漆酶N端融合His-tag或S-tag标签促进其在大肠杆菌中可溶性表达

来源于地衣芽孢杆菌的漆酶具有催效率高,底物范围广等优点在工农业等领域具有重要的应用前景,但该酶在外源基因表达系统中的表达量低,影响了其在工农业等领域的应用。His-tag和S-tag两种标签由于具有分子量小,且一般不影响外源蛋白性质等特点,在外源蛋白的纯化和检测中具有重要的应用。本研究发现将来源于地衣芽孢杆菌的漆酶Cot A的N端融合Histag或S-tag构建于p ET-22b载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3)后可以显著提高其在大肠杆菌中的可溶性表达量,其表达量较N端无融合标签的构建,His-tag可提高漆酶表达量约为37倍,S-tag约可提高20倍,His-tag与S-tag共作用约可提高28倍。

采用S-Tag的M-DSP片上存储DMA访问优化

针对自主设计的M-DSP,提出并设计实现了一种基于Tag副本(S-Tag)的片上SRAM DMA访问数据相关性维护机制,该机制以流水化方式实现,在基本对CPU无打扰的前提下,有效支撑了DMA数据的无阻塞传递。仿真和芯片实测结果表明,该机制硬件开销较小,并在有效带宽和带宽利用率上均优于已有典型同类芯片。

硫化氢介导的S-巯基化修饰及其化学检测技术

硫化氢(hydrogen sulfide, H_(2)S)是继一氧化氮和一氧化碳之后的第3种内源性气体信号分子,通过影响细胞信号通路调节机体各个系统,具有广泛的生理和病理作用。近年的研究发现,H2S的作用主要通过对靶蛋白进行S-巯基化修饰,改变其结构,影响其活性、稳定性以及蛋白质之间互相作用,进而调控细胞内信号通路及相关生物学过程。本文基于国内外对S-巯基化修饰的研究,主要综述了:S-巯基化修饰的研究现状,详细总结了目前已揭示S-巯基化修饰及其具体半胱氨酸(cysteine, Cys)位点的研究,并进一步总结了S-巯基化修饰与S-亚硝基修饰之间的关系;S-巯基化修饰的反应类型,3种化学检测(马来酰亚胺法、改良生物素转换法和标记转换法)方法的检测原理和特点,通过S-巯基化修饰检测的条件和应用范围,将这3种方法进行对比,并对各方法在检测过程中应注意的事项进行了讨论。根据作者在S-巯基化修饰研究方面积累的经验,重点阐述马来酰亚胺法检测过程中,细胞和组织样品的制备及其较详细的实验步骤。此外,本文还讨论了当前S-巯基化修饰检测方法存在的不足及该领域未来亟待解决的问题,为S-巯基化修饰的相关研究提供参考。

智慧地铁定位设备管理系统设计

智慧地铁设备管理系统是基于“地铁北斗定位系统首都机场线示范应用研究”项目开发的定位设备管理系统。该系统采用B/S架构,通过前后端分离的开发方法,应用node.js、MyBatis、MySQL数据库开发。通过对系统的详细分析解读,展现了系统的架构设计、数据库设计、功能设计以及部分重要功能的实现。其中,定位设备管理系统的用户分为员工、管理者、系统管理员;功能模块分为设备管理、统计查询、员工管理、系统管理等。在讨论课题研究意义的基础上,对系统整体规划进行分析展示,详细阐述系统各模块设计细节。系统通过设备维修警告操作,使管理人员更方便地管理维修配套的定位标签和基站,满足了对“人、物、料”的管理需求。

基于Hash函数的RFID系统防碰撞算法的研究

防碰撞算法是RFID系统的关键技术之一;针对动态帧时隙ALOHA算法(EDFSA)的局限性,提出了一种基于Hash函数的防碰撞算法;在算法中,标签通过Hash函数选择时隙发送信息,阅读器通过精确的标签数目估计方法来动态改变帧长度,从而提高了系统识别效率;文中详细介绍了算法设计流程,通过建立数学模型对算法进行分析,证明了系统识别效率期望值突破了36.8%的限制,仿真实验进一步证明了该算法在识别大量标签时效率明显优于动态帧时隙ALOHA算法。

整合型学习者语料库平台的规划与实现——以中国日语学习者语料库CJLC的构建为例

建立学习者语料库能为二语习得等方面的研究提供新的思路和方法。但是,迄今为止的语料库建设由于缺乏统一的平台支持,存在着协同困难、重复劳动多以及升级、版权保护难等问题。通过构建整合型学习者语料库建设应用平台则能够极大地提高建设的效率和效果。

茜素红S对扁吻鱼幼鱼的急性毒性试验

为了解茜素红S对扁吻鱼(Aspiorhynchus laticeps)幼鱼的急性毒性,在水温10℃下,采用半静态法对体重范围(5.8±0.6)g的扁吻鱼幼鱼进行了试验。结果表明,茜素红S浓度为400 mg/L时,96 h死亡率为0;当茜素红浓度为900 mg/L时,72 h全部死亡;茜素红S对扁吻鱼幼鱼的24、48、72、96 h的半致死浓度分别为788、718、651、618 mg/L,安全质量浓度为179 mg/L。说明茜素红S对扁吻鱼幼鱼的毒性为低毒性,适合其标记放流。实际工作中,建议选用浓度179～400 mg/L作标记,在保证存活率的基础上,取得较好的标记效果。

Lib2.0环境下图书馆信息服务的变革

论文介绍了Lib2.0的基本理论及国内外发展现状,比较分析了博客、RSS、标签、Wiki 4种Lib2.0的主要应用方式在国内外的应用情况,提出了Lib2.0在实践中存在的问题及未来发展趋势。

家蚕EST数据库的应用现状及展望

家蚕是重要的经济昆虫,也是鳞翅目昆虫的主要模式生物。表达序列标签(EST)在家蚕研究中的应用越来越受到关注。本文主要介绍了EST数据库的建立及其在家蚕研究中的应用现状,展望了EST在家蚕中的研究趋势。

基于用户标签的微博推荐算法

为了解决推荐算法中用户标签稀疏、推荐准确度不高的问题,提出了一种基于用户标签的微博推荐算法。利用TextRank排序方法提取用户发布微博中的关键词,并对该关键词进行扩展,将其作为表示用户兴趣的标签;再根据微博的效应函数和生命周期形成待推荐的微博列表,计算用户标签及其同义词在待推荐微博列表中出现的次数,将出现次数较多的TOP-k条微博推荐给用户。通过实验验证,该算法能够有效地解决用户标签的稀疏性问题,并能提高推荐算法的准确性。

喀什河新疆裸重唇鱼标记方法的研究

2019年12月—2020年9月,对1+~2+龄体质量(3.06±1.18)g、2+~3+龄体质量(51.15±8.43)g和3+~4+龄体质量(124.21±22.87)g新疆裸重唇鱼(Gymnodiptychus dybowskii)眼后缘的透明表皮下,采用可见植入荧光标记(VIE)5 mm、在背鳍前皮下肌肉用金属线码标法(CWT)标记、用浓度100 mg/L茜素红S侵泡荧光标记法(ARS)和背鳍正下方的皮下肌肉中的被动集成应答器标记(PIT),以探究不同标记方法对新疆裸重唇鱼的适用性。标记后各组鱼单独饲养,ARS法的鱼养殖90 d,VIE、CWT和PIT标记法的鱼养殖270 d。首月后,2个月采样一次,测定各组的生长、存活率、标记保持率等。结果表明:ARS标记各组90 d的标记保持率在95%以上,但检测需解剖标记鱼;CWT组小型鱼270 d存活率为76%,存活个体主要为较大个体,对中、大型组存活率影响小;VIE组对小型鱼存活率的影响显著(P<0.05),对中、大型鱼影响小,270 d存活率在97%及以上;PIT组对小型鱼存活率影响显著(P<0.05),对中型鱼生长有一定影响。存活率、标记保持率及生长对比表明,今后大规模标记放流体质量5 g以下的新疆裸重唇鱼应选择ARS浸泡;5 g以上放流可选择CWT;40 g以上短期(150 d)标记可选择VIE;100 g以上小规模放流可选择PIT。

有源电子标签低功耗防冲突协议设计

重点介绍基于低功耗单片机ATmega48和低功耗射频芯片RFM12S的有源电子标签的硬件设计、低功耗实现,以及防冲突算法的解决思路。该有源电子标签适用于岩土加固工程中的锚杆注浆现场数据的采集记录,也可用于车辆出入信息采集与控制,以及地下矿井人员定位等有远距离识别与控制需求的系统。

同一试样上的多级加载动弹模量和阻尼比试验

动弹模量和阻尼比是土动力分析中最重要的参数,利用动三轴仪器对重塑黏土进行试验,研究了一个试样改变试验围压、固结比进行多级试验的方法,考虑先期应力大小,提出了2种试验方法,并与常规方法进行比较。结果表明:方法 1得到的动弹模量、阻尼比与常规方法相差很小,但方法 2得到的动弹模量较常规方法大,采用方法1代替常规方法可有效节省试样数量;根据黏性元件理论分析了振动频率对动弹模量的影响,并通过试验得到了频率对黏土动力特性的影响,最后研究了一个试样进行多级频率试验的方法,得出先期较大频率动荷载对后期较小频率试验影响很小,但先期较小频率动荷载会影响后期较大频率的试验,引起动弹模量衰减,同时造成最大阻尼比减小;一个试样进行多级频率试验时,先进行大频率试验,后进行小频率试验,试验成果与常规试验一致。研究成果有利于提高土动力测试技术,对动力特性研究有积极作用。

基于EST-SSR标记的MCID法鉴定冬瓜种质资源

种质资源鉴定是研究与利用冬瓜种质资源的基础。为了明确冬瓜种质资源遗传多样性,本研究基于表达序列标签-简单重复序列(EST-SSR)分子标记的人工绘制品种鉴别示意图(MCID)法鉴定40份冬瓜种质资源。利用筛选出的7对引物对冬瓜种质资源进行PCR扩增,应用MCID法构建冬瓜品种鉴定图。结果表明,利用7对引物扩增的特征性谱带能够将冬瓜品种在分子水平上区分开,同时能够构建40份冬瓜种质资源的品种鉴定图。利用Ntsys2.10e软件进行聚类分析,在遗传相似系数0.77处,将冬瓜资源分为3个类群。品种鉴定图能够快速地找到区分品种的引物,比聚类图更加直观。基于EST-SSR标记的MCID法是一种有效的冬瓜资源鉴定方法。本研究对冬瓜资源鉴定具有重要意义。

人源内皮抑素在大肠杆菌中的可溶性表达

为高效制备人源内皮抑素(human endostatin,hEDN),解决其在大肠杆菌中的可溶性表达。该研究在大肠杆菌BL21(DE3)中分别构建了hedn单基因、融合标签共表达和融合表达系统,将重组菌在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导下进行摇瓶发酵,通过SDS-PAGE分析及串联飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight/ionization time of flight,MALDI-TOF/TOF)鉴定hEDN的表达情况。结果表明,在构建的重组菌中只有含有谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase,GST)促溶标签的重组菌株BL21(DE3)/pGEX-6p-1-hedn能成功实现hEDN融合蛋白的可溶性表达。进一步地,通过改变诱导温度、诱导时间、诱导剂IPTG浓度及加入诱导剂IPTG时间来优化hEDN融合蛋白的表达条件,最终确定hEDN融合蛋白的最佳发酵条件为20℃,8~12 h加入0.3 mmol/L IPTG诱导36 h。通过亲和层析(PrePack GSH Purose 4 Fast Flow预装柱)初步纯化得到hEDN融合蛋白,经重组PreScission蛋白酶(PreScission protease,PPase)酶切后得到分子质量约为22 kDa的目的条带,与hEDN理论分子质量相一致。该研究为人源多肽的可溶性表达与纯化提供了研究思路,同时对微生物发酵制备功能性多肽具有一定的借鉴意义。

一种改进的进程同步与互斥机制

给出了利用一般信号量机制实现一类常见的进程互斥问题的方法,在分析该方法不足的基础上,提出了一种改进的进程同步与互斥机制——标签信号量。论述了标签信号量的设计、定义及其在实现进程同步与互斥中的应用。实例表明,在实现进程同步与互斥时,标签信号量比普通信号量更简单高效。

基于B/S结构的场地自行车视频管理系统的建立

视频数据内容丰富、数据量大、编码格式多样化,管理起来较传统数据复杂。在分析总结了现有的几种视频管理方法后,本研究针对场地自行车训练比赛项目和视频数据的特点,设计建立了一个基于B/S结构,能快速检索、定位、调用相关视频的视频数据库管理系统,并重点介绍了以标签为基础的检索和流媒体输出的实现。该视频管理系统的服务器端软件配置容易,方便移植到不同的平台;客户端实现了完全的浏览器操作,与操作系统无关。对于其它运动项目中的短视频管理,系统具有一定的通用性。

大鼠Gs alpha亚基的原核表达和纯化

用 PCR的方法 ,在大鼠 Gs alpha亚基的 C端引入了 6个外源组氨酸 (即 6×His- Tag)并以此为纯化标记 .构成的表达载体 p QE60 /rat Gsα( L)在大肠杆菌 BL2 1 ( DE3)中获得了稳定的表达 .经 DEAE- Sephacel离子交换柱和 Ni- NTA Agarose亲和层析获得纯化的具有较高 [35S]- GTPγS结合活力的重组大鼠 Gs

金鱼草S位点选择性转座子标定体系的建立

栽培金鱼草 (AntirrhinummajusL .)中有许多分子生物学上研究得较为透彻的DNA转座子 ,但是它们的S位点已经失去了功能 (Sc)位点 ,故而为自交亲和。为了利用这些转座子进行S位点选择性的转座子标定实验 ,将一个来自栽培金鱼草花型基因Cyc的活跃转座子Tam5通过遗传重组的方法引入到与自交不亲和金鱼草种间杂种(A .majus×hispanicum)S位点紧密连锁的位置。限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)的分析证明该转座子距S位点约 3cM (centiMorgan) ,并且保持了较高的转位活性 ,其配子切除频率高达 2 0 %。同时 ,还讨论了花型和自交不亲和性基因连锁的可能的生物学意义。所建立的S位点选择性的转座子标定体系为详细研究金鱼草S核酸酶基因及其不同结构域在自交不亲和反应中的作用提供了新的技术平台。

产品防伪中伪随机数的应用技术研究

通过研究几种常用伪随机数生成算法的实现原理,在对其实验数据概率分布和周期性等进行深入分析的基础上,针对现有伪随机数算法冗余度较高和复杂度不够且被预测可能性较大的问题,提出一种基于二次种子的新改良算法。该算法结合伪随机数产生方法与二次性思想,生产出的伪随机数简单且有效的克服先前算法在冗余度和复杂度上的不足,并且充分满足了产品防伪的要求。通过一个产生服装防伪吊牌的比较性实验,表明了利用二次种子伪随机数算法在防伪领域的可行性与优越性。