肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶基因的克隆表达及活性分析

目的克隆和表达肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶基因(FhGST)以研究重组蛋白免疫学特性。方法参考Gen-Bank上发表的FhGST基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR法扩增FhGST基因,将扩增产物克隆入pET-30a(+),构建重组表达载体。经PCR、双酶切和序列测定鉴定后转入E.coliBL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对该重组蛋白进行分析和鉴定。结果成功获得肝片吸虫GST基因全长为657bp的编码序列,SDS-PAGE结果表明重组蛋白分子量为31.3kDa,以包涵体形式表达。Western blotting结果证实重组蛋白能被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能与感染肝片吸虫的绒山羊血清发生反应,表明重组蛋白具有免疫反应性。结论成功的克隆了肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶基因,实现了在原核表达系统中高效表达重组蛋白,并具有良好的免疫学活性。

谷胱甘肽s-转移酶基因(M1、T1)多态性与大肠癌综合危险性的Meta分析

目的 研究谷胱甘肽 s-转移酶基因多态性 (GSTM1、GSTT1)与大肠癌危险性的综合危险性。方法 采用随机效应模型进行 Meta综合分析。结果 GSTM1、GSTT1基因多态性与大肠癌的综合危险性 (ORs)及其 95 %可信区间分别为 1.0 80 (1.0 6 0～ 1.0 99) ,1.377(1.173～ 1.6 16 )。结论 GSTM1、GSTT1基因缺失型可增加大肠癌的危险性 ,GSTT1缺失型危险性稍高于 GSTM1。

细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因的克隆和序列分析

目的对细粒棘球蚴谷胱苷肽S-转移酶基因进行克隆和序列分析。方法从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,根据国外细粒棘球蚴谷胱苷肽S-转移酶基因的已知序列设计一对引物,采用RT-PCR技术扩增,将PCR产物纯化后,将其克隆到pGEM-T载体后进行序列测定以及生物信息学分析。结果用RT-PCR成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因,测序表明该基因开放阅读框为660bp,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为99%。结论成功克隆了细粒棘球蚴中国大陆株谷胱苷肽S-转移酶基因序列,为其进一步的研究奠定基础。

日本血吸虫Mr=26×10^3谷胱甘肽S-转移酶基因植物表达载体的构建

【目的】构建日本血吸虫Mr=26×103谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因的植物表达载体,为研制血吸虫病口服疫苗做前期准备。【方法】采用PCR技术,扩增目的基因GST,与植物表达载体pBI121连结,构建重组表达载体pBI121-GST。【结果】通过PCR检测和双酶切鉴定以及重组质粒序列测定,结果表明,该目的基因片段已被整合到植物表达载体pBI121中,通过电激转化,将质粒转入农杆菌菌株LBA4404、EHA105中。【结论】本实验成功地构建了日本血吸虫Mr=26×103谷胱甘肽S-转移酶GST基因的植物表达载体。

人谷胱甘肽S-转移酶P1基因及其多态性的研究进展

谷胱甘肽S-转移酶具有基因多态性,其基因多态性与多种疾病的易感性和预后有关。

外周血前列腺癌基因3基因联合甲基化谷胱苷肽S-转移酶P1基因在前列腺癌诊断中的意义

目的研究前列腺癌(PCa)和前列腺增生(BPH)患者及健康者血清中前列腺癌基因3(PCA3)基因和甲基化胎盘型谷胱苷肽S-转移酶P1(GSTP1)的表达情况,探讨PCA3基因联合甲基化GSTP1基因作为前列腺癌早期诊断的价值。方法随机选取80例PCa患者为PCa组、120例BPH患者为BPH组和100例健康男性志愿者为对照组为研究对象,均采用RT-PCR技术分别检测外周血前列腺癌基因3(PCA3)基因和甲基化GSTP1基因在血清中表达水平化表达情况,并进行对比分析。结果 PCa组血清中PCA3基因和甲基化GSTP1基因浓度均明显高于BPH组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);BPH组和对照组血清中PCA3基因和甲基化GSTP1基因浓度均无差别,差异无统计学意义(P>0.05)。PCA3基因和甲基化GSTP1基因诊断PCa其敏感度分别为72.5%(58/80)、85.0%(68/80),特异度分别为87.5%(70/80)、77.5%(62/80);而联合检测时其敏感度可增至95.0%(76/80),特异度为90.0%(72/80)。结论外周PCA3基因和甲基化GSTP1基因检测都是PCa诊断的良好指标,PCA3基因联合甲基化GSTP1基因检测可弥补PCA3基因敏感性低和甲基化GSTP1基因特异性低的缺点,更有利于早期PCa诊断。

不明原因不孕症患者谷胱甘肽S-转移酶M1基因遗传多态性

目的探讨谷胱甘肽S-转移酶M1(GSTM1)基因多态性与不明原因不孕症的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)的方法对不明原因不孕组46例及已生育正常健康女性对照组45例GSTM1基因进行分型,对GSTM1缺失基因型与不明原因不孕症相关性采用Logistic回归分析。结果不明原因不孕组GSTM1缺失率(67.39%)明显高于对照组(35.56%),差别具有统计学意义(P<0.05)。结论 GSTM1基因遗传多态性与不明原因不孕存在相关性,GSTM1的缺失可能是不明原因不孕的高危因素。

肺癌患者谷胱甘肽S-转移酶P1基因Ile105Val多态性分析

目的:分析肺癌患者谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)基因Ile105Val单核苷酸多态性。方法:采用病例对照研究方法,以聚合酶链反应限制性片段长度多态(PCR RFLP)技术,检测121例正常对照和121例肺癌患者GSTP1基因Ile105Val多态性基因型分布,并比较各基因型与肺癌易感性的关系。结果:肺癌患者中,携带GSTP1突变等位基因的基因型Ile/Val+Val/Val的频率为51.2%,高于对照组的33.1%(P=0.004);至少携带一个Val等位基因的个体发生肺癌风险是Ile/Ile基因型个体的2.13倍(95%CI1.27～3.58),且病理分型分析显示风险增加主要在鳞癌组。经吸烟分层后,仅增加吸烟者的风险。结论:GSTP1基因Ile105Val多态可能与中国人肺癌易感性有关,可用于对肺癌易感个体的预警和预防。

日本沼虾mu型可溶性谷胱甘肽S-转移酶的克隆与表达

利用简并引物从日本沼虾肝脏克隆mu型sGST基因cDNA核心片段获得其sGST氨基酸序列。序列分析表明日本沼虾肝脏mu型sGST基因cDNA核心序列长299bp,编码99个氨基酸。日本沼虾sGST与南美白对虾(Litopenaeus vannamei)、小鼠(Mus musculus)、大鼠(Rattus norvegicus)、肩突硬蜱(Ixodes scapu-laris)、扇头蜱(Rhipicephalus appendiculatus)、热带爪蟾(Xenopus tropicalis)、微小牛蜱(Rhipicephalus micro-plus)和太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)的mu型sGST基因核苷酸同源性为60%左右,表明所克隆的日本沼虾sGST亦属于mu型sGST。通过对日本沼虾活体浸泡MC-LR,发现微囊藻毒素对日本沼虾肝脏mu型sGST基因表达没有显著的诱导作用。

谷胱甘肽S-转移酶M1基因多态性与糖尿病相关性研究

目的探讨谷胱甘肽S-转移酶M1基因(GSTM1)多态性与糖尿病的相关性。方法采用聚合酶链反应(PCR)的方法对正常健康对照组(n=110)与糖尿病组(n=112)GSTM1基因型进行检测。结果糖尿病组GSTM1缺失率(72.32%)明显高于正常对照组(35.45%),两者差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论 GSTM1基因多态性与糖尿病存在相关性,GSTM1基因缺失型可能是糖尿病高危易感因素。

松材线虫谷胱甘肽S转移酶Sigma1基因(BxGSTs1)克隆及表达分析

【目的】谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-transferases,GSTs)是一类广泛分布于真核生物及原核生物体内的多功能同工酶,在生物机体的有毒物质代谢、亲脂化合物转运、抗氧化应激反应、抗诱变及抗肿瘤等方面发挥了重要作用。克隆松材线虫谷胱甘肽S转移酶Sigma1基因(BxGSTs1),研究BxGSTs1基因特性、组织表达特性及耐药胁迫表达特性。为揭示BxGSTs1基因在线虫有毒物质代谢方面的具体功能奠定基础。也为寻找潜在靶标基因,防治松材线虫病提供理论支持。【方法】基于松材线虫转录组测序结果,利用RT-PCR技术克隆获得松材线虫BxGSTs1基因CDS序列全长并进行生物信息学分析;利用原位杂交技术进行基因组织表达定位分析;利用实时荧光定量PCR技术,对药剂胁迫下BxGSTs1基因的表达进行定量分析;利用RNAi沉默技术及药剂处理试验,对BxGSTs1基因具体功能进行分析。【结果】松材线虫BxGSTs1基因CDS序列全程468 bp,编码155个氨基酸,其编码蛋白含有N端结构域“GST_N”和C端结构域“GST_C_Sigma_like”。多序列比对及系统发育树分析显示,BxGSTs1蛋白与秀丽隐杆线虫GST蛋白(NP_494882.2)同源性最高为37%,进化树聚在同一分支上,亲缘关系较近。原位杂交试验表明,BxGSTs1基因主要在松材线虫的食道腺及生殖部位附近表达。qPCR分析显示,BxGSTs1基因在药剂鱼藤酮、盐酸左旋咪唑胁迫时表达均上调。RNAi沉默显示,dsRNA处理抑制了BxGSTs1基因的表达,虫态表型无明显变化。但dsRNA处理后的松材线虫在鱼藤酮和苦参碱药剂胁迫时,出现死亡率增加现象。【结论】从松材线虫中克隆得到1条谷胱甘肽S转移酶Sigma类基因(BxGSTs1),该基因可能在线虫抗氧化应激及解毒耐药机制中发挥重要作用,是线虫防治的潜在药物靶标基因之一。

谷胱甘肽S－转移酶基因P1的研究进展

谷胱甘肽Ｓ－转移酶Ｐ１－１在癌变细胞和抗药性肿瘤细胞中表达水平发生变化，提示可以作为恶性转化及肿瘤抗药性的标志物．对大鼠谷胱甘肽Ｓ－转移酶Ｐ１基因上游调控序列的研究发现在－２．５ｋｂ及－２．２ｋｂ各存在一增强子序列ＧＰＥⅠ，ＧＰＥⅡ，－４００ｂＰ存在一沉寂子．ＧＰＥⅠ、沉寂子上均至少结合有３种反式作用因子．人谷胱甘肽Ｓ－转移酶Ｐ１基因上游区域中迄今尚未发现增强子或沉寂子，但却发现了胰岛素及视黄酸的应答序列，在癌变细胞和抗药性的肿瘤细胞中该基因表达的调控机制有别于正常细胞．

鱼虾贝肝脏sGST去毒酶基因的研究

谷胱甘肽S-转移酶(glutath ione S-transferase,GST)是代谢多种内源或外源毒性物质之解毒酶系统的重要组成部分,有胞液和膜结合两种形式,以胞液GST(sGST)为主。鱼虾贝肝脏sGST去毒酶基因对其体内农药、藻毒素等毒物的去除起关键作用。简要报道本实验室有关海淡水鱼虾贝肝脏sGST去毒酶基因克隆、表达调控及转基因的研究进展,并简述鱼虾贝肝脏sGST去毒酶基因研究对我国海淡水鱼虾贝健康养殖发展与食用安全保障的重大意义。

火龙果HpGST基因克隆及表达分析

为探究火龙果(Hylocereus)谷胱甘肽S-转移酶基因(HpGST)的功能,克隆了HpGST基因的cDNA序列,并进行生物信息学及表达分析。结果显示:HpGST序列全长为666 bp,编码221个氨基酸,编码蛋白属于非分泌型不稳定亲水性蛋白,亚细胞定位预测其于细胞质中发挥作用;系统进化树显示其与藜麦亲缘关系较近,属谷胱甘肽转移酶Tau家族;实时荧光定量PCR分析结果显示,HpGST在火龙果不同色泽类型品种果肉中均有表达,在有色素累积的紫肉和粉肉类型中表达量均显著高于无色素累积的白肉类型,表达趋势均为先上升后下降,其表达量与甜菜素含量呈现正相关,且在不同色泽类型品种中表达趋势与甜菜素累积趋势高度一致,推测HpGST基因在火龙果甜菜素合成与分布中发挥重要作用。

近江牡蛎4种类型GST基因cDNA全序列的克隆与分析

为从分子水平上研究不同类型谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-transferase,GST)基因在近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)等贝类体内代谢去毒过程中的作用,采用RT-PCR及RACE法,分离、克隆得到近江牡蛎肝脏4种类型GST基因cDNA全序列.序列分析结果表明,mu、pi、omega、sigma4种类型GST基因cDNA全长分别为970bp、773bp、999bp、1277bp,分别编码215、207、242、203个氨基酸.构建系统进化树发现,除太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)pi型GST外,所有类型GSTs序列都能各自聚集成一簇.

细胞质雄性不育棉花的转基因恢复系的选育

用根癌农杆菌介导法 ,将谷胱甘肽S 转移酶基因 (gst)导入待改良的棉花细胞质雄性不育的恢复系中。从转化植株的后代中 ,筛选到一个对雄性不育系具有强恢复力的恢复系 ,暂记为“浙大强恢”。“浙大强恢”与受体恢复系“DES HAF2 77”比较 ,对不育系的恢复力提高了 2 5 .8% ,从而使杂种F1单株结铃数多 3.6个 ,不孕籽率降低了10 .1% ,皮棉产量提高了 10 .6 %。以基因 gst作为探针进行的Southern和Northern核酸杂交分析表明 ,“浙大强恢”中含有外源基因 gst,并有较高水平的表达。

结直肠癌患者FOLFOX化疗与GSTP1,XRCC1基因多态性的研究

目的：探究结直肠癌患者 FOLFOX化疗与 GSTP1，XRCC1基因多态性的关系。方法选取湖南省肿瘤医院2014年1月～12月收治的结直肠癌术后患者60例作为研究对象，给予改良 FOLFOX方案化疗，并测定患者 GSTP1， XRCC1基因序列多态性，统计患者疗效并探究疗效与GSTP1，XRCC1基因序列多态性的关系。结果患者完全缓解与部分缓解的例数和患者稳定与进展的例数与患者的性别、年龄、肿瘤位置、病理分化、TNM分期无关（χ^2＝0.136～1.837，P值均＞0.05）；携带 GSTP1 A／A基因型患者41例（68.3％），携带 A／G基因型患者14例（23.3％），携带 G／G基因型患者5例（8.3％），GSTP1基因野生型（A／A）患者治疗有效率低于 GSTP1基因突变型（A／G＋G／G）患者（χ^2＝4.493，P＝0.034）。携带 XRCC1 G／G基因型患者35例（58.3％），携带 G／A基因型患者22例（36.7％），携带 A／A基因型患者3例（5％），XRCC1基因野生型（G／G）患者治疗有效率高于突变型（G／A＋A／A）患者（χ^2＝4.691，P＝0.030）。结论研究表明结直肠癌患者 GSTP1（A／A），XRCC1（G／G）基因多态性与 FOLFOX化疗的敏感性相关。

柑桔全爪螨噻螨酮抗性与敏感品系GST基因表达差异分析

为了明确谷胱甘肽S-转移酶(glutathion S-transferases,GSTs)基因与柑桔全爪螨Panony-chus citri抗性的关系,通过BLAST搜索,对柑桔全爪螨转录组数据库的GST基因进行鉴定,进一步采用RPKM法分析柑桔全爪螨噻螨酮敏感品系(SS)和抗性品系(RS)的GST基因表达差异。从柑桔全爪螨转录组中获得了30条GST基因,11条基因属于Delta家族,10条属于Mu家族,6条属于Kappa家族,2条属于Omega家族,1条属于Zeta家族,同一家族的基因聚在同一进化分支上;两个品系有5条GST基因表达没有差异,此外,抗性品系中有16条发生了下调,有9条GST基因发生了上调;抗性品系上调倍数最高的3个GST基因分别是GSTd6、GSTm5和GSTm4,log_2(RPKM_(RS)/RPKM_(SS))分别仅为1.05、0.74和0.71,荧光定量PCR分析测得上调倍数分别仅为1.13、1.42和1.21,上调倍数均不高。推断,GST基因上调可能不是柑桔全爪螨对噻螨酮产生抗性的重要原因。

野桑蚕GST-Omega1基因在草地贪夜蛾Sf9细胞中的表达

谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs)是昆虫的重要解毒酶之一。为了研究野桑蚕Bombyxmandarina中谷胱甘肽S-转移酶在真核表达系统中的表达情况。本研究通过RT-PCR从野桑蚕中肠中获得GST-Omega1基因的cDNA序列,该基因的开放读码框为771bp,编码256个氨基酸。对推导的氨基酸序列用NCBI的蛋白质Conserved Domains工具进行在线分析,结果显示GST-Omega1的氨基酸序列中具有Cys38和8个GSH结合位点的Omega类基因保守序列。对所获得的基因克隆进表达载体pFastBacHT b中获得pFast-GST-Omega1,将其转化DH10Bac感受态细胞,获得Bac-GST-Omega1重组病毒DNA,用脂质体法转染草地贪夜蛾Sf9细胞,获得重组病毒。对表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析,能检测到一条分子量约为33kD的特异性条带,与推导的融合蛋白大小相符,该目的蛋白的表达量占总蛋白的14.4%。目的蛋白经His.Bind树脂纯化,用Lineweaver-Burk作图法测定其K和V,结果显示其K为2.81μmol/L,V为2.70μmol/(mg.min)。