胰腺癌新基因S100P与绿色荧光蛋白融合基因慢病毒载体的构建

目的:构建胰腺癌新基因S100P与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒载体。方法:实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增获得S100P的全外显子片段,使之克隆到带GFP荧光报告基因慢病毒表达载体质粒中,慢病毒包装质粒和穿梭质粒共转染293T细胞,包装成功后收集上清,浓缩,鉴定。取浓缩纯化后的病毒上清感染293T细胞和宿主胰腺癌细胞,荧光显微镜观察293T细胞的荧光表达,RT-PCR鉴定胰腺癌细胞中S100P的表达水平。结果:电泳鉴定结果与目的基因表达条带完全吻合,克隆测序结果与NCBI收录的S100P基因序列完全一致。重组慢病毒质粒可高效转染293T细胞,荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光。共转染后293T细胞上清可高效感染293T细胞,感染后宿主细胞中S100P高表达。结论:成功构建了S100P与GFP融合基因慢病毒表达载体,为进一步研究S100P基因的相关功能提供了适合的稳定转染载体。

S100P、GPC3在胃癌中的表达及其与病理特征的关系

目的研究S100钙结合蛋白(S100P)、磷脂酰肌醇蛋白多糖3(GPC3)在胃癌中的表达水平及其与病理特征的关系。方法选取2020年1月至2022年12月于河南科技大学第一附属医院行手术治疗的95例胃癌患者作为胃癌组,同期选取60例于医院体检的健康人群作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测两组受检者的血清S100P、GPC3水平;取胃癌患者术中胃癌组织及癌旁组织,采用试剂盒检测两组织中增殖与侵袭基因[蛋白酪氨酸磷酸酶(PTEN)、存活蛋白(survivin)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1(p21)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)]含量;采用Pearson法分析S100P、GPC3水平与胃癌增殖与侵袭基因表达的相关性,分析S100P、GPC3水平与患者临床病理特征关系,采用Logistic回归模型分析胃癌病理分级的危险因素。结果胃癌组患者的血清S100P水平为(11.87±3.49)μg/L,明显低于对照组的(17.53±4.11)μg/L,GPC3水平为(5.29±1.71)ng/mL,明显高于对照组的(3.31±0.54)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中的Survivin蛋白含量为(77.56±10.35)ng/mg,明显高于癌旁组织的(45.28±7.14)ng/mg,PTEN、p21、Caspase-3蛋白含量分别为(24.17±4.53)ng/mg、(30.48±4.57)ng/mg、(11.36±1.62)ng/mg,明显低于癌旁组织的(38.45±6.19)ng/mg、(47.82±7.20)ng/mg、(18.75±2.46)ng/mg,差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson法分析结果显示,Survivin蛋白表达与S100P呈负相关(r=-0.693,P<0.05),与GPC3呈正相关(r=0.686,P<0.05),PTEN、p21、Caspase-3蛋白表达与S100P呈正相关(r=0.704、0.667、0.652,P<0.05),与GPC3呈负相关(r=-0.745、-0.722、-0.693,P<0.05);S100P、GPC3表达水平与患者TNM分期、病情严重程度有关(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,S100P、GPC3表达水平为影响胃癌病理分级的危险因素(P<0.05)。结论胃癌患者血清S100P水平下降,GPC3水平上升,两者与病理分级、增殖侵袭基因表达密切相关,可作为评估胃癌早期的有效生物标志物。