类志贺邻单胞菌7-63-5株及其多糖的研究

类志贺邻单胞菌O17血清型与宋内氏痢疾志贺氏菌的脂多糖结构一致,类志贺邻单胞菌7-63-5株属于O17血清型。实验中通过对该菌株培养特性、生化特征、免疫学特性的研究,证明其完全符合类志贺邻单胞菌特性。多糖的研究证明,类志贺邻单胞菌7-63-5株的O-特异性多糖无论从化学结构,还是免疫学特性上,都与宋内氏I相菌的一致。因此,类志贺邻单胞菌7-63-5株可以用以研究宋内氏痢疾多糖蛋白质结合疫苗。

宋氏I相/福氏1b痢疾双价抗原菌株的构建

以菌体内重组方法将脱失了部分毒力基因片段的宋氏痢菌Ⅰ相抗原质粒诱动到已脱失140Md毒力质粒的福氏痢菌1b中,构建成兼具福氏及宋氏“O”抗原的二价菌株。该菌株不含编码卡那霉素抗性基因的Tn5;连续传25代仍对宋氏及福氏1b痢菌O抗血清呈凝集反应;质粒电泳图显示该二价菌株拥有供体菌赋予的75Md的质粒带。

宋氏痢疾杆菌Ⅰ相抗原突变菌株的构建和鉴定

宋氏Ⅰ相抗原是由宋氏痢疾杆菌的毒力质粒决定的。应用转座子Tn3和Tn5分别对宋氏Ⅰ相抗原质粒进行转座试验,获得16株Ⅰ相抗原突变菌株,用内切酶对Tn3插入突变质粒进行分析,发现宋氏Ⅰ相抗原质粒pFEG 0011被Tn3插入后,其Sal Ⅰ第1及第2片段均发生插入突变而不能表达Ⅰ相抗原,表明该2个片段均系与Ⅰ相抗原表达有关的DNA序列,由此推测Ⅰ相抗原表达的有关基因可能是分散的或分布较大的范围。

上海市闵行区志贺菌属菌群分布及药敏分析

目的了解本地区志贺菌属的分布和药物敏感情况,为痢疾的临床合理用药和预防控制工作提供科学依据。方法对2007年闵行区各肠道门诊监测点腹泻病人的肛拭标本进行细菌分离培养、鉴定和血清分型,并用K-B法进行药物敏感试验。结果132株志贺菌中,B群福氏志贺菌99株、D群宋内志贺菌33株,未分离出其他群型的志贺菌;132株志贺菌对四环素、复方新诺明、氨苄西林、利福平和萘啶酸耐药显著,均>84%,对庆大霉素、环丙沙星、阿莫西林相对比较敏感,耐药率为8.0%～0%,但B群与D群之间具有差异显著性,头孢类也具有一定耐药性。结论本地区福氏志贺菌和宋内志贺菌对环丙沙星、阿莫西林、庆大霉素敏感,对复方新诺明、氨苄西林、四环素、萘啶酸、利福平等其他多种抗菌药物耐药显著,应加强耐药性监测和防治。

重组人宋内痢疾杆菌脂多糖抗独特型抗体重链可变区基因的高效表达及纯化

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）从人源噬菌体抗体库中筛选出的宋内痢疾杆菌脂多糖抗独特型抗体基因扩增了重链可变区基因，将其克隆到表达载体ｐＧＥＸ２Ｔ内，转化大肠杆菌ＤＨ５α，获得高效表达，表达量占全菌总蛋白质的４０％左右，表达出的融合蛋白分子量为４×１０４，以包涵体形式存在。将此融合蛋白包涵体变性、复性后通过谷胱甘肽亲和层析柱（ＧＳＴＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱），得到电泳纯的融合蛋白，每升培养物能纯化到２０～３０ｍｇ融合蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明宋内痢疾杆菌脂多糖鼠单抗（５Ｂ１２）能特异地结合到分子量４×１０４的融合蛋白的带上。ＥＬＩＳＡ试验显示融合蛋白与宋内痢疾杆菌脂多糖单抗（５Ｂ１２）有结合活性，而与无关单抗，如大肠杆菌Ｊ５株单抗（Ｅ３）、炭疽杆菌单抗（Ｆ８ＦＡ）、鼠伤寒沙门氏菌单抗（Ｍ４６７）及乙肝病毒单抗（Ｍ１１）不结合。