秦岭地区华中五味子SSR遗传多样性分析

目的：分析秦岭地区野生华中五味子的遗传多样性。方法：应用SSR分子标记进行遗传多样性分析。结果：9对SSR引物共检测到61条条带，每对引物扩增出5～11条，平均每对引物可扩增出6．8条，多态性比率为86．88％。遗传分化系数（Gst）为0．3524，表明秦岭地区华中五味子遗传变异主要存在于居群内，基因流（Nm）为1．1850，说明居群间存在一定基因流。通过遗传多样性参数比较，洋县居群遗传多样性最高。聚类分析可划分为2大类，第1类包括平利县、山阳县和宁强县居群；第Ⅱ类包括太白县和洋县居群。结论：秦岭地区华中五味子遗传多样性丰富，应优先选择陕西汉中市、宝鸡市和商洛市地区华中五味子居群实行就地保护与扩繁，以保证野生华中五味子可持续发展和利用。

华中五味子ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

系统研究了华中五味子ISSR-PCR反应体系中的主要影响因子,确立华中五味子ISSR-PCR最适反应体系,并筛选出12条有效引物。单因子实验结果显示,华中五味子ISSR-PCR反应体系中各主要成分的适宜浓度范围为,Mg^2＋1.503.50 mmol.L^-1,dNTPs 0.100.35 mmol.L^-1,引物0.250.60μmol.L^-1,Taq酶0.501.50U。4因子3水平正交实验确立了最适反应体系,即20μL体系中包含2.50 mmol.L-1Mg2＋、0.20 mmol.L^-1dNTPs、0.25μmol.L^-1引物、1.50 UTaq酶、60 ng DNA模板、2.50μL 10×PCR Buffer。本研究为华中五味子种质资源的评估及遗传多样性分析奠定基础。

华中五味子果实超临界CO_2萃取及挥发性成分GC-MS分析

研究超临界CO2萃取华中五味子果实的萃取工艺,探讨不同萃取压力、萃取温度、萃取时间、CO2流量条件等因素对萃取效率的影响,并结合GC-MS对超临界CO2萃取物所含挥发性成分进行定性分析.结果表明：最佳工艺为萃取压力30 MPa,萃取温度50℃,萃取时间40 min,CO2流量30～35 L/h.挥发性成分以烃类为主,占60%以上,其中相对含量最高的是衣兰烯,占10.21%,另外,还含有醇类、醛类、酸类和酯类等.

秦岭地区华中五味子天然居群ISSR遗传多样性分析

应用简单重复序列间区(ISSR)分子标记技术对分布于秦岭地区3个华中五味子天然居群的90份个体进行了居群遗传结构及遗传多样性分析.12条ISSR引物共检测到77个位点,其中66个为多态位点,多态位点百分率(P)85.71%.Shannon信息指数(I)为0.507(平方根法)、0.395(贝叶斯法),基因多样性指数(H)为0.348(平方根法)、0.382(贝叶斯法),表明华中五味子具有丰富的遗传多样性.遗传分化系数在0.052～0.106之间(φST=0.106、FST=0.082、GST=0.066,θST=0.052),基因流(Nm)在2.108～4.558之间,说明华中五味子居群间的遗传分化较小,其遗传变异主要存在于居群内;不同定义的遗传分化系数差值较大,不宜进行直接比较.推测华中五味子雌雄异株、风媒或虫媒授粉、广域分布等生物学特征是其遗传多样性形成的主要原因.

基于SSR标记的厚朴亲本及其子代群体的遗传多样性分析

以来自浙江遂昌的5株厚朴（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.）单株为母本,来自浙江磐安和富阳、江西分宜以及湖南沅陵的厚朴群体为父本,获得7个杂交授粉子代群体;并对5株母本单株进行自由授粉,获得5个自由授粉后代群体;在此基础上,采用SSR标记技术对厚朴亲本群体以及杂交和自由授粉子代群体的遗传多样性进行分析。结果表明：13对SSR引物扩增的片段长度为105~297 bp,共检测到54个等位基因,每个位点的观测等位基因数和有效等位基因数分别为4.2和2.6。总体上,杂交授粉子代群体的遗传多样性最高,其Shannon多样性指数（I）、Nei’s基因多样性指数（h）和期望杂合度（He）平均值分别为1.049 3、0.577 3和0.638 2;亲本群体的遗传多样性略低于其杂交授粉子代群体,其I、h和He平均值分别为1.022 1、0.559 7和0.601 3;自由授粉子代群体的遗传多样性最低,其I、h和He平均值分别为0.813 8、0.480 8和0.530 0。7个杂交授粉子代群体亲本间的Nei’s遗传距离为0.576 2~1.181 1,且与杂交授粉子代群体的遗传多样性呈正相关,但相关性不显著（R=0.392 4）。7个杂交授粉子代群体间的Nei’s遗传距离和遗传一致度分别为0.274 9~0.804 6和0.446 4~0.759 6,其中来源于同一父本的杂交授粉子代群体间的遗传一致度最高,且Nei’s遗传距离越大其遗传一致度越小。聚类分析结果表明：在Nei’s遗传距离为0.93处,供试的5个母本单株以及3个父本群体、7个杂交授粉子代群体和5个自由授粉子代群体可分成3类,其中来源于同一父本的杂交授粉子代群体及其父本群体具有较近的亲缘关系。研究结果显示：厚朴杂交授粉子代群体的遗传多样性水平明显高于其自由授粉子代群体,并且总体上高于其亲本,说明杂交授粉可加速厚朴群体间的基因交流,丰富其群体的遗传多样性。

LC-MS/MS法测定不同产地南五味子3种木脂素含量

目的建立HPLC-MS/MS法测定不同产地南五味子中五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素3种木脂素含量测定。方法供试品以95%乙醇超声提取10min,HPLC-MS/MS法分析。采用Eclipse Plus C_(18)(2.1×50mm,3.5μm)色谱柱,流动相为10m M乙酸铵-甲醇,梯度洗脱,电喷雾离子源(ESI),以多反应监测方式(MRM)进行正离子监测。结果五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素3个成分线性关系良好,线性范围分别为0.61~5015ng·mL^(-1)、531.9~6058.8ng·mL^(-1)、0.64~5230ng·mL^(-1)(r≥0.9944),平均加样回收率分别为89.3%、92.5%、87.8%,RSD分别为9.85%,6.40%、11.23%。结论该方法样品前处理简单、提取效率高、灵敏度高。南五味子中五味子甲素含量较高,五味子醇甲、五味子乙素含量较低,且各个地方含量差异较大。

南五味子类药材的鉴别研究

目的 为南五味子药材的鉴定提供依据。方法 用性状鉴别、扫描电镜和薄层色谱方法对不同产地华中五味子及其近缘种绿叶五味子、翼梗五味子和红花五味子果实进行生药性状、种子表面微形态和薄层鉴别。结果 依据种皮表面的微形态特征可以将华中五味子、红花五味子、绿叶五味子及翼梗五味子分为 3个类型。去氧五味子素(五味子甲素 ) (deoxyschisandrin)、五味子酯甲 (schisantherin A)的薄层定性表明产于陕西平利、河南栾川、山西阳城、湖南衡山的华中五味子、绿叶五味子和红花五味子果实中都含有五味子酯甲和五味子甲素 ;翼梗五味子果实中仅含有五味子酯甲 ,而甘肃小陇山、陕西留坝产华中五味子果实中检测不到这两种成分。结论 不同产地华中五味子、红花五味子、绿叶五味子及翼梗五味子的干燥果实可以依据种皮表面的微形态特征和薄层色谱结果加以鉴别。

华中五味子的营养成分与核型研究

华中五味子果实营养物质含量丰富，尤其是蛋白质、氨基酸、维生素和矿质元素的含量明显高于苹果和柑桔，是值得开发和利用的野果。核型分析表明：华中五味子的核型为原始的“１Ａ”类型，染色体数目为２ｎ＝２８条，核型公式为２ｎ＝２Ｘ＝２８＝２６ｍ＋２ｓｍ。在植物的系统进化过程中。

南五味子木脂素成分的HPLC含量测定及其变异规律

目的 :对南五味子的木脂素成分进行含量测定 ,探讨南五味子类药材木脂素成分的变异规律及其与地理分布的关系。方法 :高效液相色谱法。色谱柱 :SpherecloneLunaC1 8(2 ) (2 5 0× 4 6mm ,5 μm) ;流动相 :A .水 ,B .甲醇 ;梯度洗脱 :0～ 2 5min ,6 5 %～ 75 %B ,2 5～ 30min ,75 %B ,30～ 70min ,75 %～ 1 0 0 % ;检测波长 :2 5 4nm、2 80nm。结果与结论 :随着地理分布的不同 ,华中五味子果实木脂素成分的结构类型及其含量有显著差异。产于秦岭南侧、东侧、中条山及太行山南端的华中五味子果实含有主要的活性木脂素成分五味子酯甲、五味子甲素、安五脂素等 ,且总木脂素含量也较高 。

华中五味子抗氧化和细胞毒活性研究(英文)

我们研究了华中五味子的根、茎、叶、果实乙醇提取物对脂性自由基DPPH及超氧阴离子的清除作用,同时观察了四种不同提取物在体外对肿瘤细胞株的细胞毒作用。我们发现,华中五味子根的乙醇提取物清除自由基活性和对肿瘤细胞杀伤作用比茎、叶和果实的提取物都强,研究结果提示华中五味子的根可以作为抗氧化剂的新来源。

南五味子种子中木酯素类成分的高效液相色谱-电喷雾电离-质谱分析

目的:用高效液相色谱-电喷雾电离-质谱分析(HPLC-ESI-MS)法对南五味子种子中木酯素类成分进行了分析。方法:利用 HPLC-ESI-MS 对南五味子种子进行了初步分析研究。液相色谱条件为:色谱柱a:C_8柱(4.6mm×25mm,5μm),色谱柱 b:苯基柱(4.6mm×25mm,5μm);流动相:甲醇-水(60∶40);流速:0.4mL·min^(-1);质谱为Finnigan LCQ^(DECA)型液相色谱-电喷雾质谱联用系统。结果:得到了样品的总离子流图及相应色谱峰的 ESI-MS 质谱图,对其进行了解析,鉴别出五味子甲素、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子酯丙、五味子酯丁。结论:本方法快捷、简单、准确。

栾川华中五味子野生种质资源的表型性状研究

河南省栾川县是华中五味子的适生区,经全面调查,收集了24个品种的叶和果穗进行研究;根据果穗特征分为长穗稀疏颗粒和短穗紧凑颗粒两种类型,其中长穗型的颗粒大,而短穗型株产量较高;雄株叶片宽大且厚,适于开发调料及疏菜类食品。

华中五味子干燥材料DNA提取方法的研究

目的:建立一套适合从华中五味子硅胶干燥的幼芽中提取高质量DNA的方法,为进一步开展分子生物学研究奠定基础。方法:比较SDS法、STE-CTAB法、SDS-CTAB法以及经过作者改进的CTAB法,运用紫外光谱和电泳分析方法测定所得DNA样品的纯度与完整性。结果:四种方法中改进CTAB法所得DNA纯度最高,完整性好,其A260/A280值为1.81,A260/A230值为2.13,经稳定性试验证明该方法稳定。结论:改进CTAB法是一套适合从华中五味子硅胶干燥的幼芽中提取高质量DNA的方法。

秦岭华中五味子种子内源抑制物活性研究

研究了秦岭山区野生华中五味子种子内源抑制物存在部位及其抑制活性。以甲醇和蒸馏水分别对华中五味子种皮和种仁进行浸提,分别制备成5个不同质量浓度的粗提物,用白菜种子测定其抑制活性。结果表明,华中五味子种皮和种仁均含有能极显著抑制白菜种子萌发和幼苗生长的内源抑制物,且其抑制活性随着质量浓度升高逐渐增强。相同部位和质量浓度的甲醇粗提物的抑制活性高于蒸馏水粗提物,相同提取溶剂和质量浓度的种皮粗提物对白菜种子萌发和幼苗生长的抑制活性强于种仁。该结果表明,华中五味子种子内源抑制物的存在可能是其休眠期长、不易萌发的主要原因之一。

南、北五味子抑菌活性差异比较研究

用牛津杯法和平板二倍稀释法检测了2种五味子水提取物对8种细菌和1种真菌的抑菌活性差异.结果表明2种五味子提取物对8种供试细菌大肠杆菌ATCC25922和ATCC35218、普通变形杆菌CMCC49027、沙门氏菌CMCC50094、铜绿假单胞菌ATCC27853、枯草芽孢杆菌CM-CC63501、粪肠球菌CMCC32219和金黄色葡萄球菌ATCC25923都有明显的抑制作用,对真菌白色念珠菌ATCC10231不具有抑制作用,对同一种供试细菌北五味子的抑菌圈直径显著大于南五味子,最小抑菌浓度比南五味子至少高1个稀释倍数.

华中五味子AFLP反应体系的建立

目的:建立一个适于华中五味子研究用的AFLP反应体系。方法:以华中五味子硅胶干燥嫩叶为试材,采用改良CTAB法提取到高质量DNA。通过琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳对MseⅠ/EcoRⅠ双酶切、连接、预扩增和选择性扩增过程中的关键因素进行分析。结果:双酶切6h,片段主要集中在250～2000bp;连接产物和预扩增产物最适稀释倍数均为10倍;预扩增产物经选择性引物E-ACT/M-CAT和E-ACA/M-CAG扩增,琼脂糖电泳检测其主带分别集中在250～375bp和500～750bp,6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测及银染,条带清晰可辨。结论:该体系具有稳定性高、重复性好等优点,可用于华中五味子AFLP分析。

LC-UV法测定华中五味子中五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素含量

目的建立同时测定五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素的LC-UV含量测定方法。综合考察皖南山区野生华中五味子的内在品质,为该品种转为栽培品提供理论依据。方法采用LC-UV法,Agilent TC-C18(2)色谱柱(250 mm×4.6 mm I.D,5 um),以甲醇-水为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL/min,柱温30℃,检测波长为240 nm,测定五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素。结果皖南山区野生华中五味子中五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素平均含量分别为0.24%、0.46%、1.22%。结论皖南山区野生华中五味子中五味子酯甲平均含量为0.24%,符合《中国药典》2010版的要求:五味子酯甲含量不低于0.20%,可供药用。通过三指标的综合控制,为皖南华中五味子的品质评价和栽培提供理论支持。

土壤因子对南五味子中五味子酯甲含量的影响

通过分析南五味子5个产区土壤理化性质、土壤与药材中无机元素的含量,探讨了土壤理化性质及无机元素对道地药材南五味子有效成分的影响。结果表明:南五味子生长的5个产区土壤pH值在6.55～7.25,土壤有机质、全氮含量变化最大,变异系数分别为98.18%、93.58%;土壤pH值、全钾含量变化最小,变异系数分别为4.14%、16.60%。南五味子样品中五味子酯甲含量平均为0.33%,但五味子酯甲含量变化较大,变异系数为33.21%。相关性分析表明,土壤中Mn与南五味子酯甲含量相关性显著,说明Mn对南五味子酯甲的形成和积累有一定影响,其他土壤理化性质与五味子酯甲含量之间、土壤与南五味子中无机元素含量之间未呈现显著相关,即南五味子对土壤肥力要求不严格,适应环境能力较强。

南五味子药酒发酵条件优化

以中药南五味子为原料,以发酵液中酒精度、游离氨基酸含量及感官评价结果为指标,运用单因素试验和正交试验设计研究其发酵技术条件;同时进行南五味子直接发酵和提取有效成分后药渣发酵的工艺对比研究。结果显示,当发酵温度为32℃、接种量为0.5%、初始糖度为24%、pH值为5.0、发酵时间为7 d时,所得发酵液的酒精度为9°(V/V),游离氨基酸含量达每100 mL0.0714 g;直接发酵与药渣发酵的酒精度相同,游离氨基酸含量和感官评价方面,两者结果相近,但药渣发酵过程明显容易控制。

HPLC法测定华中五味子中五味子甲素含量

目的 :测定华中五味子中五味子甲素的含量。方法 :样品用环己烷超声提取 ,提取液过滤 ,蒸干 ,残渣用甲醇溶解后 ,经高效液相色谱仪测定。色谱柱 :PHENOMENEX C1 8(5 μm,4.6 mm× 2 5 0 m m)柱 ;流动相 :乙腈—甲醇—水 (15∶ 15∶ 10 ) ;检测波长 :2 5 4nm。结果 :华中五味子中五味子甲素与其它组分良好分离。五味子甲素保留时间分别约为 14.6分钟。五味子甲素对照品线性浓度范围 1.0～ 80 μg· ml- 1 ,r=0 .9996 ,平均回收率为 96 .5 3% ,RSD为1.44 %。结论 :本法灵敏度高、操作简便、结果准确 。