尼罗罗非鱼钙结合蛋白S100P基因的克隆及功能分析

为探究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)钙结合蛋白S100P基因(On S100P)的功能,根据从罗非鱼头肾转录组获得的On S100P序列设计特异性引物,克隆得到On S100P,并对其推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,利用荧光定量PCR技术,研究其在不同组织中的定位和表达水平及Poly(I∶C)刺激后该基因在各个组织中的表达模式,并表达与制备了重组蛋白,用于孵育尼罗罗非鱼头、肾、淋巴细胞后研究其对炎症因子转录的调控作用。结果表明:On S100P基因CDS长度为288 bp,可编码96个氨基酸,含有S100蛋白家族的保守结构域;系统进化树结果分析表明,尼罗罗非鱼同斑马丽鱼(Maylandia zebra)的S100P具有较高的同源性;组织分布分析显示,On S100P在尼罗罗非鱼的不同组织中均有表达,其中以肌肉和鳃的表达量最高;经Poly(I∶C)刺激后,罗非鱼肠道、头肾和脑组织中On S100P表达水平显著升高且刺激24 h后达到高峰;制备的On S100P重组蛋白(rOn S100P)可诱导肾淋巴细胞MIF、IL8、TNF-β及IL1-β的表达。研究表明,On S100P氨基酸序列具有S100保守结构域,与其他S100蛋白家族成员类似,可通过调节淋巴细胞炎症因子的表达影响鱼类的免疫应答。

S100P在肿瘤中的作用研究进展

S100钙结合蛋白P(S100P)属于S100家族的钙结合蛋白,具有典型的EF-手性结构,于1992年首次从胎盘中纯化。研究表明,S100P在肿瘤中表达异常,与多种肿瘤密切相关。它可以参与各种信号通路,如NF-κB、β-catenin和FAK/Src/AKT通路;还可以与晚期糖基化终末产物受体、埃兹蛋白、整合素α7等许多其他受体或配体相互作用,从而影响肿瘤的生物学行为。此外,S100P在癌症治疗与肿瘤耐药等方面也发挥着重要作用。本文仅就S100P在肿瘤发生发展、诊断和治疗中的作用进行综述。

良、恶性前列腺组织中S100P与Ki-67的表达

目的观察人良、恶性前列腺组织中S100P与Ki-67的表达及二者的相关性。方法应用免疫组化SP法检测15例正常前列腺组织、30例前列腺增生(prostatic hyperplasia,BPH)及30例前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织中S100P与Ki-67的表达,并分析二者在PCa组织中的表达有无相关性。结果 (1)S100P蛋白在正常前列腺组织及BPH组织中的阳性率(93.33%、90.00%)明显高于前列腺癌组(20.00%)(χ2=38.953,P<0.01);S100P蛋白在高、中、低分化PCa组织中阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Ki-67在PCa组织中阳性率(63.33%)明显高于BPH(13.33%)及正常对照组(6.67%)(χ2=22.763,P<0.01);低分化PCa组Ki-67阳性率比高、中分化组明显增高(P<0.05)。(3)PCa组织中S100P和Ki-67二者表达呈负相关关系,但无统计学意义(r=-0.077,P=0.689)。结论前列腺发生癌变后S100P与Ki-67表达分别会发生下调与升高,可能预示肿瘤更具增殖能力和侵袭性,联合检测二者有助于判断PCa的发展趋势及预后评估。

良恶性前列腺组织中S100P与AR的表达及临床意义

目的研究人良恶性前列腺组织中S100P与AR的表达情况并探讨二者表达的关系及临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测15例正常前列腺组织、30例前列腺增生症及30例前列腺癌中S100P与AR的表达情况,结合患者临床病理资料进行分析,并探讨二者的表达在前列腺癌发生发展过程中所起的作用及有无相关性。结果 S100P蛋白在正常前列腺组织及前列腺增生组织中的表达率(93.33%、90.00%)显著高于前列腺癌组(20.00%)(P<0.01);S100P蛋白在高、中、低分化前列腺癌组织中表达率差异无统计学意义(P>0.05)。AR在前列腺癌组织中阳性率(53.33%)显著高于前列腺增生症(16.67%)及正常对照组(13.33%)(P<0.01);高、中分化前列腺癌组AR阳性率较低分化组显著增高(P<0.05)。在前列腺癌组织中S100P和AR二者的表达无显著相关性(r=-0.325,P=0.080)。结论 S100P在前列腺癌组织中表达水平较良性组织中明显下调,而AR表达显著升高。S100P的表达与前列腺癌的分化程度无关,而随着癌组织分化水平变低AR的表达也显著降低。二者在前列腺组织中的表达未见显著相关性。前列腺发生癌变后S100P与AR分别会发生下调与升高,可能预示肿瘤更具增殖能力和侵袭性,联合检测二者有助于判断前列腺癌的发展趋势及评估预后。

非小细胞肺癌中S100A2、S100A4及S100P表达及意义

目的研究钙结合蛋白S100家族中S100A2、S100A4及S100P基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,阐明其与肺癌发生及转移的关系。方法以12例正常肺组织为对照,采用半定量RT-PCR技术检测17例腺癌和12例鳞癌及其癌旁组织中S100A2、S100A4及S100P mRNA的表达水平。结果(1)S100A2、S100A4及S100P mRNA在NSCLC中的表达量均高于癌旁和正常组织。(2)肺腺癌中三者mRNA表达量均高于癌旁和正常组织;肺鳞癌中S100A4和S100P mRNA的表达量高于正常组织。(3)根据不同的临床分期,S100A2、S100A4 mRNA在Ⅱ期与Ⅲ期中的表达量均高于Ⅰ期;S100P mRNA在Ⅲ期中的表达量高于Ⅰ期。(4)根据有无淋巴结转移,三者mRNA在有淋巴结转移癌组织中的表达量均高于无淋巴结转移的癌组织。(5)根据有无静脉癌栓,S100A4 mRNA在有静脉癌栓的癌组织中的表达量高于无静脉癌栓的癌组织。结论S100A4、S100A6、S100P在NSCLC中表达增加,尤其是在有淋巴结转移及TMN分期越高的癌组织中表达量增加,提示其可能与NSCLC发生,特别是转移有关。

结直肠癌组织中S100P，E—cadherin和Ki-67的表达及意义

目的研究人结直肠癌组织中S100P，E—cadherin和Ki-67的表达情况并探讨三者表达的关系及临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测80例结直肠癌及其癌旁正常肠黏膜组织、30例良性肠病中三者的表达情况，结合患者临床病理资料进行分析，并探讨三者间表达的相关性。结果①SLOOP蛋白在结直肠癌组织中的表达率（57．5％）显著高于良性肠病（6．7％）及癌旁正常组织（3．8％）（x2=66．234，P〈0．01）；较之对照组，淋巴结转移组（x2=4．940，P〈0．05）及晚期（DukesC＋D期）结直肠癌组（x2=5．693。P〈0．05）s100P蛋白的表达均显著升高；随着结直肠癌分化程度的降低，S100P蛋白的表达有升高的趋势。②结直肠癌组织中E-eadherin的表达率（52．5％）较良性肠痛（90．0％）及癌旁正常组织（93．8％）明显降低（x2=41．014，P〈0．01）；E-cadherin的表达与结直肠癌的分化程度、有无淋巴结转移、临床分期相关（P〈0．05）。③Ki-67在结直肠癌组织中的阳性指数（66．78％±9．77％）明显高于两对照组（31．40％±9．19％和7．14％±3．87％）（P〈0．01）；淋巴结转移组和晚期（DukesC＋D期）组Ki-67阳性指数（68．49％±9．27％和69．35％±8．78％）升高，但较对照组（65．44％±10．04％和65．74％±10．03％）差异无统计学显著性意义（P〉0．05）；Ki-67表达与其他临床病理特征无关。④三者间表达无显著相关性（P〉0．05），但不能排除在肿瘤进展过程中三者有间接的协同作用。结论结直肠癌组织中S100P和Kb67表达明显升高，而E—cadherin表达明显降低；SLOOP和E-cadherin与结直肠癌组织侵袭、转移密切相关；联合检测三者有助于判断结直肠癌的发展趋势及评估预后。

S100P在胃癌中的下调表达及意义

目的探讨S100P在胃癌组织中的表达情况及与胃癌临床病理参数间的关系。方法选取93例胃癌石蜡组织标本及相对应的部分冻存胃癌组织及其配对正常组织为研究对象,应用免疫组织化学、RT-PCR、Western Blot方法检测S100P在胃癌及癌旁组织中的表达。结果免疫组织化学分析表明,胃癌中S100P蛋白主要定位于胞质和胞核,在52.7%(49/93)的胃癌组织和几乎所有的正常胃黏膜中可检测到表达,与正常胃黏膜相比,胃癌组织中的表达明显下调,其下调表达与患者肿瘤的侵袭深度(P=0.006)及肿瘤的大小相关(P=0.001)。同时,S100P在核酸和蛋白水平的表达具有相关性(P=0.030),不能够作为独立的预后因素(P=0.347)。结论 S100P在胃癌组织中表达下调,其表达与肿瘤的侵袭转移及肿瘤大小相关,并可以作为判断患者预后的辅助指标。

基于Oncomine和GEO数据库分析S100P在胰腺癌中的表达及临床意义

目的阐明S100P蛋白在胰腺癌中的表达及临床意义。方法检索Oncomine和GEO数据库中有关S100P的信息,并对所获取的数据资料挖掘并进行二次分析,对S100P在胰腺癌中的作用进行分析。结果 Oncomine数据库中共收集了438项不同类型S100P的研究结果,关于S100P表达差异有统计学意义的结果有63项,其中S100P表达增高的有38项,表达降低的有25项。胰腺癌中高表达的研究有5项、低表达的有0项。共有11项研究涉及S100P在胰腺癌组织和正常组织中的表达,包括387例样本。在数据库中综合比较11项研究成果,发现与对照组相比,S100P在胰腺癌中的表达量高于正常组织(P<0.05)。通过分析GEO数据库中的数据集GSE28735,自身对照发现S100P在胰腺癌组织中的转录水平显著高于其癌旁组织(P<0.05)。不仅如此,通过挖掘GEO数据库,分析数据集GSE28735和GSE57495,发现高表达S100P的患者总体病死率较高,低表达S100P的患者预后较好(P<0.05)。结论通过深入挖掘Oncomine和GEO基因芯片数据库中肿瘤相关的基因信息,提示S100P mRNA在胰腺癌组织中呈现高表达,并与胰腺癌预后相关,其有望成为抗胰腺癌药物的重要治疗靶点。

S100家族新成员S100P与肿瘤关系的研究进展

近年来S100家族成员之一S100P在人类多种恶性肿瘤中的异常表达受到日益关注,其可能参与肿瘤细胞异常增殖、癌变、促进肿瘤浸润转移,与肿瘤分期及预后,乃至化疗药物耐药有关。本文就近几年关于S100P与恶性肿瘤关系的研究进展做一综述。

非小细胞肺癌中S100P的表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中S100P蛋白的表达情况及其与临床病理资料的相关性。方法应用免疫组织化学技术检测2011年06月-2013年06月南京医科大学附属苏州医院行肺癌根治术的103例NSCLC患者肿瘤组织及45例相应癌旁组织中S100P蛋白的表达情况,并对其表达与临床病理资料间的关系进行统计学分析。结果S100P蛋白在NSCLC肿瘤组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移组及Ⅲ期肿瘤组织中S100P蛋白的阳性表达率显著高于无淋巴结转移及I期肿瘤组织,差异有统计学意义(P<0.05);但其表达与肿瘤组织学类型及分化程度无相关性(P>0.05);S100P蛋白阴性组累积五年生存率明显高于阳性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论S100P蛋白在NSCLC组织中表达阳性率增高,且与淋巴结转移、TNM分期及累积5年生存率相关,提示其可能与NSCLC的进展和预后有关。

人结直肠癌组织中S100P蛋白的表达及临床意义

目的探讨人结直肠癌组织中S100P蛋白的表达情况,并分析其临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测60例结直肠癌组织及其癌旁正常肠黏膜组织、20例良性肠病组织中S100P蛋白的表达情况,并结合临床资料进行统计分析。结果 S100P蛋白在良性肠病、癌旁正常肠黏膜及结直肠癌组织中的阳性率分别为5.0%、3.3%和55.0%,后者显著高于前两者,差异均有统计学意义(P<0.01)。有淋巴结转移和发生远处转移(Ⅲ期～Ⅳ期)的结直肠癌组织中S100P蛋白的阳性率分别为73.1%和75.0%,显著高于无淋巴结转移及早期结直肠癌组织(Ⅰ期～Ⅱ期)S100P蛋白的阳性率41.2%和45.0%,差异亦均有统计学意义(P<0.05)。S100P蛋白在中-低分化结直肠癌组织中的阳性率高于高-中分化结直肠癌组织,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 S100P蛋白在人结直肠癌组织中高表达,且与肿瘤TNM分期、淋巴结转移相关。S100P蛋白可能在人结直肠癌的发生发展过程中发挥重要作用。

S100P在低分化膀胱癌和前列腺癌鉴别诊断中的价值

目的:探讨S100P蛋白对低分化膀胱癌和前列腺癌的鉴别诊断价值。方法:采用免疫组织化学法检测S100P蛋白在正常膀胱黏膜、低分化膀胱癌、正常前列腺及低分化前列腺癌组织中的表达。结果:S100P蛋白在低分化膀胱癌组织、正常膀胱黏膜组织中的阳性表达率分别为86.67%(26/30)和0%(0/15),表达差异有统计学意义(P<0.01);S100P蛋白在低分化前列腺癌组织、正常前列腺组织中的阳性表达率分别为6.67%(2/30)和93.33%(14/15),表达差异有统计学意义(P<0.01)。S100P在低分化膀胱癌和前列腺癌的阳性表达有显著差异(P<0.01)。结论:S100P对低分化膀胱癌和前列腺癌具有鉴别诊断价值。

胰腺癌新基因S100P与绿色荧光蛋白融合基因慢病毒载体的构建

目的:构建胰腺癌新基因S100P与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒载体。方法:实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增获得S100P的全外显子片段,使之克隆到带GFP荧光报告基因慢病毒表达载体质粒中,慢病毒包装质粒和穿梭质粒共转染293T细胞,包装成功后收集上清,浓缩,鉴定。取浓缩纯化后的病毒上清感染293T细胞和宿主胰腺癌细胞,荧光显微镜观察293T细胞的荧光表达,RT-PCR鉴定胰腺癌细胞中S100P的表达水平。结果:电泳鉴定结果与目的基因表达条带完全吻合,克隆测序结果与NCBI收录的S100P基因序列完全一致。重组慢病毒质粒可高效转染293T细胞,荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光。共转染后293T细胞上清可高效感染293T细胞,感染后宿主细胞中S100P高表达。结论:成功构建了S100P与GFP融合基因慢病毒表达载体,为进一步研究S100P基因的相关功能提供了适合的稳定转染载体。

S100P与Ki-67在肾盂尿路上皮癌中的表达及意义

目的:观察S100P与Ki-67蛋白在肾盂尿路上皮癌组织中的表达,分析其与肾盂尿路上皮癌临床病理特征的关系及探讨两者与肾盂尿路上皮癌发生、发展的相关性。方法:采用免疫组织化学SP法检测52例肾盂尿路上皮癌与46例正常肾盂黏膜组织中S100P、Ki-67的表达情况。结果:S100P在肾盂尿路上皮癌组织中的阳性表达率(86.5%45/52)明显高于正常对照组(30.4%14/46)(P<0.05),同样Ki-67在肾盂尿路上皮癌组织中的阳性表达率(80.8%42/52)明显高于正常对照组(26.1%12/46)(P<0.05);S100P、Ki-67在肾盂癌组织中的阳性表达与患者的性别、年龄无关(P>0.05),却与病理分级、临床分期有关(P<0.05);在肾盂癌组织中,S100P与Ki-67表达呈正相关,具有统计学意义(P<0.05)。结论:S100P与Ki-67过表达提示其在肾盂尿路上皮癌的发生、发展中具有重要作用,因此联合检测两者可能有助于判断肾盂尿路上皮癌生物学行为及预后评估。

膀胱良、恶性上皮肿瘤中S100P的表达及临床意义

目的:探讨S100P在正常膀胱组织和膀胱良、恶性肿瘤中的表达和临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测15例正常膀胱黏膜、20例内翻性乳头状瘤、72例膀胱癌(包括58例膀胱尿路上皮癌、9例膀胱腺癌和5例膀胱鳞状细胞癌)中S100P的表达。结果:膀胱癌中S100P的阳性表达率为86.11%(62/72),显著高于正常膀胱移行上皮0%(0/15)及内翻性乳头状瘤35%(7/20)两组(P<0.05);S100P的阳性表达率随浸润深度、病理分级的增加及淋巴结的转移而升高(P<0.05);S100P在膀胱尿路上皮癌中的阳性表达率较膀胱腺癌及鳞状细胞癌高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:S100P在膀胱癌组织中高表达,与膀胱癌的浸润及转移密切相关,其可能在膀胱恶性上皮肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。

CD147和S100P在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨CD147和S100P在胃癌组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学法分别检测CD147和S100P在36例胃癌组织、35例慢性胃炎组织及35例正常胃组织中的表达情况,分析CD147、S100P表达与胃癌患者临床病理特征的关系以及两者在胃癌组织中的相关性。结果:CD147、S100P在胃癌组织中的阳性表达率分别为83.3%和50.0%,与慢性胃炎组织和正常胃组织比较差异均有统计学意义(P<0.01),而慢性胃炎组织和正常胃组织比较无显著差异(P>0.05)。CD147、S100P在胃癌组织中的表达与肿瘤分化程度、TNM分期、侵及浆膜和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,CD147、S100P表达在胃癌组织中呈明显负相关(r=0.708,P<0.05)。结论:胃癌组织中CD147表达升高,S100P表达降低,均与肿瘤分化程度、TNM分期、侵及浆膜和淋巴结转移密切相关,提示两者可能共同参与了胃癌的浸润和转移。

S100P、GATA3、Ki-67在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

目的：探讨S100P、GATA3、Ki-67在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义。方法回顾性分析本院收治的2011年1月~2013年12月56例膀胱尿路上皮癌和32例尿路上皮增生患者的临床资料，应用免疫组织化学SP法检测56例膀胱尿路上皮癌和32例尿路上皮增生中S100P、GATA3、Ki-67的表达水平。结果 S100P、GATA3、Ki-67在膀胱尿路上皮癌中呈中至强阳性表达，在低级别非浸润性膀胱尿路上皮癌阳性表达率分别为90.0%、87.5%、85.0%，在高级别浸润性膀胱尿路上皮癌阳性表达率分别为93.8%、87.5%、100.0%；在尿路上皮增生中阳性表达率分别为3.1%、6.2%、6.2%。结论 S100P、GATA3、Ki-67在膀胱尿路上皮癌与尿路上皮增生的鉴别诊断中具有重要价值。

子宫内膜癌中S100P的表达及意义

目的检测子宫内膜癌组织中S100P蛋白的表达,探讨S100P的表达与子宫内膜癌临床病理特征相关性。方法收集83例子宫内膜癌组织标本,利用免疫组化的方法检测S100P的表达,分析S100P的表达与子宫内膜癌临床病理特征的相关性,以及S100P表达与下游基因RAGE表达的相关性。结果 S100P在子宫内膜癌中的表达率为34.9%(29/83)。在子宫内膜癌高FIGO分期组、雌激素受体(ER)或孕激素受体(PR)低表达组中,S100P的表达较高,但S100P与年龄、是否绝经、初潮年龄、生育胎数以及肿瘤大小无相关性。RAGE的表达率为44.6%(37/83),与S100P表达呈正相关。结论 S100P的表达与FIGO分期、ER及PR的表达相关,并且S100P的表达与RAGE的表达呈正相关。进一步阐明S100P表达及调控机制有可能为子宫内膜癌靶基因治疗提供新的依据。

S100P蛋白在结直肠癌中的表达及其意义

目的探讨S100P蛋白在结直肠癌中的表达及其意义。方法选取2016年6月至2018年12月南溪山医院就诊的80例结直肠癌患者进行研究,分别留取结直肠癌组织与癌旁肠黏膜组织;同时选取本院健康体检的80例健康人群,留取正常组织;3组分别以免疫组化方法对S100P蛋白的表达情况进行检测,并对其检测情况进行对比分析。结果结直肠癌组织中S100P蛋白阳性表达率为56.3%,癌旁肠黏膜组织及正常组织中S100P蛋白阳性表达率分别为3.8%、2.5%;结直肠癌组织中S100P蛋白阳性率明显高于另外两组,差异有统计学意义(P <0.05),但癌旁肠黏膜组织与正常组织比较S100P蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P> 0.05);结直肠癌组织中,中-低分化患者与高-中分化患者比较,S100P蛋白阳性率差异无统计学意义(P> 0.05);但S100P蛋白表达阳性率在淋巴结转移、TNM分期中差异有统计学意义(P <0.05)。结论结直肠癌中S100P蛋白呈现出高表达现象,且其表达情况与淋巴结转移情况、肿瘤TNM分期均有较大关联,在人结直肠癌发生发展中有重要价值。

S100P促进结直肠癌细胞增殖和迁移的机制探讨

目的:初步探讨S100P对结直肠癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法:构建S100P真核细胞表达载体转染不表达S100P的野生型SW480结肠癌细胞,细胞生长曲线法、MTT法检测S100P对SW480细胞生长增殖的影响;流式细胞术分析S100P基因转染后细胞周期分布的变化;细胞划痕实验评价S100P对SW480细胞迁移能力的影响;免疫印迹法检测S100P对SW480胞外信号调节蛋白激酶1/2磷酸化水平的影响。结果:稳定转染S100P基因的SW480-S100P细胞生长增殖速度加快,细胞群体倍增时间由20h左右缩短至15h。细胞周期发生明显改变,野生型及转染空载体SW480细胞的S期比例分别为(21.9±0.8)%、(21.4±1.8)%,而转染S100P的SW480细胞为(30.6±3.8)%,差异有显著性(P=0.007)。细胞划痕24h后,野生型SW480、空载体SW480和SW480-S100P 3株细胞的平均迁移细胞数分别为(11.3±3.1)个、(10.7±3.7)个、(19.3±3.5)个,组间有明显差异(P=0.035)。S100P基因转染SW480细胞后,胞外信号调节蛋白激酶1/2的磷酸化水平升高,分别是野生型SW480和空载体SW480细胞的4.2和3.7倍(P=0.001)。结论:S100P可显著影响结直肠癌细胞的生物学行为,通过受体影响胞外信号调节蛋白激酶1/2信号转导通路可能是其发挥促细胞增殖和迁移作用的机制之一。