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SARS冠状病毒S蛋白S1片段基因克隆和变异分析
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作者 吴淑珍 张洪勤 +2 位作者 包其郁 毕云天 黄慧聪 《温州医学院学报》 CAS 2005年第1期16-18,共3页
目的 :获得SARS冠状病毒S蛋白S1片段基因的克隆。方法 :将SARS病毒RNA基因组逆转录合成cDNA ,PCR得到阳性条带 ,将其亚克隆到pUCm T载体中进行酶切及测序分析 ,并与Genbank中核苷酸序列进行同源性分析。结果 :阳性克隆经酶切鉴定 ,目的... 目的 :获得SARS冠状病毒S蛋白S1片段基因的克隆。方法 :将SARS病毒RNA基因组逆转录合成cDNA ,PCR得到阳性条带 ,将其亚克隆到pUCm T载体中进行酶切及测序分析 ,并与Genbank中核苷酸序列进行同源性分析。结果 :阳性克隆经酶切鉴定 ,目的基因片段长度为 1 90 5bp ,与Genbank中另外 4 5株的SARS病毒株的S蛋白S1片段基因比较 ,共有 1 3个位点发生突变 ,其中有 8处为同义突变 ,5处为错义突变。结论 :成功克隆SARS冠状病毒S蛋白S1片段基因 ,为该基因的表达及功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 sARs冠状病毒 s蛋白s1片段 基因克隆
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家蚕质型多角体病毒基因组片段1中的假定重叠基因检测
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作者 张仰齐 曹广力 +2 位作者 何蕾 薛仁宇 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期45-51,共7页
生物信息学分析结果显示家蚕质型多角体病毒(BmCPV)基因组s1片段中含有-个假定的重叠基因ORFX。为了检测该重叠基因ORFX是否在RNA和蛋白质水平有相应的表达产物,用大肠杆菌表达的重组ORFX蛋白制备多克隆抗体,对感染BmCPV的家蚕中肠... 生物信息学分析结果显示家蚕质型多角体病毒(BmCPV)基因组s1片段中含有-个假定的重叠基因ORFX。为了检测该重叠基因ORFX是否在RNA和蛋白质水平有相应的表达产物,用大肠杆菌表达的重组ORFX蛋白制备多克隆抗体,对感染BmCPV的家蚕中肠后部组织进行Westernblotting和免疫组化检测,结果在感染BmCPV第1~7天的家蚕中肠组织中没有检测到假定的ORFX蛋白。进一步基于假定重叠基因ORFX区域及其下游序列设计定量检测ORFX基因和s1片段转录本RNA总水平的引物RECPV-1/RECPV-2,以及定量检测S1片段转录本RNA水平的引物RECPV.3/RECPV-4,用引物Oligo(dT)/RECPV-2和Oligo(dT)/RECPV-4的反转录产物作为模板,对感染BmCPV的家蚕中肠组织中的S1片段转录本和假定的ORFX转录本进行定量PCR检测,结果在感染BmCPV第5~7天的中肠组织中均没有检测到假定的ORFX转录本。由此表明,BmCPV基因组S1片段中可能不存在假定的ORFX重叠基因。 展开更多
关键词 家蚕质型多角体病毒 基因组s1片段 重叠基因 免疫组化 定量PCR
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禽呼肠病毒S1基因编码蛋白合成机制研究进展 被引量:1
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作者 谭伟 黄莉 谢芝勋 《动物医学进展》 北大核心 2018年第4期82-86,共5页
禽呼肠病毒是正呼肠病毒属的重要成员之一,能感染禽类,直接危害肉鸡、蛋鸡、幼龄火鸡和雏番鸭的生长发育,甚至引起死亡,从而导致严重的经济损失。近年来,人们对禽呼肠病毒分子生物学方面的研究已有不少进展,特别是关于禽呼肠病毒的S1基... 禽呼肠病毒是正呼肠病毒属的重要成员之一,能感染禽类,直接危害肉鸡、蛋鸡、幼龄火鸡和雏番鸭的生长发育,甚至引起死亡,从而导致严重的经济损失。近年来,人们对禽呼肠病毒分子生物学方面的研究已有不少进展,特别是关于禽呼肠病毒的S1基因编码蛋白的机制。禽呼肠病毒的基因组含有10个双链RNA基因片段,其中的9个基因片段均是以核糖体扫描翻译机制来合成对应的病毒蛋白。但S1基因片段的结构较为特殊,其RNA基因片段含有3个相互重叠的基因编码区,并利用不同的翻译机制分别合成3种蛋白,即非结构蛋白p10、p17和结构蛋白σC。这3种蛋白的主要作用分别是引起病毒感染的细胞与周围正常细胞之间的融合,促进病毒在细胞内的繁殖,帮助病毒吸附易感细胞表面的受体等。论文着重介绍禽呼肠病毒S1基因编码蛋白的相关合成机制。 展开更多
关键词 禽呼肠病毒 s1基因片段 蛋白翻译起始机制
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Molecular characterization of a novel reovirus isolated from SARS patients with distinct S1 segment 被引量:1
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作者 LI HUA SONG JUN HE +5 位作者 HONG ZHU YU XIN SU RU TONG HUANG HONG YUAN DUAN PAN YONG MAO QING DUAN 《Journal of Microbiology and Immunology》 2006年第4期278-283,共6页
We reported a novel mammalian reovirus, designed BYD1, isolated from throat swabs of patients with severe acute respiratory syndrome (SARS), in 2003. In the present study, we firstly compared the genome electrophore... We reported a novel mammalian reovirus, designed BYD1, isolated from throat swabs of patients with severe acute respiratory syndrome (SARS), in 2003. In the present study, we firstly compared the genome electrophoretic migration patterns of reovirus BYD1 with 3 prototype reovirus strains by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and determined the complete nucleotide sequence of the S1 gene segment of BYD1 by single primer amplification technique. The electropherogram of BYD1 was different from those of the 3 prototype strains and any other reovirus isolates reported before. The entire S1 segment sequence of BYD1 is 1437 bp long with two meaningful open reading frames (ORFs). The longest ORF encodes σ1, the cell attachment protein, and the second longest ORF supposedly encodes σ1s, an important nonstructural virulence factor. The terminal sequences of SI segment are 5'GCUA and 3'UCAUC, which are consistent with those of other mammalian reoviruses. The highest homology of deduced σ1 amino acid sequence is 64% identity with known mammalian reoviruses. Phylogenetic analysis of both S1 nucleotide sequence and σ1 amino acid sequence indicated the BYD1 isolate belonged to a new clade of serotype 2 group. The results of this study showed that the BYD1 S1 segment was markedly different from those of isolates reported before and BYD1 was a novel human reovirus isolate. 展开更多
关键词 Reovims Mammalian reovims severe acute respiratory syndrome sARs
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呼肠病毒BYD株吸附蛋白σ1的原核表达及其抗原性鉴定
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作者 宋立华 何君 +4 位作者 朱虹 刘光桥 黄如统 貌盼勇 端青 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1093-1096,共4页
将呼肠病毒BYD株S1片段编码的细胞吸附蛋白基因连接至pET-28a(+),构建表达载体pET-28a(+)-S1,转化表达宿主菌E.coli BL21(DE3),分析表达载体能否表达预期大小的重组σ1,并进一步鉴定重组σ1的抗原性。SDS-PAGE实验表明,经IPTG诱导后,表... 将呼肠病毒BYD株S1片段编码的细胞吸附蛋白基因连接至pET-28a(+),构建表达载体pET-28a(+)-S1,转化表达宿主菌E.coli BL21(DE3),分析表达载体能否表达预期大小的重组σ1,并进一步鉴定重组σ1的抗原性。SDS-PAGE实验表明,经IPTG诱导后,表达载体能表达53kD左右蛋白质,与重组σ1的预期大小相符;免疫印迹分析表明重组σ1有较好的抗原性和特异性,可用于呼肠病毒诊断试剂的制备。 展开更多
关键词 呼肠病毒 s1片段 细胞吸附蛋白 原核表达
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新分离呼肠病毒基因组片段S1全长cDNA克隆及其序列分析 被引量:6
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作者 宋立华 苏裕心 +3 位作者 何君 朱虹 黄如统 端青 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2006年第1期15-17,21,共4页
目的:克隆测序新分离呼肠病毒的S1全长基因组片段,并对其进行序列分析。方法:从接种呼肠病毒的L929细胞中提取病毒基因组,用改进的单引物扩增技术获得S1片段的全长cDNA克隆井测定其全序列。结果:新分离呼肠病毒的S1片段长1437bp,... 目的:克隆测序新分离呼肠病毒的S1全长基因组片段,并对其进行序列分析。方法:从接种呼肠病毒的L929细胞中提取病毒基因组,用改进的单引物扩增技术获得S1片段的全长cDNA克隆井测定其全序列。结果:新分离呼肠病毒的S1片段长1437bp,其核苷酸序列与已知的1—3型呼肠病毒标准株的同源性分另1为59%,61%和48%;推测的cr1序列与标准株的同源性分别为52%,60%和26%。结论:新分离呼肠病毒的S1片段与目前已知的分离株相比有很大差异,有可能是2型呼肠病毒的一个独立分支。 展开更多
关键词 呼肠病毒 s1片段 序列分析
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