抑制剂对Pichia生产S-腺苷甲硫氨酸的作用及机制

S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)是市场前景广阔的高价值氨基酸。为通过削弱胞内SAM消耗而进一步提高其积累量,作者在诱导型和组成型P.pastoris发酵后期添加3种抑制剂。首先考察其作用并比较其差异,然后分析其机制。结果显示,添加S-腺苷高半胱氨酸水解酶抑制剂Aristeromycin有助于SAM积累,但比较而言,其在诱导型酵母中最适添加质量浓度更低,很可能因为甲醇代谢导致的氧化胁迫使细胞对甲基化作用依赖性增强。添加多胺合成抑制剂DFMA有利于SAM积累,但添加过多对细胞生长和抗氧化不利。组成型酵母中添加7.5 g/L乙酸可通过抑制多胺生成而增强SAM积累。3种抑制剂均可有效提高P.pastoris中SAM产量。

毕赤酵母对甲醇胁迫的响应及其对蛋白表达的影响

醇氧化酶AOX1的启动子(P_(AOX1))被广泛应用于毕赤酵母表达外源蛋白,甲醇诱导可以使其表现出高效的转录活性,但甲醇诱导又可使毕赤酵母细胞产生过多的活性氧物质(ROS),诱发氧化胁迫响应和其他不利的生化生理响应,从而抑制蛋白的高效表达。综述了毕赤酵母对甲醇胁迫的响应及缓解甲醇胁迫的技术,并提出了UPR与甲醇胁迫响应交互作用机制的研究路线。