猪S14R基因的克隆与原核表达

肝脏中表达的S14-related(S14R)基因是碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)的葡萄糖响应靶基因。S14R与S14在促进肝脏组织的脂肪酸从头合成中有重叠作用。为进一步研究猪S14R基因所编码蛋白质的生物学功能,本试验设计了一对引物,利用RT-PCR方法成功克隆了猪S14R基因,猪S14R基因长度为549bp(GenBank No.JN793537),开放阅读框为549bp。

甲状腺激素应答蛋白Thrsp在脂质合成中的调节作用

甲状腺激素应答点14蛋白(thyroid hormone responsive SPOT 14 homolog,Thrsp),也可简称为点14(Spot 14)或S14,仅表达于肝脏、脂肪和哺乳期乳腺等脂质合成活跃的组织,可被甲状腺激素和高糖饮食等刺激脂质合成的因子迅速上调。体外实验中敲低Thrsp可导致细胞的脂质合成降低;而在Thrsp敲除小鼠,乳腺的脂质合成下降、乳汁甘油三酯含量减少而肝脏的脂质合成反而增多。这是由于Thrsp的同源基因———S14R(S14 related)在除乳腺外全身组织广泛表达,但在乳腺不表达。Thrsp表达和脂质合成还影响正常乳腺上皮细胞的增殖,并与乳腺癌的恶性度和复发率高度相关。S14R在表达调节及促脂质合成两方面均与Thrsp存在重叠。S14R通过与脂肪酸合成的限速酶乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)结合,使之发生聚合,而显著提高酶活性,进而引起肝脏脂肪酸合成增多和甘油三酯堆积。Thrsp则通过与S14R形成异源二聚体,降低ACC的聚合与活性。显然这只能解释Thrsp敲除小鼠中肝脏的脂质合成为何增多,而Thrsp促进脂质合成的机制还有待于继续深入研究。总之,Thrsp与S14R是脂质合成的重要调节基因,在泌乳、乳腺癌生长与浸润、脂肪肝发生发展、胰岛素抵抗等生理和病理生理过程中起着重要作用。

脂肪酸心肌显像剂14(R,S)-氟-18-6-硫十七烷酸的制备和生物分布

目的 制备脂肪酸心肌显像剂 14 (R ,S) 氟 18 6 硫十七烷酸 ( 18F FTHA) ,并在小鼠体内进行初步评价。方法 以 8 溴 1 辛醇为原料 ,经醇氧化、丙基溴化镁格反应、水解、巯基取代、烷基化、酯化、酯水解等反应 ,合成标记前体FTHA OTs( 5 )。以氟化聚铵 (kryptofix/K + 18F)为亲核试剂 ,在乙腈溶液中与FTHA Cts( 5 )进行氟代亲核反应 ,经水解生成18F FTHA ,采用薄层层析 (TLC)和高效液相色谱 (HPLC)法检测放射化学纯度(RCP)。结果 RCP大于 92 % ,稳定性好。小鼠心肌摄取高 [( 2 8.70± 3.5 2 ) %ID/g ,10min],滞留时间长[( 18.6 3± 2 .98) %ID/ g ,12 0min],注药后 10和 12 0min的心 /血比值分别为 9.4 5和 17.2 5。结论 制备的18F FTHA放化纯高 ,稳定性好 。

心肌脂肪酸代谢显像剂18F-FTHA的自动化合成与生物学分布研究

目的实现心肌脂肪酸代谢显像剂14(R,S)-[18F]-氟-6-硫杂十七烷酸(18F-FTHA)的全自动化合成,并评价其在正常昆明小鼠体内的生物学分布特征。方法采用自动化合成模块以苄基-14-(R,S)-对甲苯磺酰基-6-硫代十七烷酸脂为前体合成18F-FTHA。并对其物理(性状、放射性活度、比活度、半衰期和放射性核纯度)、化学(化学纯度、放射化学纯度和室温稳定性)和生物学(毒性、无菌和细菌内毒素)性能进行鉴定。昆明小鼠20只,采用随机数字表法分为4组(每组5只),经小鼠尾部静脉分别注射18F-FTHA显像剂7.4MBq(体积<0.2mL),注射后15、30、60、90min时各处死1组,分别取心脏、肝脏、脾、肺、肾脏、肌肉和骨等主要器官和血液,称重并测定放射性计数,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)。组间数据比较采用配对t检验。结果合成时间约50min,合成产率为(10.0±1.7)%。18F-FTHA注射液为含10%乙醇的无菌、无内毒素、无色澄清透明溶液,pH值为6~7,比活度为65GBq/mmol,放射性核纯度≥99%,放化纯度>98%。正常昆明小鼠体内生物学分布实验结果显示,18F-FTHA在血液中清除快,心肌摄取高,非靶器官摄取较低。在注射显像剂后60min时,心肌、肺和肝脏的放射性摄取分别为(19.04±4.87)%ID/g、(3.05±0.52)%ID/g和(5.99±2.96)%ID/g,心肌与肺的摄取比值为6/1(t=0.27,P=0.01),心肌与肝脏的摄取比值为3/1(t=0.75,P=0.02),差异均有统计学意义;肝脏摄取呈先高后低的趋势,在15min和30min时肝脏摄取略高于心肌摄取。结论实现了18F-FTHA的自动化合成,其放化纯度高,稳定性好。物理、化学和生物学鉴定结果证实其安全可靠,小鼠体内生物学分布实验证实其心肌摄取高于非靶器官,可用于实验研究。