP的表达阳性率 ( 72 3 % ,48 9% )均高于小于 1岁者 ( 3 9 1% ,17 4% ,P <0 0 5 )。分化性NBP 糖蛋白、MRP和GST π表达 ( 93 3 %、86 7%和80 0 % )均明显高于无分化的NB( 5 2 7%、2 5 5 %和 43 6% ,P <0 0 5 )。有转移的NBMRP表达( 61 9% )高于无转移者 ( 2 8 6% ,P <0 0 5 )。P 糖蛋白、MRP和GST π表达与性别和分期无关。MRP阳性者中位生存期和 2年累计生存率 ( 2 0个月 ,48 9% )均较阴性者 ( 2 4个月 ,77 9% )下降 (P <0 0 5 )?

肝癌耐药细胞的诱导及其生物学特性的研究

目的诱导肝癌耐药细胞。研究其生物学特性。方法用“剂量递增筛选法”诱导肝癌耐药细胞；斑点杂交法等研究ＭＤＲ１ｍＲＮＡ的表达及ＧＳＴ的活性。结果经过近９个月的连续培养和１３７次的传代，诱导出耐ＡＤＲ２８倍的ＢＥＬ┐７４０２／ＡＤＲ细胞，并对５┐ＦＵ及ＶＣＲ亦有不同的耐药性。生物学特性研究结果发现，ＢＥＬ┐７４０２／ＡＤＲ细胞ＧＳＴ含量，较另两种细胞的ＧＳＴ明显增高（Ｐ＜０．０１）。ＢＥＬ┐７４０２／ＡＤＲ细胞内的ＭＤＲ１ｍＲＮＡ表达，与ＢＥＬ┐７４０２相比具有统计学差异（Ｐ＜０．０５）。

胆囊和胆管癌组织中多药耐药相关蛋白和GST-π的表达及意义

背景与目的:多药耐药性(MDR)被认为是导致胆囊癌和胆管癌化疗疗效不佳的主要原因,本实验通过免疫组织化学的方法检测胆囊癌、胆管癌组织中MRP1、MRP2和谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)的表达情况,并探讨其与耐药的关系。方法:采用免疫组化的方法(IHC)检测复旦大学附属中山医院普外科自2000年2月—2006年11月收治的并行手术切除的18例胆囊癌和36例胆管癌中MRP1、MRP2及GST-π的表达情况,并以胆囊炎和胆管炎13例为对照。结果:MRP1、MRP2和GST-π在胆囊癌组织中的表达阳性率分别72.2%、72.2%和61.1%,在胆管癌组织中的表达阳性率为86.1%、80.6%和69.4%,显著高于对照组的23.1%、15.4%和23.1%(P<0.05)。上述指标与性别、年龄、病理分期、病理类型、分化程度淋巴结转移均无关(P>0.05);MRP1和GST-π、MRP2在胆囊癌和胆管癌的表达具有相关性(P<0.05)。结论:MRP1、MRP2、GST-π在未经过化疗的胆囊癌和胆管癌组织中均有不同程度的高表达;胆囊癌和胆管癌的原发性多药耐药可能与MRP、MRP、GST-π有关。

GSTP1基因多态性与新疆维、汉肺癌易感性的关系

目的探讨谷胱甘肽S转移酶P1基因（glutathione S-transferase P1,GSTP1）rs1695位点多态性与新疆地区维吾尔族（维族）和汉族肺癌患者的相关性。方法采用病例—对照研究方法,选取维族、汉族肺癌患者各80例作为病例组,另以维族、汉族健康人群各80例为对照组,运用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCRrestriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）技术检测GSTP1基因Ile105Val多态性,分析其基因型频率在2个民族间分布的差异。结果 （1）GSTP1基因rs1695位点多态性在对照组与病例组中的分布均符合HardyWeinberg平衡;（2）在维族人群中,GSTP1基因rs1695位点基因型在病例组与对照组中的分布频率差异无统计学意义（P〉0.05）。在汉族人群中,携带G等位基因者发生肺癌的风险增加（OR=2.170,95%CI：1.146~4.107,P〈0.05）;（3）维族人群突变型杂合子AG和纯合子GG基因型频率均高于汉族,其中在对照组中维族GSTP1（GG）基因型频率较汉族高1.3倍（8.8%vs 3.8%）,但差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论 GSTP1基因rs1695多态性与汉族人群肺癌发病风险相关,与维吾尔族人群无关,其相关性具有民族差异。

K562细胞多重耐药机制的实验研究

目的探讨K562细胞多重耐药性形成的分子机制。方法采用MTT法分别测定K562及阿霉素耐药的K562细胞对顺铂的耐药程度,采用RT-PCR检测细胞表面MDR、MRP、GST及MGMT分子表达水平,并确定其与耐药性的关系。结果顺铂对K562细胞的抑制率明显高于阿霉素耐药的K562细胞,同时阿霉素耐药的K562细胞的表面MDR、MRP、GST及MGMT的表达明显增高。结论MDR、MRP、GST及MGMT的高表达是K562细胞形成多重耐药性的重要机制之一。

FGFR1在乳腺癌分子亚型中的表达及意义

目的探讨成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)在乳腺癌组织及正常组织中的表达及与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER2)、谷胱甘肽-S转移酶-π(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱα(TOPOⅡα)间的关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测88例乳腺浸润性导管癌和30例正常乳腺组织中FGFR1的表达情况。结果 FGFR1在浸润性导管癌及正常乳腺组织中的表达率分别为37.5%、10.0%,两者间差异有统计学意义(P<0.05);FGFR1在GST-π阳性及阴性乳腺浸润性癌患者中表达率分别为60.4%、10.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。FGFR1在TOPOⅡα阳性及阴性乳腺癌患者中表达率分别为47.2%、22.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。FGFR1在Luminal A型、Luminal B型、HER2过表达型、Basal-like型中表达率分别为25.0%、35.3%、56.3%、63.6%,FGFR1表达率在Luminal A和HER2过表达型、Luminal A和Basal-like型间差异有统计学意义(P<0.05)外,其他各组表达率间差异均无统计学意义(P>0.05)。FGFR1与ER、PR、HER2状态无相关性(P>0.05),但FGFR1与内分泌治疗耐药呈正相关(P<0.05)。结论 FGFR1在浸润性导管癌的不同分子分型中表达有差异,可能成为预测乳腺癌预后的重要指标之一。

EphA2蛋白与GST-pi蛋白在结直肠癌组织中表达及其预后意义

目的探讨促红细胞生成素肝细胞A2(EphA2)蛋白与谷胱苷肽S-转移酶Pi(GST-pi)蛋白在结直肠癌标本中的表达及其与临床病理特征、预后的关系。方法收集2014年6月至2020年2月于该院接受手术治疗的114例结直肠癌患者,应用免疫组化染色技术检测EphA2蛋白与GST-pi蛋白在癌组织及其对应癌旁组织中的表达,分析二者与结直肠癌临床病理特征及总生存率的关系。结果EphA2蛋白与GST-pi蛋白的阳性表达率分别为54.4%和62.3%,显著高于二者在癌旁组织中的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。与EphA2蛋白阴性表达患者相比,EphA2蛋白阳性表达患者的肿瘤最大径>5 cm占比、有淋巴结转移占比、有淋巴血管侵犯占比更高;GST-pi蛋白表达与结直肠癌患者的肿瘤最大径及T分期有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明EphA2蛋白阳性表达与阴性表达患者5年总生存率分别为20.1%和68.8%,差异有统计学意义(χ^(2)=16.973,P<0.001);GST-pi蛋白阳性表达与阴性表达者的5年总生存率分别为28.2%和61.8%,差异有统计学意义(χ^(2)=3.974,P=0.046)。单、多变量Cox回归分析表明,EphA2蛋白阳性表达(风险比=3.442,95%CI:1.722~6.881,P<0.001)、GST-pi蛋白阳性表达(风险比=2.203,95%CI:1.088~4.460,P=0.028)、淋巴结转移(风险比=3.627,95%CI:1.699~7.742,P=0.001)及淋巴血管侵犯(风险比=2.113,95%CI:1.033~4.322,P=0.040)是结直肠癌患者预后不佳的独立预测因素。结论EphA2蛋白与GST-pi蛋白或许可作为结直肠癌患者预后评估的重要参考指标。

血吸虫GST疫苗分子之间及与其它寄生性蠕虫GST的交叉反应

血吸虫的谷胱甘肽S-转移酶(GST)是目前公认的最有前途的抗血吸虫分子疫苗,它与许多寄生性蠕虫的GST分子间存在交叉反应。对该交叉反应的阐明有助于开拓GST应用的新思路。

毛白杨PtoGSTF4基因克隆及相关特性鉴定

该研究从毛白杨中克隆到1个Phi类谷胱苷肽S-转移酶（GST）基因（PtoGSTF4），编码213个氨基酸。表达模式分析发现，PtoGSTF4在正常生长、Hzoz和莠去津处理后的茎、叶以及茎的韧皮部均表达，属于组成型表达基因。在大肠杆菌中表达并纯化了PtoGSTF4重组蛋白，酶学性质分析表明PtoGSTF4对CDNB、NBD-C1、NBC和Cum—OOH等4种底物均有活性。动力学分析发现，PtoGSTF4对GSH具有较高的亲和力，而对CDNB的亲和力相对较低。在不同pH及温度条件下对PtoGSTF4蛋白进行活性检测，发现PtoGSTF4在pH7．5～10．5范围内或30℃～60℃温度范围内有较高的活性。研究推测，PtoGSTF4可能在毛白杨的抗逆生理中发挥重要作用。

宫颈鳞状细胞癌ATP-TCA法体外药敏试验与耐药相关蛋白表达的关系

目的:探讨代表不同耐药机制的P糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、胸苷酸合成酶(TS)在原发宫颈鳞癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系;分析三磷酸腺苷生物荧光法体外药敏试验(ATP-TCA)结果与耐药蛋白表达的关系。方法:收集32例宫颈鳞癌患者的新鲜癌组织制成单细胞悬液,采用ATP-TCA法成功检测上述细胞对11种化疗药物(共16种组合)的体外敏感性;采用EnVision二步法免疫组化检测32例宫颈鳞癌组织中P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS蛋白的表达,并分析其与临床分期、肿瘤分化程度的关系。结果:耐药蛋白P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS在宫颈鳞癌组织中的表达与临床分期、肿瘤分化程度无相关性;耐药蛋白P-gp表达与体外PTX+CBP耐药正相关(P=0.040);耐药蛋白TS表达与体外5-FU、5-FU+MMC、5-FU+DDP耐药正相关(P=0.015,0.012,0.006);TopoⅡ,GST-π蛋白表达与宫颈鳞癌体外耐药均无相关性。结论:体外药敏试验联合免疫组化检测,有可能用于宫颈鳞癌化疗前药敏预测。

GSTP1基因Ile^(105)Val多态性与最大运动状态下的心肺表现

人体谷胱苷肽S-转移酶在肺和心血管系统免疫反应方面扮演一定角色,不少研究已经显示谷胱苷肽S-转移酶P1(glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因Ile105Val多态性可能与肺疾病的发生发展相关联,而该多态是否影响正常人体心肺功能少见报道。选取198名健康汉族成年男性,首次对GSTP1基因与正常人体最大运动状态下心肺表现间的关系进行了探索。结果检测到两种GSTP1基因型:Ile105/Ile105和Ile105/Val105,频率分别为78%和22%。最大摄氧量、最大摄氧量状态下的氧脉搏和氧通气当量以及这三项指标较各自安静状态下的增加值在GSTP1 Ile105/Ile105和Ile105/Val105基因型组间的差异均没有显著性(P>0.05)。因此,我们认为这两种基因型的遗传差异不会对人体最大运动状态下的心肺表现产生影响。

肿瘤多药耐药蛋白MRP1、LRP和GST-π在胆囊和胆管癌组织中的表达

目的探讨多药耐药（MDR）基因产物多药耐药相关蛋白（MRP1）、肺耐药蛋白（LRP）和谷胱甘肽S-转移酶-π（GST-π）在胆囊癌和胆管癌中的表达及其与耐药的关系。方法采用免疫组化的方法（IHC）检测实验组18例胆囊癌、36例胆管癌及对照组13例胆囊胆管炎症组织中MRP1、LRP及GST-π的表达情况，采用X^2检验和Spearman检验。结果MRP1、LRP和GST-π在胆囊癌组织中的表达阳性率分别72％（13／18）、78％（14／18）和61％（11／18），在胆管癌组织中的表达阳性率为86％（31／36）、75％（27／36）和69％（25／36），显著高于对照组的23％（3／13）、23％（3／13）和23％（3／13）（X。=4．5，P〈0．05）。LRP在胆管癌年龄大于60岁组的表达阳性率93％（13／14）显著高于小于60岁组的64％（14／22）（X^2=3．9，P〈0．05）。上述指标与性别、年龄、病理分期、病理类型、分化程度和淋巴结转移均无明显相关（P〉0．05）；MRP1和GST-π在胆囊癌和胆管癌的表达具有相关性，Spearman系数=0．569（P〈0．05）。结论MRP1、LRP、GST-π在未经过化疗的胆囊癌和胆管癌组织中均有不同程度的高表达；胆囊癌和胆管癌的原发性多药耐药可能与MRP1、LRP、GST-π有关。

GSTP1基因多态性与心率和血压的关联研究

氧化应激可引起心血管机能低下,谷胱苷肽S-转移酶(GSTs)家族在机体对抗氧化应激危害方面扮演重要角色。编码谷胱苷肽S-转移酶P1(GSTP1)的GSTP1基因具有Ile105Val多态性,该多态可明显改变GSTP1对底物的亲和力,在流行病学中被广为研究。然而,GSTP1基因与反映心血管机能的心率和血压间关系的研究少见报道。本研究选取197名正常汉族成年男性,就GSTP1基因Ile105Val多态性与心率和血压间的关系做一探索。结果检测到Ile105/Ile105和Ile105/Val105两种基因型,频率分别为78%和22%。安静心率、最大心率和心率储备在两种基因型组间都不存在显著性差异(P>0.05)。收缩压、舒张压和脉压在两种基因型组间也不存在显著性差异(P>0.05)。因此,GSTP1基因Ile105Val多态性可能对正常人体的心率和血压不产生影响。

piRNA在双酚A促进前列腺癌细胞侵袭和迁移中的作用机制研究

目的研究PIWI蛋白相互作用RNA(piRNA)在双酚A(BPA)促进前列腺癌细胞侵袭和迁移中的作用机制。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)数据,分析并筛选在前列腺癌组织中表达显著升高的piRNA。使用不同浓度BPA对前列腺癌PC-3细胞进行12、24和48 h染毒,结合CCK-8实验确定20%抑制浓度(IC20),并使用实时荧光定量PCR检测BPA染毒前后piRNA表达水平的改变。随后利用比较毒理基因组学数据库(CTD)筛选受BPA调控且与前列腺癌相关的靶基因,经双荧光素酶报告基因实验验证piRNA与靶基因的靶向调控关系,并通过Western blotting检测piRNA靶基因的表达水平,并进行细胞侵袭和迁移实验探究piRNA及其拮抗剂对PC-3细胞恶性表型的影响。结果160μmol/L BPA处理PC-3细胞piR-sno48表达水平升高幅度较大(P<0.05)。转染piR-sno48拮抗剂可导致内源性piR-sno48表达下降及其靶基因GSTP1表达水平升高(P<0.05),但是BPA染毒的细胞中GSTP1表达未见明显改变(P>0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,piR-sno48与GSTP1的3′-UTR形成反向互补序列继而靶向抑制GSTP1表达。Transwell实验结果显示,BPA刺激促进了前列腺癌细胞侵袭和迁移(P<0.01),而piR-sno48拮抗剂可显著抑制这种促进作用(P<0.01)。结论BPA可能通过上调piR-sno48表达和靶向抑制GSTP1表达促进前列腺癌细胞侵袭和迁移;通过干扰内源性piR-sno48表达抑制前列腺癌细胞恶性表型。